【摘要】：目的:本研究通過(guò)建立梗阻性黃疸肝損傷大鼠模型,觀察不同血清對(duì)大鼠正常肝細(xì)胞干預(yù)后ATF6、GRP78及CHOP的表達(dá)變化,探討梗阻性黃疸肝損傷的機(jī)制與中藥茵陳蒿湯的保肝作用機(jī)制,為清熱利濕中藥在梗阻性黃疸患者的圍手術(shù)期治療提供理論依據(jù)。方法:1、選取清潔級(jí)成年SD大鼠45只(250-300)g,雄性,購(gòu)自天津市南開(kāi)醫(yī)院動(dòng)物中心,隨機(jī)將大鼠分組:假手術(shù)對(duì)照組(S組,n=15);茵陳蒿湯灌胃組(Y組,n=15);梗阻性黃疸組(O組,n=15)。O組經(jīng)劍突下腹正中切口入腹,分離膽管并采用無(wú)菌絲線(xiàn)雙重結(jié)扎膽總管,建立梗阻性黃疸大鼠模型;S組僅入腹探查,分離膽總管不予結(jié)扎;Y組每日固定時(shí)間,按每次劑量1ml/100g體重用茵陳蒿湯灌胃。3組大鼠均于1周后經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,離心取血清,3組部分血清用于檢測(cè)其中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、血清總膽紅(TBIL),血清直接膽紅素(DBIL)的含量,其余血清保存留備用。2、選擇大鼠正常肝細(xì)胞BRL-3A系,購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù),將細(xì)胞分為A、B、C組。分別用正常大鼠血清配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)A組細(xì)胞,用梗阻性黃疸血清配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)B組細(xì)胞,用梗阻性黃疸血清加含藥血清配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)C組細(xì)胞,3組細(xì)胞分別于培養(yǎng)后6小時(shí),24小時(shí),48小時(shí)取材,離心后取肝細(xì)胞及上清液。采用蛋白質(zhì)印記法(Western-blot)檢測(cè)各組肝細(xì)胞中ATF6、GRP78及CHOP的蛋白表達(dá)情況,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)ATF6、GRP78及CHOP的基因表達(dá)情況,培養(yǎng)液上清液測(cè)量ALT、AST含量。結(jié)果:1、血清生化指標(biāo)變化:(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分:O組大鼠血清中ALT、AST、TBIL、DBIL含量均明顯高于S組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分:與A組比較,B組與C組細(xì)胞培養(yǎng)液中ALT、AST水平在各時(shí)間點(diǎn)均高于A組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與B組比較,C組細(xì)胞培養(yǎng)液中ALT、AST水平在各時(shí)間點(diǎn)均低于B組,但較A組高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、Western-blot法檢測(cè)各組肝細(xì)胞中ATF6、GRP78與CHOP的蛋白表達(dá)變化:以actin為內(nèi)參,A組為對(duì)照組,B組與C組在各時(shí)間點(diǎn)ATF6、GRP78與CHOP蛋白表達(dá)水平均高于A組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與B組比較,C組在各時(shí)間點(diǎn)ATF6、GRP78與CHOP蛋白表達(dá)水平均低于B組,但較A組高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、Real-time PCR法檢測(cè)各組肝細(xì)胞中ATF6、GRP78與CHOP mRNA的表達(dá)變化:以GAPDH為內(nèi)參,A組為對(duì)照組,B組與C組在各時(shí)間點(diǎn)ATF6、GRP78與CHOPmRNA表達(dá)水平均高于A組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與B組比較,C組在各時(shí)間點(diǎn)ATF6、GRP78與CHOP mRNA表達(dá)水平均低于B組,但較A組高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1、梗阻性黃疸大鼠血清體外干預(yù)大鼠正常肝細(xì)胞可成功建立梗阻性黃疸肝損傷細(xì)胞模型。在該細(xì)胞模型中,ERS中的ATF6信號(hào)通路及CHOP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑被激活,可能是梗阻性黃疸造成肝損傷的作用機(jī)制。2、茵陳蒿湯含藥血清可改善梗阻性黃疸肝損傷細(xì)胞模型的肝功能情況,其作用機(jī)制可能是通過(guò)分子水平調(diào)節(jié)ATF6的表達(dá),減輕梗阻性黃疸時(shí)通過(guò)ATF6介導(dǎo)的ERS程度來(lái)抑制肝細(xì)胞凋亡,從而改善肝功能。3、臨床上治療梗阻性黃疸患者,在合理選擇手術(shù)方式的基礎(chǔ)上,可辨證運(yùn)用茵陳蒿湯,改善梗阻性黃疸造成的肝功能異常,中西醫(yī)結(jié)合治療可能會(huì)獲得較好的臨床療效。
【圖文】：

162.2.1.2 各組肝細(xì)胞中 GRP78 蛋白的表達(dá)情況（見(jiàn)表 8，圖 2）表 8 各時(shí)間點(diǎn)大鼠正常肝細(xì)胞中 GRP78 表達(dá)結(jié)果( X ± S，n=3)注：與 A 組比較，*P<0.05,**P<0.01；與 B 組比較，△P<0.05，△△P<0.01組別 6h 24h 48hA 組 0.21±0.11△△0.38±0.01△△0.42±0.04△△B 組 0.44±0.02**0.55±0.02**0.69±0.04**C 組 0.34±0.02**△0.46±0.03**△△0.56±0.06**△

172.2.1.3 各組肝細(xì)胞中 CHOP 蛋白的表達(dá)情況（見(jiàn)表 9，，圖 3）表 9 各時(shí)間點(diǎn)大鼠正常肝細(xì)胞中 CHOP 表達(dá)結(jié)果( X ± S，n=3)注：與 A 組比較，*P<0.05,**P<0.01；與 B 組比較，△P<0.05，△△P<0.01組別 6h 24h 48hA 組 0.32±0.03△△0.40±0.03△△0.52±0.06△△B 組 0.52±0.03**0.61±0.04**0.74±0.03**C 組 0.38±0.03*△△0.50±0.03**△△0.62±0.03**△△
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2678428