發(fā)布時(shí)間：2020-05-25 07:01

【摘要】：近年來(lái),人們對(duì)于食品品質(zhì)的要求越來(lái)越高,不僅要求色澤形態(tài),同時(shí)要兼顧營(yíng)養(yǎng)和質(zhì)量。食品的營(yíng)養(yǎng)在加工、運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一定的損失。造成這些損失的主要原因之一是腐敗微生物對(duì)食品的分解。在防腐劑中,天然防腐劑安全性高、副作用少,更具有應(yīng)用前景。從核桃青皮中提取的胡桃醌作為天然活性物質(zhì),具有廣譜抑菌性能。本文選取胡桃醌作用于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等8種常見(jiàn)食用腐敗菌進(jìn)行研究,為探索新型天然抑菌劑提供部分依據(jù)。本文的主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:(1)研究了胡桃醌體外抗氧化效果,如ABTS和DPPH自由基的清除能力,鐵還原能力,二價(jià)鐵離子螯合能力,油脂抗氧化能力,以及Cu~(2+)對(duì)蛋白質(zhì)、Fe~(2+)/AAPH對(duì)DNA氧化損傷的保護(hù)能力進(jìn)行了探究。其中胡桃醌對(duì)ABTS,和DPPH自由基清除能力的IC_(50)值分別為0.189mg/mL,0.498mg/mL。胡桃醌可以使油脂的氧化時(shí)間明顯延后。胡桃醌可以有效清除自由基和延緩油脂抗氧化。通過(guò)鐵還原能力測(cè)定,胡桃醌沒(méi)有對(duì)鐵還原的能力;胡桃醌對(duì)DNA和蛋白質(zhì)的氧化損傷保護(hù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),胡桃醌對(duì)重金屬作用DNA和蛋白質(zhì)氧化損傷沒(méi)有保護(hù)作用。(2)通過(guò)胡桃醌作用于8種腐敗菌的的抑菌圈實(shí)驗(yàn)表明,胡桃醌對(duì)8種菌都有明顯的抑菌作用。其中,對(duì)胡桃醌敏感度最高的革蘭氏陽(yáng)性菌是S.aureus,革蘭氏陰性菌是P.aeruginosa。其抑菌圈大小分別為26.16mm,13.1mm,最低抑菌濃度都為15?g/mL�？傮w對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑菌效果比革蘭氏陰性菌好。經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)曲線的的探究實(shí)驗(yàn),得出胡桃醌可以延緩或抑制菌體進(jìn)入對(duì)數(shù)期的時(shí)間。通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞死活的測(cè)定,發(fā)現(xiàn)兩種菌體在高濃度胡桃醌處理下死亡量均增多。(3)探討了胡桃醌對(duì)S.aureus和P.aeruginosa的抑菌機(jī)理。通過(guò)對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定,掃描電鏡(SEM)、和熒光倒置顯微鏡的觀察,表明胡桃醌對(duì)菌體的細(xì)胞膜表面發(fā)生褶皺凹陷,造成了破壞。不僅使細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)外流使電導(dǎo)率升高,而且失去了細(xì)胞膜的選擇透過(guò)性,使熒光染料進(jìn)入并與核酸染色。由此推斷胡桃醌抑菌機(jī)理之一就是對(duì)細(xì)胞壁、細(xì)胞膜造成破壞。SDS-PAGE凝膠電泳及瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,胡桃醌對(duì)兩種菌體蛋白和核酸造成不同程度的影響。蛋白實(shí)驗(yàn)中,高濃度胡桃醌作用后的S.aureus的蛋白條帶變?nèi)?說(shuō)明對(duì)其造成了破壞。胡桃醌對(duì)S.aureus和P.aeruginosa的核酸均產(chǎn)生破壞或降解作用。進(jìn)一步的凝膠阻滯中發(fā)現(xiàn),胡桃醌并不是直接與核酸相結(jié)合而破壞結(jié)構(gòu)。說(shuō)明胡桃醌可能在菌體內(nèi)部發(fā)生反應(yīng)使其降解。在活性氧實(shí)驗(yàn)中,加入胡桃醌的P.aeruginosa實(shí)驗(yàn)組較空白組活性氧含量增加。胡桃醌對(duì)菌體活性氧的正常代謝產(chǎn)生影響,使活性氧含量累積,因而使菌體不能正常生長(zhǎng)。
【圖文】：

圖 2-1 胡桃醌的 ABTS 自由基清除能力Fig. 2-1. The scavenging activity of the Juglone onABTS radicals2.4.2 DPPH 自由基清除能力DPPH 自由基在 520nm 處具有很大的吸收峰，其以捕獲其他自由基的特性是否具有自由基反映本質(zhì)的指標(biāo)[58]。在本次實(shí)驗(yàn)中，設(shè)定了五個(gè)胡桃醌濃度梯DPPH 自由基清除能力的反應(yīng)。在這次實(shí)驗(yàn)中得出的結(jié)論圖 2-2 可以看出，，的有效胡桃醌濃度為 0.498mg/mL 時(shí) DPPH 自由基清除能力可達(dá) 50%。高濃度具有較強(qiáng)的自由基清除能力，其中在 0.125mg/mL，0.25mg/mL，0.5mg/mL，2mg/mL 這五個(gè)濃度的胡桃醌在自由基清除能力的關(guān)系為 y = 0.3252ln(x) + 0.R2 = 0.9821。胡桃醌在濃度為 2mg/ mL 時(shí) DPPH 自由基清除率可達(dá)到 94.60%桃醌在清除 DPPH 自由基方面有較強(qiáng)的能力。

圖 2-2 胡桃醌不同濃度的 DPPH 自由基清除能力Fig. 2-2. The scavenging activity of the Juglone on DPPH radicals還原能力（FRAP）、二價(jià)鐵離子螯合能力測(cè)定結(jié)果分析次實(shí)驗(yàn)中加入的胡桃醌溶液分別為 200μg/mL，100μg/mL，50μg/mL，2。但胡桃醌測(cè)得的結(jié)果卻未達(dá)到預(yù)期。胡桃醌從 200μg/mL 到 12.5μg/mAP 值分別為 0.302，0.276，，0.226，0.306，0.258 但從 25μg/mL 和 12 0.029 和 0.026。說(shuō)明胡桃醌在此范圍內(nèi)的抗氧化效果幾乎沒(méi)有。在第50μg/mL, 40μg/mL, 30μg/mL 的胡桃醌濃度測(cè)得 FRAP 的值分別為 0.24胡桃醌抗氧化能力很弱，胡桃醌最高濃度的抗氧化效果也不明顯。排收峰為 335nm 可排除藥品干擾，說(shuō)明胡桃醌沒(méi)有對(duì)鐵離子的還原能力鐵離子螯合能力的測(cè)定中,測(cè)定波長(zhǎng)為562nm，選取的濃度分別為400，40μg/mL，4μg/mL，0.4μg/mL。該實(shí)驗(yàn)中螯合劑與二價(jià)鐵離子結(jié)合，
【學(xué)位授予單位】：山西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2679761