【摘要】：血栓性疾病,是一種由血栓形成和血栓栓塞兩種病理過程引起的疾病,按照血栓形成部位分類主要分為靜脈血栓、動脈血栓和毛細(xì)血管血栓三大類。血栓的形成可導(dǎo)致嚴(yán)重的心腦血管事件的發(fā)生,如卒中(CVA)、血栓閉塞性脈管炎(TAO)、動脈粥樣硬化(AS)等。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報道,全球十大致死性疾病統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,缺血性心臟病和CVA致死人數(shù)位于世界前列。丹參是唇形科植物丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根莖,是中國傳統(tǒng)中藥。臨床上,丹參制劑不但可以用于治療心血管和腦血管疾病,也可以用于治療慢性腎炎、慢性腎衰竭、2型糖尿病和傳染性疾病等,應(yīng)用廣泛。白花丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge.f.alba C.Y.WuH.W.Li.)主要來源于山東萊蕪、章丘和濟(jì)南郊區(qū)等地,是丹參的變種,在當(dāng)?shù)匾恢贝鎮(zhèn)鹘y(tǒng)中藥丹參使用。有學(xué)者在二十世紀(jì)出就開始對丹參里面的有效成分進(jìn)行研究。在此后的幾十年里,研究者陸陸續(xù)續(xù)從白花丹參中發(fā)現(xiàn)了許多的化合物,并且通過成分分析發(fā)現(xiàn)丹參和白花丹參的主要化學(xué)成分基本相同。但白花丹參的植株中除了花以外,其他部位包括根、莖、葉的有效活性成分均高于丹參植株,因此白花丹參具有比較好的臨床應(yīng)用和研究價值。臨床上,白花丹參常用來替代丹參用于對心腦血管類疾病治療,包括AS、AMI、高脂血癥和高血壓等。本課題組對白花丹參中的丹參酮類和酚酸類成分進(jìn)行抗血栓活性研究,旨在從抗血栓形成的角度,評價白花丹參中治療心腦血管疾病的有效成分,為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù),并為進(jìn)一步開發(fā)和利用白花丹參資源奠定基礎(chǔ)。本課題選取從白花丹參中提取分離得到的12種丹參酮類化合物和12種酚酸類化合物,并以TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞為模型,評價了這些化合物的抗血栓活性,并研究了其中脫氧基新隱丹參酮(7)和紫草酸(J)可能的作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)采用MTT法檢測丹參酮類化合物的細(xì)胞毒,CCK-8法檢測酚酸類化合物作用下EA.hy926的細(xì)胞活力;使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)研究了丹參酮類和酚酸類化合物對TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞上清液中PAI-1和t-PA表達(dá)水平的影響;采用實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(qRT-PCR)檢測化合物對TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926細(xì)胞的PAI-1和t-PA的mRNA表達(dá)水平的影響;生色底物法檢測化合物在EA.hy926細(xì)胞的表達(dá)和體外抗FXa和FIIa活性;蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)法檢測化合物脫氧基新隱丹參酮和紫草酸對TNF-α誘導(dǎo)的EA.hy926 細(xì)胞 p65、p-p65、p38、p-p38、JNK 和 p-JNK 的蛋白表達(dá)水平影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,12種丹參酮類化合物中,多數(shù)化合物能夠抑制PAI-1蛋白水平和基因水平的表達(dá),其中脫氧基新隱丹參酮能夠濃度依賴性地抑制PAI-1蛋白水平和基因水平的表達(dá);而丹參酮類化合物顯示出了對t-PA的蛋白和基因水平的表達(dá)的促進(jìn)作用;同時生色底物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示脫氧基新隱丹參酮具有和丹參酮IIA相當(dāng)?shù)目笷Xa和抗FIIa活性;機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),兩者活性化合物的抗血栓機(jī)制不同,脫氧基新隱丹參酮能明顯地抑制p-p65和pJNK的蛋白水平表達(dá),但是對p-p38蛋白的表達(dá)無顯著作用,其抗血栓機(jī)制是通過NF-κB/JNK通路實(shí)現(xiàn)的。在12種酚酸類化合物的研究中發(fā)現(xiàn),紫草酸具有較強(qiáng)的抑制PAI-1蛋白水平和基因水平的表達(dá)作用,其抗FXa和FIIa活性較丹酚酸B強(qiáng);同時發(fā)現(xiàn)紫草酸能夠同時阻滯p-p65、pJNK和p-p38的表達(dá),其抗栓機(jī)制是通過抑制NF-κB/JNK/p38 MAPK信號通路實(shí)現(xiàn)的。綜上所述,本論文通過對白花丹參提取物中的主要成分和部分微量成分包括12種丹參酮類化合物和12種酚酸類化合物進(jìn)行抗血栓活性評價,篩選出了脫氧基新隱丹參酮和紫草酸兩種抗血栓活性較好的化合物,為進(jìn)一步的抗血栓藥物研究提供了基礎(chǔ)的理論依據(jù),也為其治療血栓性心腦血管疾病的臨床研究提供了參考。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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1 朱海林;張大偉;孫隆儒;程艷娜;吳凱;;白花丹參總丹參酮抗血栓閉塞性脈管炎的實(shí)驗(yàn)研究[J];中藥材;2012年05期

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本文編號：2676201