【摘要】：目的:觀察腦缺血再灌注(cerebral ischemia reperfusion,CIR)后大鼠缺血灶周邊腦組織不同時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)血管單元(neurovascular unit,NVU)超微結(jié)構(gòu)變化及相關(guān)的神經(jīng)核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和層粘連蛋白(laminin,LN)在不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)變化,探討三七總皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)對(duì)腦缺血后大鼠腦組織NVU超微結(jié)構(gòu)及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響,進(jìn)一步闡明PNS對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用。方法:(1)雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和治療組3組,各組分別又按腦缺血再灌注后24 h、72 h、7 d、3 w分為4個(gè)亞組,每亞組大鼠12只。采用線栓法制作局灶性大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型。采用Longa法評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)檢測各組大鼠術(shù)后4 h神經(jīng)功能評(píng)分,隨之各組進(jìn)行干預(yù),分別在缺血再灌注后24 h、72 h、7 d、3 w進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。(2)應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡(western blot,WB)法檢測神經(jīng)血管單元各組分相關(guān)蛋白NeuN、GFAP和LN的表達(dá)變化。(3)透射電鏡下觀察各組大鼠缺血灶周邊腦組織不同時(shí)間點(diǎn)的NVU超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果:(1)神經(jīng)功能評(píng)分:干預(yù)前即術(shù)后4 h治療組和模型組神經(jīng)功能評(píng)分比較無明顯差異;PNS干預(yù)后治療組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分逐漸改善,缺血再灌注后24 h與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),再灌注72 h、7 d、3 w的大鼠神經(jīng)缺損評(píng)分與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)大鼠MCAO模型腦肉眼直觀圖:IR 3w模型組可見明顯腦梗死灶,腦皮質(zhì)區(qū)表面蒼白腫脹,梗死中心區(qū)可有不同程度腦組織萎縮,血管分支少,細(xì)小,走行不清;治療組腦皮質(zhì)區(qū)表面蒼白不明顯,組織腫脹較模型組輕,腦缺血梗死中心區(qū)較模型組縮小,血管分布較模型組豐富,分支多,走行清晰可見。(3)NeuN、GFAP和LN蛋白印跡結(jié)果:假手術(shù)組NeuN、GFAP、LN蛋白各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均無明顯改變。模型組NeuN蛋白各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均低于假手術(shù)組,其中IR 24 h、7 d、3 w表達(dá)與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);治療組NeuN的表達(dá)量逐漸升高,各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)量均高于模型組,在IR 72 h后基本接近正常,其中7d、3 w與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。模型組GFAP蛋白相對(duì)表達(dá)量逐漸增加,相對(duì)假手術(shù)組仍低,各時(shí)間點(diǎn)的GFAP表達(dá)量與假手術(shù)組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);治療組各時(shí)間點(diǎn)相對(duì)表達(dá)量較模型組升高,IR 72 h、7 d、3 w表達(dá)相比模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),至IR 7 d后,治療組GFAP蛋白表達(dá)基本接近正常。模型組LN表達(dá)量逐漸增加,各時(shí)間點(diǎn)仍低于假手術(shù)組,24 h、72 h、7 d相比假手術(shù)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而3 w與假手術(shù)組相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);治療組各時(shí)間點(diǎn)LN蛋白表達(dá)量較模型組升高,其7 d、3 w表達(dá)與模型組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)電鏡觀察發(fā)現(xiàn)再灌注24 h、72 h、7 d、3 w治療組大鼠腦組織NVU超微結(jié)構(gòu)的病理形態(tài)損傷均較同時(shí)間點(diǎn)模型組明顯減輕。結(jié)論:(1)PNS對(duì)腦缺血后NVU的保護(hù)作用,可能與上調(diào)腦缺血后NeuN、GFAP、LN蛋白表達(dá)有關(guān)。(2)PNS能同時(shí)減輕腦缺血后NVU損傷的病理形態(tài)變化。(3)PNS可通過整合促進(jìn)腦缺血后NVU的神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和微血管的修復(fù),改善神經(jīng)功能缺損癥狀,對(duì)腦缺血具有保護(hù)作用。
【圖文】：

圖 2-1 大鼠 MCAO 模型成功后典型體征e 2- 1 Typical signs of successful MCAO mode再灌注后 Longa 神經(jīng)功能評(píng)分的變化： 2-1 各組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的比較（ ±s, n=son of neurological deficit scores in rats among e72 h 亞組 7 d 亞組 干預(yù)前 72 h 干預(yù)前 7 0 0 0 0.60 1.83±0.65 1.92±0.63 1.92±0.63 1.50±0.65△1.83±0.65 1.08±0.36▲1.92±0.63 0.92±0

比較無明顯差異；PNS 干預(yù)后治療組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分逐漸顯降低，缺血再灌注后 24 h 與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意 的大鼠神經(jīng)缺損評(píng)分與同時(shí)間點(diǎn)模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)AO 模型取腦后肉眼直觀圖比較，肉眼觀察可見 IR 3 w 假手術(shù)組大鼠腦組織雙側(cè)基本對(duì)稱布豐富，，走行清晰連續(xù)；模型組可見明顯腦梗死灶，腦皮質(zhì)區(qū)可有不同程度腦組織萎縮，血管分支少，細(xì)小，走行不清不明顯，組織腫脹較模型組輕，腦缺血梗死中心區(qū)較模型組富，分支多，走行清晰可見。見圖 2-2。
【學(xué)位授予單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2673780