【摘要】：肺癌無(wú)論是在發(fā)達(dá)國(guó)家還是發(fā)展中國(guó)家都高居癌癥死亡率的首位。我國(guó)越來(lái)越嚴(yán)重的空氣污染使肺癌發(fā)病率不斷攀升,中國(guó)將成為全球肺癌人數(shù)最多的國(guó)家。腫瘤預(yù)防無(wú)疑是降低肺癌篩查、治療和死亡率負(fù)擔(dān)的最佳方法,而研究肺癌相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因子是預(yù)防肺癌的前提。許多研究證明,肥胖是一個(gè)引起癌癥以及癌癥相關(guān)死亡率的危險(xiǎn)因素,然而,它在肺癌發(fā)展中扮演的角色仍有爭(zhēng)議。薏苡仁油是從傳統(tǒng)中藥薏苡仁中提取的有效活性成分,其商業(yè)化制劑為康萊特注射液(KLTI),臨床主要用于不宜手術(shù)的非小細(xì)胞肺癌和原發(fā)性肝癌,與化學(xué)治療結(jié)合能提高有效率,改善生存質(zhì)量和臨床癥狀,減少不良反應(yīng)的發(fā)生。另有研究顯示,薏苡仁油具有減少腹部脂肪的作用,結(jié)合肥胖微環(huán)境促炎作用有利于腫瘤發(fā)展的觀點(diǎn),本研究猜想,假如肥胖微環(huán)境能促進(jìn)肺癌的發(fā)生發(fā)展,口服薏苡仁油的降脂作用也應(yīng)該能降低肥胖微環(huán)境的促肺癌作用。本研究的目的是證實(shí)肥胖微環(huán)境是否促進(jìn)肺癌的發(fā)展以及這種促癌效應(yīng)是否被薏苡仁油減弱。本研究分體外、體內(nèi)和作用機(jī)制三部分進(jìn)行。體外研究中,不同濃度薏苡仁油處理細(xì)胞后,MMT法檢測(cè)3T3-L1、HUVEC和LLC細(xì)胞的增殖能力;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LLC細(xì)胞的遷移能力;伊文思藍(lán)體外滲出性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HUVEC細(xì)胞的內(nèi)皮細(xì)胞滲出性;AO/EB染色及油紅O染色分別檢測(cè)3T3-L1細(xì)胞凋亡和分化。體內(nèi)研究中,用C57BL/6J和KKay兩個(gè)品系的小鼠建立烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型、LLC細(xì)胞同種異體移植模型和LLC細(xì)胞原位移植肺癌模型,喂養(yǎng)小鼠高脂飲食(HFD)或標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動(dòng)物飲食(SRC),每天灌胃給予薏苡仁油乳。記錄實(shí)驗(yàn)小鼠的體重、自主活動(dòng)、肺癌發(fā)病率、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)和肺部轉(zhuǎn)移灶數(shù)等指標(biāo)觀察小鼠生理體征的變化。用HE染色法判斷實(shí)驗(yàn)小鼠肺部的病理學(xué)變化;試劑盒檢測(cè)烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠的胰島素和葡萄糖耐量;免疫組化法檢測(cè)烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌模型和原位移植肺癌模型小鼠腫瘤組織EMT,評(píng)價(jià)超重或肥胖是否促進(jìn)了癌變。為進(jìn)一步探討薏苡仁油肺癌防治機(jī)制,用試劑盒檢測(cè)烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠血清胰島素、膽固醇、瘦素、脂聯(lián)素、白介素6(IL-6)、超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量以及氧化應(yīng)激標(biāo)志物活性氧(ROS)、8-羥化脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)和血管破裂標(biāo)志物5羥基吲哚乙酸(5-HIAA)的水平;伊文思藍(lán)屏障作用檢測(cè)實(shí)驗(yàn)小鼠肺上皮細(xì)胞通透性,干濕重法檢測(cè)小鼠肺水含量;Western blot法檢測(cè)小鼠的肥胖或癌癥相關(guān)細(xì)胞信號(hào)分子的改變,包括酪氨酸激酶(JAK)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT3)、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核轉(zhuǎn)錄因子B(NF-κB)以及細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1)。體外結(jié)果顯示,薏苡仁油能顯著抑制3T3-L1細(xì)胞的增殖,但對(duì)HUVEC和LLC細(xì)胞增殖抑制作用不明顯;對(duì)LLC細(xì)胞的遷移能力無(wú)明顯作用;能減弱HUVECs上皮細(xì)胞通透性;促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞的凋亡和分化。體內(nèi)結(jié)果顯示,與SRC飲食小鼠相較,HFD飲食的C57BL/6J小鼠表現(xiàn)為超重、KKay小鼠表現(xiàn)為肥胖;兩個(gè)品系的HFD飲食小鼠均表現(xiàn)出體重增長(zhǎng)過(guò)快,自主活動(dòng)量降低,烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌和LLC細(xì)胞原位移植肺癌發(fā)病率升高、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)增多,LLC細(xì)胞同種異體移植腫瘤增大、肺部轉(zhuǎn)移灶增多,肺組織病理結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異常、小鼠生存期縮短、死亡率升高。長(zhǎng)期使用薏苡仁油治療使兩個(gè)品系的HFD飲食小鼠均表現(xiàn)出體重降低,自主活動(dòng)量增加,烏拉坦誘導(dǎo)的肺癌和LLC細(xì)胞原位移植肺癌發(fā)生率降低、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)減少,LLC細(xì)胞同種異體移植腫瘤減小、肺部轉(zhuǎn)移灶減少,肺組織病理結(jié)構(gòu)異常改善。機(jī)制研究表明,HFD飲食使兩個(gè)品系的烏拉坦誘導(dǎo)肺癌模型小鼠的葡萄糖和胰島素耐量升高;血清胰島素、膽固醇、瘦素、脂聯(lián)素、IL-6、hs-CRP、TNF-α水平升高;氧化應(yīng)激標(biāo)志物ROS、8-OHdG水平升高;血管破裂標(biāo)志物5-HIAA含量增加;肺上皮細(xì)胞通透性和肺水含量增加;JAK、STAT3、Akt、mTOR、NF-κB和cyclin D1等相關(guān)細(xì)胞信號(hào)分子表達(dá)升高,這些改變促進(jìn)了癌變過(guò)程中肺上皮細(xì)胞增殖和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程。長(zhǎng)期使用薏苡仁油治療使兩個(gè)品系的HFD飲食小鼠肥胖相關(guān)的能量失衡和代謝紊亂得到改善、上述有利于腫瘤發(fā)展的組織細(xì)胞生理改變被抑制,癌變過(guò)程中肺上皮細(xì)胞增殖和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程被阻止,最終荷瘤小鼠生存期延長(zhǎng)、死亡率降低。綜上所述,肥胖微環(huán)境能促進(jìn)肺癌的發(fā)生發(fā)展,而薏苡仁油的治療能顯著改善肥胖微環(huán)境的促肺癌作用,其作用機(jī)制是改善肥胖微環(huán)境造成的能量失衡、代謝功能紊亂和腫瘤間質(zhì)液增多。
【圖文】：

3.5 數(shù)據(jù)分析 Shapiro-Wilk 進(jìn)行正態(tài)分析。正態(tài)分析數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。用 GraphP，Version 版本 5（圣地亞哥、CA、美國(guó)）開(kāi)展統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用單因素或雙因素評(píng)價(jià)組與組之間的差別。P＜0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01 為極顯著性差異。4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1 薏苡仁油對(duì) 3T3-L1、HUVEC 和 LLC 細(xì)胞增殖能力的影響果顯示：不同濃度的薏苡仁油乳對(duì) 3T3-L1 細(xì)胞的增值能力均有抑制作用，并賴性，但對(duì) HUVEC 和 LLC 細(xì)胞的增殖能力影響微弱。表明，在一定劑量下薏對(duì) 3T3-L1 細(xì)胞有增殖抑制作用。（如圖 2-1）

圖 2-2 薏苡仁油對(duì) HUVEC 細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞滲透性的影響Fig.2-2 The impact of Coix seed oil on Endothelial permeability of HUVECs2.4.3 薏苡仁油對(duì) LLC 細(xì)胞遷移的影響結(jié)果顯示：12h 后不同濃度組的細(xì)胞均發(fā)生了遷移，劃痕距離變窄，，劃痕邊緣細(xì)胞出向中間遷移的趨勢(shì)。24h 后不同濃度組的劃痕明顯變窄。與對(duì)照組相比，不同濃薏苡仁油乳劑對(duì) LLC 細(xì)胞的劃痕愈合在 12h 和 24h 時(shí)均沒(méi)有明顯的差別。（如圖）
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2673552