【摘要】：本研究通過建立外源物(鏈霉素、尿酸、H_2O_2)誘導的體外腎小管上皮細胞損傷模型,研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒兩種保腎中藥制劑的含藥血清及黃蜀葵花和肉蓯蓉提取物對腎小管上皮細胞毒性的保護作用,并建立大鼠體內(nèi)鏈霉素腎毒性損傷模型,研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對其損傷的保護作用,結合體外和體內(nèi)實驗結果,初步探討了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒及黃蜀葵花和肉蓯蓉對腎小管上皮細胞損傷保護作用的可能機制,為相關保腎中藥的臨床應用和進一步開發(fā)利用奠定了一定的理論基礎。第一部分建立了三種外源物誘導的體外原代腎小管上皮細胞損傷模型,以期進一步探討黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒兩種中藥制劑對腎毒性損傷的保護作用機制。采用鏈霉素、尿酸、H_2O_2對原代腎小管上皮細胞進行誘導,以形態(tài)學改變、細胞增殖抑制率及細胞LDH釋放量作為評價指標,判斷三種外源物的腎毒性作用,并通過AO/EB熒光染色觀察細胞凋亡情況。結果表明:鏈霉素、尿酸、H_2O_2均使細胞的形態(tài)發(fā)生明顯改變,對細胞的增殖均有抑制作用,使細胞LDH釋放量增高,并且三種作用結果均呈濃度依賴性。綜上所述,鏈霉素、尿酸、H_2O_2均可誘導原代腎小管上皮細胞構建體外腎毒性細胞模型。第二部分研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒含藥血清對鏈霉素、尿酸、H_2O_2三種外源物致腎小管上皮細胞損傷的保護作用。研究結果表明,與模型組比較,黃葵膠囊及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清均能顯著減輕鏈霉素對細胞增殖的抑制作用(P0.05),并顯著降低鏈霉素作用后細胞LDH釋放量(P0.05);黃葵膠囊高劑量及蓯蓉益腎顆粒中劑量含藥血清能夠顯著減輕尿酸對細胞增殖抑制作用(P0.05);黃葵膠囊高、中、低劑量及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清能夠顯著降低尿酸作用后細胞LDH釋放量(P0.05);黃葵膠囊高、中、低劑量及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清能夠顯著減輕H_2O_2對細胞增殖抑制作用(P0.05);蓯蓉益腎顆粒中劑量含藥血清能夠顯著降低H_2O_2作用后細胞LDH釋放量(P0.05)。第三部分研究了黃葵膠囊主藥黃蜀葵花和蓯蓉益腎顆粒主藥肉蓯蓉水煎物和醇提物的高、中、低劑量(200mg/L、20mg/L、2mg/L)對三種外源物致兔腎小管上皮細胞損傷的保護作用。研究結果表明,與模型組相比,黃蜀葵花醇提物和水煎物的中、低濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物的高、中濃度能夠顯著減輕鏈霉素對細胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花、肉蓯蓉的醇提物和水煎物均能夠顯著降低鏈霉素作用后細胞LDH釋放量(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高、中濃度,水煎物的高、中、低濃度及肉蓯蓉的醇提物和水煎物能夠顯著減輕尿酸對細胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花醇提物的中、低濃度,水煎物的高、中、低濃度及肉蓯蓉的醇提物和水煎物能夠顯著降低尿酸作用后細胞LDH釋放量(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高、低濃度,水煎物的高、中濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物的高濃度能夠顯著減輕H_2O_2對細胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高濃度,水煎物的中、低濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物能夠顯著降低H_2O_2作用后細胞LDH釋放量(P0.05)。第四部分研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對鏈霉素致大鼠腎毒性損傷的保護作用。通過比較觀察正常組、模型組和藥物干預組的大鼠一般情況、測定血生化指標、尿生化指標、腎皮質(zhì)氧化應激指標以及腎組織病理切片HE染色。結果表明:模型組與正常組相比,體重顯著小于正常組,臟體比顯著大于正常組(P0.05);腎皮質(zhì)勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性均小于正常組(P0.05);藥物干預組與模型組相比,臟體比均小于模型組(P0.05);黃葵膠囊各劑量組血肌酐(SCr)值、血清尿素氮(BUN)值顯著小于模型組(P0.05),蓯蓉益腎顆粒各劑量組血清尿素氮(BUN)值、尿酸(UA)值顯著小于模型組(P0.05);黃葵膠囊高劑量組、蓯蓉益腎顆粒高劑量組的SOD活性和GSH-Px活性顯著大于模型組(P0.05);病理切片染色結果顯示,與正常組相比,模型組腎小管細胞間隙不清晰和腎小球周圍纖維組織輕度增厚,藥物干預組無明顯差異。綜上所述,兩種保腎制劑可以在體內(nèi)與鏈霉素腎毒性形成拮抗作用,并能降低尿酸水平,增強腎組織抗氧化能力。綜上所述,黃葵膠囊及黃蜀葵花、蓯蓉益腎顆粒及肉蓯蓉對鏈霉素、尿酸和H_2O_2三種外源物誘導的體外腎小管上皮細胞損傷都具有不同程度的保護作用。黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對鏈霉素致大鼠體內(nèi)腎毒性損傷具有保護作用,并能降低尿酸水平,增強腎組織抗氧化能力,初步推測作用機制可能與拮抗鏈霉素及其引起的高尿酸和氧化應激所致的腎小管上皮細胞損傷有關。
【圖文】：

2.3.1 鏈霉素誘導結果2.3.1.1 細胞形態(tài)的改變不同濃度的鏈霉素作用 RTECs 24h 后，顯微鏡下觀察 RTECs 細胞形態(tài)，如圖 2-1，部分細胞變長，固縮聚集，細胞光澤度減小，，體積縮小。隨著鏈霉素濃度的增加，形態(tài)改變的細胞數(shù)量逐漸增多，貼壁細胞數(shù)量逐漸減少，呈濃度依賴性�？瞻捉M 0.5mmol/L 1mmol/L

顯微鏡下觀察 RTECs 細胞形態(tài)，如圖2-2，部分細胞變長，固縮聚集，細胞光澤度減小。隨著尿酸濃度的增加，形態(tài)改變的細胞數(shù)量逐漸增多，聚集程度越嚴重，細胞數(shù)量逐漸減少，呈濃度依賴性。
【學位授予單位】：貴州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻】

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