【摘要】：目的:研究丹皮酚對脂多糖誘導(dǎo)的抑郁癥肝氣郁證的小鼠模型和原代細(xì)胞模型中TLR4-NF-κB信號通路的作用,以驗(yàn)證肝疏泄失常炎癥機(jī)制假說。方法:1.利用米諾環(huán)素(50mg/kg)、氟西汀(20mg/kg)、低劑量的丹皮酚(10mg/kg)、高劑量的丹皮酚(20mg/kg)預(yù)先對小鼠腹腔靜脈注射給藥(空白組和模型組注射0.9%生理鹽水10mg/kg)七天后,通過腹腔注射脂多糖(0.5mg/kg)建立抑郁癥肝氣郁證模型,用強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和懸尾實(shí)驗(yàn)對模型進(jìn)行評價。2.利用ELISA試劑盒檢測抑郁癥小鼠模型血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量;Western Blot測定小鼠海馬區(qū)p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)水平;實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測小鼠海馬區(qū)p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平。3.離體培養(yǎng)海馬區(qū)原代神經(jīng)元細(xì)胞,細(xì)胞成熟后,用丹皮酚低劑量(0.5μM),高劑量(5μM)米諾環(huán)素(10μM),氟西汀(5μM)提前24小時干預(yù)細(xì)胞,然后加入LPS(濃度為10μg/ml)溶液,孵育24小時建立抑郁癥肝氣郁證細(xì)胞模型。用MTT檢測細(xì)胞活性。4.利用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量;Western Blot檢測細(xì)胞模型中p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)水平;實(shí)時定量PCR技術(shù)檢測細(xì)胞模型中p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:1.抑郁癥小鼠模型評價:與空白組相比,LPS模型組的不動時間明顯變長,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),米諾環(huán)素組、氟西汀組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組的不動時間與LPS模型組相比均顯著性降低(P0.05)。2.ELISA試劑盒檢測結(jié)果:與空白組相比,LPS組、米諾環(huán)素組、氟西汀組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量明顯增加(P0.01)。與LPS模型組相比,米諾環(huán)素組、氟西汀組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量明顯降低(P0.05),而IL-10含量顯著性增高(p0.05)。Western Blot檢測結(jié)果:與空白組相比,LPS模型組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)水平均顯著性增大(P0.05),而與LPS模型組相比,氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)量均顯著地減少(P0.05),而丹皮酚低劑量組較米諾環(huán)素組、氟西汀組和丹皮酚高劑量組而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)水平較高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。實(shí)時定量PCR檢測結(jié)果:與空白組相比,其余六組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平均顯著性增大(P0.05),而與LPS模型組相比,氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)量均顯著地降低(P0.05),而丹皮酚低劑量組較米諾環(huán)素組、氟西汀組和丹皮酚高劑量組而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平較高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.離體海馬原代神經(jīng)元細(xì)胞MTT檢測結(jié)果:與空白組相比,LPS模型組、米諾環(huán)素組、氟西汀組、丹皮酚低劑量組和丹皮酚高劑量組的細(xì)胞存活率均顯著性降低(P0.05)。而氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組和丹皮酚高劑量組較LPS模型組細(xì)胞存活率顯著增加(P0.05)。氟西汀組和丹皮酚高劑量組的細(xì)胞存活率又顯著高于丹皮酚低劑量組的細(xì)胞存活率(P0.05)。4.ELISA試劑盒對細(xì)胞模型的檢測結(jié)果:細(xì)胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量與空白組相比,LPS模型組、米諾環(huán)素組、氟西汀組、丹皮酚低劑量組和丹皮酚高劑量組細(xì)胞上清液中的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均顯著性上升(P0.01)。而氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組和丹皮酚高劑量組較LPS模型組相比,TNF-α、IL-1β、IL-6含量顯著降低,而IL-10顯著性增高(P0.05)。丹皮酚低劑量組上清液中的TNF-α、IL-6含量明顯高于米諾環(huán)素組、氟西汀組和丹皮酚高劑量組,而IL-10含量明顯低于這三組(P0.05)。Western Blot對細(xì)胞模型的檢測結(jié)果:與空白組相比,LPS模型組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)水平均顯著性增大(P0.05),而與LPS模型組相比,氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)量均顯著地減少(P0.05),而丹皮酚低劑量組p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的蛋白表達(dá)明顯高于米諾環(huán)素組、氟西汀組和丹皮酚高劑量組(P0.05)。實(shí)時定量PCR技術(shù)對細(xì)胞模型的檢測結(jié)果:與空白組相比,其他五組的p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平均顯著性增大(P0.05),而與LPS模型組相比,氟西汀組、米諾環(huán)素組、丹皮酚低劑量組、丹皮酚高劑量組p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)量均顯著地降低(P0.05),丹皮酚低劑量組較米諾環(huán)素組、氟西汀組和丹皮酚高劑量組而言,p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的mRNA表達(dá)水平較高,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:丹皮酚對抑郁癥肝氣郁證有積極的治療作用,這與前人研究是吻合的,而丹皮酚對抑郁癥的治療作用可能是有劑量依賴性的。丹皮酚通過抑制TLR4和NF-κB信號通路的激活,從而抑制p65、IκBα、IKKβ、NLRP3的表達(dá),進(jìn)而抑制促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6,促進(jìn)抗炎性因子IL-10的產(chǎn)生達(dá)到緩解抑郁樣癥狀的療效。
【圖文】：

圖 3 組 比 較 ***P<0.01， 與 LPS 模 型 組 比 較###P<0.01。 ）和 LPS 誘 導(dǎo) 后 ， 小 鼠 懸 浮 不 動 時 間 結(jié) 果PS 模 型 組（ LPS）的 懸 浮 不 動 時 間 明 顯 變PS+M） 、 氟 西 汀 組 （ LPS+FLU） 、 丹 皮丹 皮 酚 高 劑 量 組 （ LPS+PH） 的 懸 浮 不 動 降 低 （ P<0.05） ， 丹 皮 酚 低 劑 量 組 小 鼠 環(huán) 素 組 、氟 西 汀 組 、丹 皮 酚 高 劑 量 組 小 果

圖 3 組 比 較 ***P<0.01，， 與 LPS 模 型 組 比 ###P<0.01。 ） 和 LPS 誘 導(dǎo) 后 ， 小 鼠 懸 浮 不 動 時 間 結(jié)LPS 模 型 組（ LPS）的 懸 浮 不 動 時 間 明 顯 LPS+M） 、 氟 西 汀 組 （ LPS+FLU） 、 丹 丹 皮 酚 高 劑 量 組 （ LPS+PH） 的 懸 浮 不 性 降 低 （ P<0.05） ， 丹 皮 酚 低 劑 量 組 小 諾 環(huán) 素 組 、氟 西 汀 組 、丹 皮 酚 高 劑 量 組 結(jié) 果
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2677015