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人參莖葉總皂苷和風(fēng)味黑參的質(zhì)量分析及藥理活性研究

發(fā)布時間:2020-05-18 17:28
【摘要】:本篇論文主要對人參莖葉總皂苷(Toatal Ginsenoside of Ginseng stems and leaves SLG)及以大蒜作為人參的加工助劑得到的新的人參加工品——風(fēng)味黑參(Flavored black ginseng FBG)進(jìn)行研究。探討SLG和FBG的質(zhì)量及生物活性,其主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1、人參莖葉總皂苷和風(fēng)味黑參的質(zhì)量分析。首先采用高效液相法(HPLC)對SLG和FBG中20種人參皂苷含量進(jìn)行測定,接著通過苯酚硫酸法、二硝基水楊酸(DNS)法、考馬斯亮藍(lán)法和HPLC法分別測定FBG中總糖、還原糖、蛋白和5-羥甲基糠醛的含量;最后,探索大蒜對FBG加工中人參皂苷轉(zhuǎn)化的影響。結(jié)果可知:SLG中含20種人參皂苷含量總計69.99%,FBG中常見人參皂苷轉(zhuǎn)化為人參皂苷Rk3、Rg5等稀有皂苷。同時,FBG中還原糖占總糖含量的92.06%,蛋白含量極低,并且5-羥甲基糠醛含量低至7.40mg/kg。從加工的時間和溫度來研究大蒜作用時,發(fā)現(xiàn)大蒜有促進(jìn)人參皂苷轉(zhuǎn)化的作用,一次性高溫高壓加工時間越長,溫度越高,越向極性低的人參皂苷轉(zhuǎn)化。2、人參莖葉總皂苷的預(yù)防肥胖作用及機(jī)制研究。通過分組后邊給高脂飲食(HFD)邊給藥的整體動物實(shí)驗(yàn)方法,研究SLG預(yù)防肥胖作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取血清,臟器組織并計算臟器指數(shù);根據(jù)試劑盒說明書測定血清中相關(guān)指標(biāo);采用質(zhì)譜連用方法測定肌肉組織中;鈮A的含量;最后采用HE染色、免疫組化、蛋白質(zhì)印跡(Western blot)和實(shí)時定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)的方法對肝臟和脂肪組織進(jìn)行分析測定。結(jié)果顯示:SLG可明顯減少HFD誘導(dǎo)的C57BL/6肥胖小鼠的體重增加,減少臟器指數(shù)。與HFD相比,SLG降低游離脂肪酸(FFA)、瘦素(Leptin)、葡萄糖(Glucose)和胰島素(Insulin)的含量,緩解血脂異常,調(diào)節(jié);鈮A水平。此外,在肝臟組織中,SLG下調(diào)PPARγ、FAS、CD36和FATP2的表達(dá),上調(diào)CPT-1、UCP-2、PPARα、HSL和ATGL的表達(dá)。同時,與HFD組相比,SLG降低脂肪組織中PPARγ、aP2和Leptin的mRNA水平,上調(diào)PPARα、PGC-1α、UCP-1和UCP-3的基因表達(dá)。由此可知:SLG在125-500 mg/kg范圍內(nèi)有明顯的預(yù)防肥胖作用,其機(jī)理與促進(jìn)線粒體的β-氧化、產(chǎn)熱、抑制脂肪生成、促進(jìn)脂肪降解和降低游離脂肪酸攝取有關(guān)。3、風(fēng)味黑參及其多糖的抗腫瘤作用及機(jī)制研究。通過建立H_(22)荷瘤小鼠模型,研究FBG及其多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取血清、臟器和腫瘤組織并計算抑瘤率、臟器指數(shù);根據(jù)試劑盒說明書測定血清中生理和細(xì)胞因子指標(biāo);最后采用HE染色、TUNEL染色、免疫組化、Western blot和RT-PCR方法對腫瘤組織進(jìn)行測定。結(jié)果顯示:FBG及其多糖(Flavor black ginseng polysaccharide FBGP)高劑量的抑瘤率分別為61.74%、57.84%,并且能夠升高免疫器官指數(shù)和細(xì)胞因子含量,無明顯毒副作用。此外,從HE染色、TUNEL染色、免疫組化、Western blot和RT-PCR分析中可以發(fā)現(xiàn)FBG及其多糖能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,上調(diào)Bax和下調(diào)Bcl-2、VEGF的表達(dá)。因此,FBG及FBGP通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抑制血管生成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等機(jī)制達(dá)到抑制H_(22)荷瘤小鼠腫瘤生長的作用。4、風(fēng)味黑參的抗抑郁作用及初步機(jī)制研究。首先采用經(jīng)典行為絕望模型,懸尾試驗(yàn)(TST)和強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)(FST)來考察FBG抗抑郁作用,篩選出最佳劑量;接著通過受體拮抗劑或激動劑預(yù)處理來研究5-羥色胺能、去甲腎上腺素能、多巴胺能、γ-氨基丁酸GABA能和谷氨酸(GLU)能系統(tǒng)是否參與FBG在FST中的抗抑郁作用;最后測量小鼠腦組織海馬區(qū)中的5-HT、NA、DA、GABA和GLU水平。結(jié)果表明:與模型組相比,FBG(100mg/kg)可顯著縮短小鼠在TST和FST中不動時間,而對自主活動試驗(yàn)無影響。此外,通過給予阻斷劑實(shí)驗(yàn)及腦組織勻漿指標(biāo)的測定,發(fā)現(xiàn)FBG升高5-HT、NA和GABA水平,降低GLU水平,對DA水平無明顯著性變化。由此得出FBG具有明顯的抗抑郁作用,其機(jī)制可能通過5-羥色胺能、去甲腎上腺素能、GABA能和GLU能系統(tǒng)介導(dǎo)產(chǎn)生抗抑郁作用。
【圖文】:

色譜圖,色譜圖,原人參二醇,人參皂苷


圖 1.1 混標(biāo)(A)、SLG (B)和 FBG (C)的色譜圖Fig.1.1 Chromatograms of mixed standard solution (A), SLG (B) and FBG (C)人參皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、20(R)-Rh1、Rb2、Rb3、F1、Rd、Rk3、F2、Rh4、20(-Rg3、Rk1、Rg5、Rh2、原人參二醇。ginsenoside Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, 20(R)-Rh1, Rb2, Rb3, F1, Rd, Rk3, F2, Rh4, 20(-Rg3, Rk1, Rg5, Rh2, protopanaxadiol.

色譜圖,原人參二醇,色譜圖,人參皂苷


圖 1.1 混標(biāo)(A)、SLG (B)和 FBG (C)的色譜圖Fig.1.1 Chromatograms of mixed standard solution (A), SLG (B) and FBG (C):人參皂苷 Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、20(R)-Rh1、Rb2、Rb3、F1、Rd、Rk3、F2、Rh4、20(S)-Rg3、Rk1、Rg5、Rh2、原人參二醇。: ginsenoside Rg1, Re, Rf, Rb1, Rg2, Rc, 20(R)-Rh1, Rb2, Rb3, F1, Rd, Rk3, F2, Rh4, 20(S)-Rg3, Rk1, Rg5, Rh2, protopanaxadiol.
【學(xué)位授予單位】:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號】:R285.5;R284

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號:2670070

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