【摘要】：大黃是傳統(tǒng)中藥材品種,主產(chǎn)甘肅、青海、陜西、西藏等地。陜西省鎮(zhèn)巴縣是全國最大的藥用大黃種植基地,但在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、品質(zhì)評價(jià)方面研究較少。論文系統(tǒng)分析了鎮(zhèn)巴藥用大黃藥材的主要成分。發(fā)現(xiàn)了可降解大黃結(jié)合型蒽醌類化合物菌株,進(jìn)一步優(yōu)化了生物轉(zhuǎn)化工藝參數(shù),為游離型蒽醌單體藥物的富集、制備提供了綠色工藝。分離純化了參與生物轉(zhuǎn)化的糖苷酶并研究了酶的基本特性。論文主要實(shí)驗(yàn)及結(jié)果如下:(1)苯酚-硫酸比色法測定鎮(zhèn)巴藥用大黃多糖含量為7.04%,考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)含量為0.35%;根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.4-2016測得灰分含量為3.78%;電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀(ICP)測得重金屬鉛、鎘、砷含量分別為1.94、0.56、1.76mg/kg;總蒽醌與游離型蒽醌含量分別為1.79%、1.07%,重金屬及主要成分指標(biāo)均符合《2015版中國藥典》限量要求。(2)采用制備型高效液相色譜純化了主要的游離型和結(jié)合型蒽醌化合物。制備得到5個(gè)游離型蒽醌單體:蘆薈大黃素(99.26%)、大黃酸(98.47%)、大黃素(98.65%)、大黃酚(99.75%)、大黃素甲醚(92.31%);制備得到2個(gè)結(jié)合型蒽醌,通過與標(biāo)準(zhǔn)品比對,分別為:大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷(97.65%)和大黃酸-8-O-β-D-葡萄糖苷(98.32%)。(3)在自然環(huán)境下發(fā)現(xiàn)了能夠在大黃藥材上生長的菌株,采用平板畫線法將生長旺盛的優(yōu)勢菌株純化培養(yǎng)得到3株純種菌株。通過形態(tài)學(xué)觀察與ITS序列分析將3種菌株鑒定為:棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)菌株、白地霉(Galactomyces)菌株、黃曲霉(Aspergillus flavus)菌株。初步轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果顯示3種菌株都具有將結(jié)合型蒽醌定向轉(zhuǎn)化為游離型蒽醌的能力,其中黃曲霉菌株轉(zhuǎn)化能力最強(qiáng),轉(zhuǎn)化率可達(dá)到60%以上。(4)利用黃曲霉菌株進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化研究。以游離型蒽醌轉(zhuǎn)化率(游離型蒽醌增加量/總游離型蒽醌量)為指標(biāo),考察轉(zhuǎn)化時(shí)間、轉(zhuǎn)化溫度、接種量等因素對轉(zhuǎn)化的影響。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)優(yōu)化了轉(zhuǎn)化工藝參數(shù)。結(jié)果表明:最佳轉(zhuǎn)化工藝為轉(zhuǎn)化時(shí)間5d,轉(zhuǎn)化溫度29.3℃,接種量8.4%,在此條件下,游離型蒽醌的平均轉(zhuǎn)化率達(dá)73.2%。(5)通過葡聚糖凝膠柱層析分離純化得到降解結(jié)合型蒽醌的糖苷酶,SDS-聚丙烯酰胺凝膠法測得酶分子量大小約為68kDa,并對酶的性質(zhì)進(jìn)行研究,確定酶反應(yīng)的最適pH值為7.0,最適溫度為35.0℃。體外酶催化大黃藥材與大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),表明該酶能夠水解切除結(jié)合型蒽醌糖鏈生成游離型蒽醌。進(jìn)一步證明了黃曲霉菌株是通過分泌糖苷酶水解糖側(cè)鏈實(shí)現(xiàn)大黃結(jié)合型蒽醌向游離型蒽醌生成轉(zhuǎn)化。
【圖文】：

型蒽醌轉(zhuǎn)化為游離型蒽醌，，為游離型蒽醌化合物工業(yè)生產(chǎn)提供綠色環(huán)保的新方法。1.6.2 技術(shù)路線圖1-9 技術(shù)路線示意圖Fig.1-9 Technical route diagram

大黃中 5 種游離型蒽醌蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚混合標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖如圖 2-4。圖2-4 大黃游離型蒽醌混標(biāo)液相圖Fig.2-4Liquid phase diagram of Free Anthraquinone mixed standard in rhubarb
【學(xué)位授予單位】：陜西理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284.1

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本文編號：2666772