【摘要】：本研究通過建立外源物(鏈霉素、尿酸、H_2O_2)誘導(dǎo)的體外腎小管上皮細(xì)胞損傷模型,研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒兩種保腎中藥制劑的含藥血清及黃蜀葵花和肉蓯蓉提取物對腎小管上皮細(xì)胞毒性的保護(hù)作用,并建立大鼠體內(nèi)鏈霉素腎毒性損傷模型,研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對其損傷的保護(hù)作用,結(jié)合體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,初步探討了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒及黃蜀葵花和肉蓯蓉對腎小管上皮細(xì)胞損傷保護(hù)作用的可能機(jī)制,為相關(guān)保腎中藥的臨床應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)利用奠定了一定的理論基礎(chǔ)。第一部分建立了三種外源物誘導(dǎo)的體外原代腎小管上皮細(xì)胞損傷模型,以期進(jìn)一步探討黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒兩種中藥制劑對腎毒性損傷的保護(hù)作用機(jī)制。采用鏈霉素、尿酸、H_2O_2對原代腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo),以形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞增殖抑制率及細(xì)胞LDH釋放量作為評價(jià)指標(biāo),判斷三種外源物的腎毒性作用,并通過AO/EB熒光染色觀察細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果表明:鏈霉素、尿酸、H_2O_2均使細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯改變,對細(xì)胞的增殖均有抑制作用,使細(xì)胞LDH釋放量增高,并且三種作用結(jié)果均呈濃度依賴性。綜上所述,鏈霉素、尿酸、H_2O_2均可誘導(dǎo)原代腎小管上皮細(xì)胞構(gòu)建體外腎毒性細(xì)胞模型。第二部分研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒含藥血清對鏈霉素、尿酸、H_2O_2三種外源物致腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。研究結(jié)果表明,與模型組比較,黃葵膠囊及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清均能顯著減輕鏈霉素對細(xì)胞增殖的抑制作用(P0.05),并顯著降低鏈霉素作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05);黃葵膠囊高劑量及蓯蓉益腎顆粒中劑量含藥血清能夠顯著減輕尿酸對細(xì)胞增殖抑制作用(P0.05);黃葵膠囊高、中、低劑量及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清能夠顯著降低尿酸作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05);黃葵膠囊高、中、低劑量及蓯蓉益腎顆粒高、中劑量含藥血清能夠顯著減輕H_2O_2對細(xì)胞增殖抑制作用(P0.05);蓯蓉益腎顆粒中劑量含藥血清能夠顯著降低H_2O_2作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05)。第三部分研究了黃葵膠囊主藥黃蜀葵花和蓯蓉益腎顆粒主藥肉蓯蓉水煎物和醇提物的高、中、低劑量(200mg/L、20mg/L、2mg/L)對三種外源物致兔腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。研究結(jié)果表明,與模型組相比,黃蜀葵花醇提物和水煎物的中、低濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物的高、中濃度能夠顯著減輕鏈霉素對細(xì)胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花、肉蓯蓉的醇提物和水煎物均能夠顯著降低鏈霉素作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高、中濃度,水煎物的高、中、低濃度及肉蓯蓉的醇提物和水煎物能夠顯著減輕尿酸對細(xì)胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花醇提物的中、低濃度,水煎物的高、中、低濃度及肉蓯蓉的醇提物和水煎物能夠顯著降低尿酸作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高、低濃度,水煎物的高、中濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物的高濃度能夠顯著減輕H_2O_2對細(xì)胞增殖抑制作用(P0.05);黃蜀葵花醇提物的高濃度,水煎物的中、低濃度,肉蓯蓉醇提物和水煎物能夠顯著降低H_2O_2作用后細(xì)胞LDH釋放量(P0.05)。第四部分研究了黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對鏈霉素致大鼠腎毒性損傷的保護(hù)作用。通過比較觀察正常組、模型組和藥物干預(yù)組的大鼠一般情況、測定血生化指標(biāo)、尿生化指標(biāo)、腎皮質(zhì)氧化應(yīng)激指標(biāo)以及腎組織病理切片HE染色。結(jié)果表明:模型組與正常組相比,體重顯著小于正常組,臟體比顯著大于正常組(P0.05);腎皮質(zhì)勻漿超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性均小于正常組(P0.05);藥物干預(yù)組與模型組相比,臟體比均小于模型組(P0.05);黃葵膠囊各劑量組血肌酐(SCr)值、血清尿素氮(BUN)值顯著小于模型組(P0.05),蓯蓉益腎顆粒各劑量組血清尿素氮(BUN)值、尿酸(UA)值顯著小于模型組(P0.05);黃葵膠囊高劑量組、蓯蓉益腎顆粒高劑量組的SOD活性和GSH-Px活性顯著大于模型組(P0.05);病理切片染色結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組腎小管細(xì)胞間隙不清晰和腎小球周圍纖維組織輕度增厚,藥物干預(yù)組無明顯差異。綜上所述,兩種保腎制劑可以在體內(nèi)與鏈霉素腎毒性形成拮抗作用,并能降低尿酸水平,增強(qiáng)腎組織抗氧化能力。綜上所述,黃葵膠囊及黃蜀葵花、蓯蓉益腎顆粒及肉蓯蓉對鏈霉素、尿酸和H_2O_2三種外源物誘導(dǎo)的體外腎小管上皮細(xì)胞損傷都具有不同程度的保護(hù)作用。黃葵膠囊和蓯蓉益腎顆粒對鏈霉素致大鼠體內(nèi)腎毒性損傷具有保護(hù)作用,并能降低尿酸水平,增強(qiáng)腎組織抗氧化能力,初步推測作用機(jī)制可能與拮抗鏈霉素及其引起的高尿酸和氧化應(yīng)激所致的腎小管上皮細(xì)胞損傷有關(guān)。
【圖文】：

2.3.1 鏈霉素誘導(dǎo)結(jié)果2.3.1.1 細(xì)胞形態(tài)的改變不同濃度的鏈霉素作用 RTECs 24h 后，顯微鏡下觀察 RTECs 細(xì)胞形態(tài)，如圖 2-1，部分細(xì)胞變長，固縮聚集，細(xì)胞光澤度減小，，體積縮小。隨著鏈霉素濃度的增加，形態(tài)改變的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，貼壁細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，呈濃度依賴性。空白組 0.5mmol/L 1mmol/L

顯微鏡下觀察 RTECs 細(xì)胞形態(tài)，如圖2-2，部分細(xì)胞變長，固縮聚集，細(xì)胞光澤度減小。隨著尿酸濃度的增加，形態(tài)改變的細(xì)胞數(shù)量逐漸增多，聚集程度越嚴(yán)重，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，呈濃度依賴性。
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 張君濤;王平;劉愛峰;楊光;李遠(yuǎn)棟;張超;;中藥含藥血清制備方法的研究概述[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年11期

2 周青;張丹;徐超;陳玉根;;黃蜀葵花研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年13期

3 張友松;;甲基強(qiáng)的松龍聯(lián)合蓯蓉益腎顆粒治療小兒急性腎炎的效果分析[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2015年05期

4 張明柱;張淑萍;李旺;金春亭;張曉麗;李迎春;趙東偉;;健脾滋腎開郁散結(jié)中藥對糖尿病腎病大鼠腎損傷的保護(hù)作用[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2015年14期

5 邢作英;王永霞;曹英杰;朱明軍;王幼平;高原;;血清藥理學(xué)研究概要[J];世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化;2015年01期

6 鄒筱芳;巫冠中;;尿酸腎損傷的分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)藥;2015年01期

7 毛志敏;萬毅剛;孫偉;陳好利;黃燕如;史喜苗;姚建;;黃葵膠囊抑制糖尿病腎病腎組織氧化應(yīng)激和p38MAPK信號通路活性改善腎纖維化的作用和機(jī)制[J];中國中藥雜志;2014年21期

8 牛艷芬;高麗輝;劉旭;林華;張媛;李玲;;芒果苷對氧嗪酸鉀所致慢性高尿酸血癥大鼠尿酸及肝腎功能的影響[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2012年11期

9 王磊;張金曉;張宗鵬;申秀萍;;腎細(xì)胞體外模型在藥物評價(jià)與篩選中的應(yīng)用[J];華西藥學(xué)雜志;2012年05期

10 陳萍;萬毅剛;王朝俊;趙青;魏晴雪;涂s

本文編號：2674098