發(fā)布時間：2020-05-26 09:01

【摘要】：目的利用一氧化氮(NO)前體—L-精氨酸制作小鼠胃排空障礙模型,預(yù)先給以姜黃素灌胃,觀察姜黃素減輕小鼠胃排空障礙的作用是否與胃組織中啟動慢波蠕動的卡介間質(zhì)細(xì)胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)相關(guān)信號通路有關(guān)。通過檢測ICC特異性酪氨酸激酶受體(c-kit)及其特異性配體(Stem Cell Factor,SCF)、鈣激活氯離子通道功能蛋白(Anoctamin-1,Ano1)以及ICC與平滑肌細(xì)胞間的縫隙連接蛋白43(connexin 43,Cx43)的變化,研究姜黃素的作用機(jī)制。方法36只4周齡健康昆明種雄性小鼠,體質(zhì)量22~25 g,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為對照組、姜黃素組、L-精氨酸組和姜黃素+L-精氨酸組,每組9只。姜黃素組和姜黃素+L-精氨酸組給以0.2 ml姜黃素(200 mg/kg)混懸液灌胃,每天一次連續(xù)15天,其它組給以等量的溶媒溶液灌胃作為對照。從灌胃的第11天開始,L-精氨酸組、姜黃素+L-精氨酸組小鼠分別給以0.2 ml L-精氨酸(2 g/kg)混懸液灌胃,共5天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,小鼠禁食24小時,可以自由飲水。測定胃排空率前每只小鼠灌胃0.8 ml阿拉伯膠混懸液一次,20分鐘后進(jìn)行脫臼處死小鼠。取部分胃組織提取總m RNA,運(yùn)用實(shí)時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測c-kit、SCF、Ano1以及Cx43的m RNA表達(dá)量;運(yùn)用Western blot法檢測c-kit、Ano1以及Cx43在蛋白水平的表達(dá);運(yùn)用免疫熒光法檢測c-kit、Ano1以及Cx43免疫組化表達(dá)的變化。結(jié)果與對照組(56.67±9.18)相比,L-精氨酸組(32.83±11.20)胃排空率明顯降低(P0.01);L-精氨酸組c-kit(0.62±0.22)、SCF(0.58±0.19)m RNA表達(dá)相對定量與對照組的c-kit(1.00±0.15)、SCF(1.00±0.18)m RNA表達(dá)相對定量比較明顯減少(P0.01);Western blot檢測的胃組織中c-kit蛋白量變化和上述m RNA表達(dá)量變化基本一致;胃組織冰凍切片的免疫熒光染色結(jié)果顯示,c-kit的陽性表達(dá)主要位于胃壁的環(huán)形和縱行平滑肌之間,陽性表達(dá)的量和強(qiáng)度和上述Western blot檢測的結(jié)果相似。L-精氨酸組小鼠Ano1 m RNA的表達(dá)(0.51±0.23)與對照組(1.00±0.11)相比明顯降低(P0.01);Western blot檢測的胃組織中Ano1蛋白量變化和上述m RNA表達(dá)量變化基本一致;胃組織冰凍切片的免疫熒光染色結(jié)果顯示,Ano1的陽性表達(dá)主要位于胃壁的環(huán)形和縱行平滑肌之間,陽性表達(dá)的量和強(qiáng)度和上述Western blot檢測的結(jié)果相似。L-精氨酸組小鼠Cx43 m RNA的表達(dá)(0.55±0.15)與對照組(1.00±0.13)相比也降低(P0.01);Western blot檢測的胃組織Cx43蛋白變化和m RNA變化基本一致;免疫熒光染色結(jié)果顯示,Cx43陽性表達(dá)廣泛分布于平滑肌肌細(xì)胞周圍,陽性染色比例無明顯改變而平均染色強(qiáng)度變化和Western blot檢測結(jié)果相似。而與L-精氨酸組相比,姜黃素+L-精氨酸組小鼠胃排空率明顯提高(48.39±10.34)(P0.01);胃組織中c-kit(0.83±0.19)(P0.05)及其配體SCF(0.86±0.15)(P0.01)m RNA表達(dá)量均顯著改善;Western blot檢測c-kit蛋白表達(dá)量有所提高、免疫熒光陽性表達(dá)的量和強(qiáng)度也有所提高;姜黃素+L-精氨酸組小鼠Ano1 m RNA表達(dá)量顯著改善(0.87±0.20)(P0.05);Western blot檢測Ano1蛋白表達(dá)量有所提高、免疫熒光陽性表達(dá)的量和強(qiáng)度也有所提高;姜黃素+L-精氨酸組小鼠Cx43 m RNA表達(dá)量顯著改善(0.81±0.20)(P0.05),Western blot檢測Cx43蛋白表達(dá)量有所提高以及免疫熒光陽性染色比例無明顯改變而平均染色強(qiáng)度略有提高。結(jié)論姜黃素能顯著改善外源性一氧化氮引起的功能性胃排空障礙,其機(jī)制與改善胃組織中ICC相關(guān)的信號通路有關(guān)。姜黃素通過增加小鼠胃組織中c-kit/SCF、Ano1以及Cx43的表達(dá),可能恢復(fù)ICC的慢波啟動功能,改善與平滑肌細(xì)胞間的信息傳遞,從而改善外源性一氧化氮引起的胃腸功能障礙。
【圖文】：

鼠一般狀況和體重鼠在喂養(yǎng)過程無明顯不良變化。攝食攝水正常，活動精神狀態(tài)良，大小便正常。結(jié)果顯示各組小鼠體重對比沒有明顯改變，體重統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）（表 1、圖 1）。表 1 各組小鼠體重變化的比較（x S，n=9）able 1 Comparison of body weight changes in each group（x S，n=9）分組 體重(g)對照組 33.6±2.0姜黃素組 32.8±2.1L-精氨酸組 32.0±1.9姜黃素+L-精氨酸組 32.5±1.8

到抑制；與 L-精氨酸組相比，姜黃素+L-精氨酸組的胃排空率有<0.01），，姜黃素對小鼠胃排空率有所改善（表 2、圖 2）。表 2 姜黃素對 L-精氨酸所致的小鼠胃排空率的影響（x S，n=9）ffect of curcumin on gastric emptying rate in mice induced by L-arginine（x S分組 胃排空率(%)對照組 56.67±9.18姜黃素組 48.05±11.56L-精氨酸組 32.83±11.20##姜黃素+L-精氨酸組 48.39±10.34 照組相比，##P<0.01；與 L-精氨酸組相比， P<0.01
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2681597