發(fā)布時(shí)間：2020-05-18 19:19

【摘要】：目的:通過觀察Apo E基因敲除AS小鼠主動(dòng)脈蛋白芯片變化以及二陳湯合桃紅四物湯對(duì)Apo E基因敲除AS小鼠的干預(yù)作用,探討二陳湯合桃紅四物湯抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。材料與方法:20只C57BL/6J小鼠做空白對(duì)照組,給予普通小鼠維持飼料喂養(yǎng),60只Apo E-/-小鼠做AS模型組,給予高脂飼料喂養(yǎng)進(jìn)行動(dòng)脈粥樣硬化模型復(fù)制,8周后將60只模型小鼠隨機(jī)分為模型組20只、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組和陽性對(duì)照組各10只,模型組和各治療組繼續(xù)高脂飼料喂養(yǎng)4周,中藥低、中、高劑量組分別給予含有生藥量為0.72g/m L、1.44g/m L、2.89g/m L的中藥煎劑灌胃,陽性對(duì)照組給予濃度為0.0078g/m L的血脂康膠囊水溶液灌胃,每次0.2m L,每日早晚各一次,正常組和模型組給予等體積蒸餾水進(jìn)行灌胃。12周后,超聲下觀察正常組和模型組主動(dòng)脈斑塊形成情況,全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組小鼠血脂水平改變情況,HE染色和油紅O染色觀察各組小鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)改變和脂質(zhì)沉積情況,采用Elisa法檢測(cè)各組小鼠血清TNF-α、IL-6、NO、ET-1水平,采用蛋白芯片技術(shù)分析模型組小鼠主動(dòng)脈組織蛋白表達(dá)改變情況,篩選AS發(fā)病可能的機(jī)制,采用Western Blot技術(shù)和RT-PCR技術(shù)對(duì)篩選出的差異蛋白從蛋白水平或基因水平進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果:1.小動(dòng)物超聲結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠血管管腔變窄,血管內(nèi)膜有較大面積斑塊形成。2.血脂水平檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠血清TC水平、LDL水平、TG水平均顯著升高(P0.01),HDL水平顯著降低(P0.01);與模型組比較,中藥低、中、高劑量組以及陽性對(duì)照組TC水平、LDL水平、TG水平顯著降低(P0.05或P0.01),HDL水平顯著升高(P0.01)。3.HE染色結(jié)果提示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠主動(dòng)脈有較大斑塊形成,與模型組比較,各治療組斑塊情況有不同程度改變,以中藥高劑量和陽性對(duì)照組效果較佳。4.油紅O染色結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠主動(dòng)脈管腔內(nèi)有大量脂質(zhì)沉積。5.血清Elisa檢測(cè)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠血清TNF-α水平、IL-6水平、ET-1水平顯著升高(P0.01),NO水平顯著降低(P0.01);與模型組比較,中藥低、中、高劑量組以及陽性對(duì)照組TNF-α水平、IL-6水平、ET-1水平顯著降低(P0.05或P0.01),NO水平顯著升高(P0.05或P0.01),NO/ET-1顯著升高(P0.05或P0.01);與陽性對(duì)照組比較,中藥低、中劑量組TNF-α、IL-6、ET-1、NO/ET-1水平顯著升高(P0.05或P0.01),NO水平顯著降低(P0.01),中藥高劑量組改變無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。6.蛋白芯片結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組蛋白表達(dá)上調(diào)共有59個(gè),其中上調(diào)大于15%的有31個(gè),上調(diào)大于20%有27個(gè);蛋白表達(dá)下調(diào)的有72個(gè),其中下調(diào)大于15%有27個(gè),下調(diào)大于20%的有18個(gè)。篩選發(fā)現(xiàn),TGFβ/PI3K/AKT/e NOS信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)顯著降低,TNF-α/NF-κB/HIF-1α信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)顯著升高。7.Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠主動(dòng)脈TGF-β、PI3K蛋白表達(dá)水平和AKT、e NOS蛋白磷酸化水平顯著降低(P0.01),Nox4和NF-κB蛋白表達(dá)顯著升高(P0.01);與模型組比較,各治療組小鼠主動(dòng)脈TGF-β、PI3K、Nox4、NF-κB蛋白表達(dá)水平和AKT、e NOS蛋白磷酸化水平有不同程度改善,以中藥中劑量組、中藥高劑量組、陽性對(duì)照組(P0.05或P0.01)效果較為明顯。8.RT-PCR檢測(cè)主動(dòng)脈m RNA表達(dá)結(jié)果顯示,與空白對(duì)照組比較,模型組小鼠主動(dòng)脈TGF-β、PI3K m RNA表達(dá)水平顯著降低(P0.01),VEGF、MMP-9、HIF-1αm RNA表達(dá)水平顯著升高(P0.01);與模型組比較,各治療組小鼠主動(dòng)脈TGF-β、PI3K、VEGF、MMP-9、HIF-1αm RNA表達(dá)水平有不同程度改善,以中藥中劑量組、中藥高劑量組、陽性對(duì)照組(P0.05或P0.01)效果較為明顯。結(jié)論:1.Apo E-/-小鼠飼喂高脂飼料12周后主動(dòng)脈蛋白表達(dá)譜發(fā)生明顯改變。2.二陳湯合桃紅四物湯能有效改善Apo E-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠血脂水平、炎癥反應(yīng),保護(hù)主動(dòng)脈損傷。3.二陳湯合桃紅四物湯保護(hù)Apo E-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈損傷的機(jī)制可能與激活TGF-β/PI3K/AKT/e NOS信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。4.二陳湯合桃紅四物湯保護(hù)Apo E-/-動(dòng)脈粥樣硬化小鼠主動(dòng)脈損傷的機(jī)制可能與抑制TNF-α/Nox4/NF-κB/HIF-1α信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 超聲下 2 組小鼠血管內(nèi)膜斑塊形成情況C、TG、HDL 及 LDL 水平變化脂質(zhì)水平檢測(cè)結(jié)果顯示，，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠血清 TC、升高（P<0.01），HDL 水平顯著降低（P<0.01）。

圖 2 兩組小鼠血脂變化情況：1 空白對(duì)照組，2 模型組。與空白對(duì)照組比較，**P<0.01。 主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)變化小鼠主動(dòng)脈 HE 染色結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組小鼠主動(dòng)脈有明顯
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2670202