發(fā)布時間：2020-05-22 04:39

【摘要】：目的研究殼聚糖/消炎止痛中藥及兩者聯(lián)合應用對小鼠皮膚傷口愈合過程中的作用,分析不同用藥組和不同濃度組與小鼠皮膚創(chuàng)口愈合情況的對應關系,進一步討論殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和消炎止痛中藥促進傷口愈合的作用機制,為殼聚糖外傷敷料的臨床應用提供實驗依據(jù)。方法1.動物分組及造模采用306只健康昆明近交雄性小鼠,將其中300只小鼠隨機分為9個用藥治療組和一個空白對照組,每組30只小鼠,剩余6只為正常組。每只小鼠背部造一個約0.5cm2的圓形皮膚全層切割傷口。所有創(chuàng)傷小鼠于制備皮膚缺損創(chuàng)面后立即實行治療,連續(xù)9天,每天2次。9個治療組分別為高、中、低(8mg/L、4mg/L、2mg/L)殼聚糖外傷敷料治療組,高、中、低(8mg/L、4mg/L、2mg/L)殼聚糖季銨鹽外傷敷料治療組,4mg/L殼聚糖+1/2消炎止痛中藥外傷敷料治療組、4mg/L殼聚糖季銨鹽+1/2消炎止痛中藥治療組和消炎止痛中藥外傷敷料治療組。2.小鼠創(chuàng)傷收縮率評價于術后第1、3、5、7、9天對各組小鼠創(chuàng)傷部位進行標準化攝影,記錄每只小鼠創(chuàng)口的創(chuàng)面,采用ImageJ圖像處理軟件對其進行計算機圖形處理。根據(jù)數(shù)據(jù)分布特征,對術后第1、3、5、7、9天各組小鼠創(chuàng)傷面積收縮率數(shù)據(jù)進行單因素方差分析。3.酶聯(lián)免疫吸附法測定IL-1、TNF-α、TGF-β和PDGF的表達術后第1、3、5、7、9天,每組隨機選取6只小鼠摘眼球取血,血液當天離心取上清液,使用酶聯(lián)免疫試劑盒測定IL-1、TNF-α、TGF-β和PDGF的表達情況。4.組織病理學評價術后第3、5、7、9天,將取血完畢的小鼠脫臼處死,手術取其創(chuàng)面組織樣本約1cm2。組織樣本做石蠟切片,HE染色。普通光學顯微鏡下觀察組織病理學變化。結果術后第1天,各組創(chuàng)傷收縮率未見顯著差異(P0.05)。術后第3、5天,高、中殼聚糖組,高、中殼聚糖季銨鹽組,殼+藥組,殼季+藥組,中藥組創(chuàng)面收縮率明顯大于空白組(P0.05),高濃度組創(chuàng)傷收縮率高于低濃度組(P0.05),殼聚糖組和殼聚糖季銨鹽組創(chuàng)傷收縮率無統(tǒng)計學差異(P0.05),聯(lián)合應用組和高濃度組的創(chuàng)傷收縮率無統(tǒng)計學差異(P0.05)。術后第7、9天治療組創(chuàng)面收縮率明顯高于空白組(P0.05)。病理學切片鏡下觀察發(fā)現(xiàn):治療組的炎癥反應較空白組輕,上皮細胞增殖加快,新生血管豐富,肉芽組織成熟。高濃度組與低濃度組相比,炎癥減輕時間更早、上皮細胞增殖更快,肉芽組織出現(xiàn)時間更早,皮膚恢復完整結構時間更短。殼聚糖組和殼聚糖季銨鹽組鏡下恢復程度基本相同,聯(lián)合應用組鏡下恢復程度與高濃度組相似,術后第9天可見完整皮膚結構。治療組IL-1和TNF-α的表達明顯低于空白組(P0.01),高濃度組IL-1和TNF-α的表達較低濃度組低(P0.05),殼聚糖組和殼聚糖季銨鹽組IL-1和TNF-α的表達無統(tǒng)計學差異(P0.05)。聯(lián)合應用組IL-1的表達較高濃度組低(P0.05),TNF-α的表達與高濃度組無統(tǒng)計學差異(P0.05)。治療組TGF-β和PDGF的表達明顯高于空白組(P0.05),高濃度組TGF-β和PDGF的表達較低濃度組高(P0.05),殼聚糖組和殼聚糖季銨鹽組TGF-β和PDGF的表達無統(tǒng)計學差異(P0.05),聯(lián)合應用組PDGF的表達較高濃度組高(P0.05),TGF-β的表達無統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論1.殼聚糖、殼聚糖季銨鹽和消炎止痛中藥均具有減輕炎癥反應和促進生長因子表達的作用,進而促進創(chuàng)口愈合。2.高濃度殼聚糖和殼聚糖季銨鹽減輕炎癥反應和促進生長因子表達的作用較低濃度組好,具有更強的促進創(chuàng)口愈合能力。3.殼聚糖和殼聚糖季銨鹽減輕炎癥反應促進生長因子的能力大致相同,促進創(chuàng)口愈合的能力相似。4.殼聚糖/殼聚糖季銨鹽和消炎止痛中藥聯(lián)合應用的減輕炎癥反應和促進生長因子表達的能力最好,促進傷口愈合的能力最佳。
【圖文】：

結果逡逑１．小鼠皮膚愈合情況和創(chuàng)口收縮率逡逑各組小鼠９天創(chuàng)口標準化攝影見圖１，創(chuàng)口收縮率見表３。逡逑術后第一天：各組小鼠創(chuàng)面均無明顯結疤，創(chuàng)面處有少量炎性滲出，創(chuàng)傷邊逡逑緣處略有紅腫凸起，創(chuàng)面因皮膚向創(chuàng)口收縮而形狀不一。各組小鼠的創(chuàng)傷收縮率逡逑大致相同，無顯著性差異（００．０５）。逡逑術后第三天：殼高組、殼中組、殼季高組、殼季中組、殼＋藥組、殼季＋藥組、逡逑中藥組均可觀察到創(chuàng)面有結疤，炎性滲出減少或無，創(chuàng)傷邊緣處無紅腫凸起，創(chuàng)逡逑傷面積有所減少，創(chuàng)口形狀不規(guī)整，創(chuàng)傷收縮率與空白組差異顯著（／＜0．邋０５）。逡逑殼高組、殼季高組、殼＋藥組和殼季＋藥組間之間創(chuàng)傷收縮率的差異無統(tǒng)計學意義逡逑（＆０．邋０５），高于殼中組、殼季中組和中藥組。殼中組、殼季中組和中藥組之逡逑間創(chuàng)傷收縮率的差異無統(tǒng)計學意義（／＞0．邋０５）。殼低組、殼季低組和空白組可逡逑見創(chuàng)面有少量結疤，傷口表明有炎性滲出，創(chuàng)傷邊緣略有紅腫凸起，三組之間創(chuàng)逡逑傷收縮率的差異無統(tǒng)計學意義（／＞0．0５）。逡逑術后第五天：各組小鼠創(chuàng)面均可見結疤

圖２邋１０組小鼠術后３、５、７、９天１００倍光鏡下組織病理切片ＨＥ染色逡逑聯(lián)免疫法測定細胞因子逡逑標準曲線的繪制逡逑按照酶聯(lián)免疫吸附法測定小鼠白細胞介素１邋（ＩＬ－１）、小鼠腫瘤壞死因子ａ逡逑Ｆ－ａ）、小鼠血小板衍生生長因子（ＰＤＧＦ）、小鼠轉(zhuǎn)化生長因子Ｐ邋（ＴＧＦ－逡逑中的實驗步驟測定各標準品的吸光度，繪制標準曲線。逡逑＿三＇邋邐邋％邐．．．逡逑＇邋：ｆ邐一邐ｒ邋＝邋ｓ－ｓｓｓｓｘ邋－邋＾．ｖ．ｐ＾逡逑ｌ邋！邋邋邋．邐？，邋－邋０，，００￡＜邋－＊？邋Ｓ＃５Ｓ７邐－邐Ｓ？：邋＝邋ｒ；逡逑＂；邐Ｒ＊邋＝邋０．９９３５＾＊邐＾逡逑邐＾邋ｉ邋１：逡逑Ｂ邋＂邐５§邐域邐ＩＳＯ邐２＾｝邐２５０邋誕邐．Ｓ邋’邐＾邐~栧蝀4邋娜’P欏義希穡紓恚戾義希潁幔紓恚戾義賢跡沖澹桑蹋北曜記咤甕跡矗裕危疲馴曜記咤義

本文編號：2675457