【摘要】：目的:研究金雀異黃素(genistein,GEN)對脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)活化的小鼠巨噬細(xì)胞凋亡的影響,以及是否與調(diào)控mi R-21有關(guān)。方法:1.應(yīng)用不同濃度LPS(0、500、1 000 ng·m L-1)活化RAW264.7細(xì)胞12h或24h,q RT-PCR檢測TNF-α和IL-6 m RNA表達(dá),Western Blot檢測COX-2和i NOS蛋白表達(dá)。使用不同濃度GEN(10、20、40μM)預(yù)孵育細(xì)胞2h,再與LPS(1 000 ng·m L-1)共同孵育24h后,CCK8檢測細(xì)胞活力,Annexin V-FITC/PI法檢測細(xì)胞凋亡,q RT-PCR檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP基因表達(dá),Western Blot檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP凋亡蛋白表達(dá)。GEN(20μM)預(yù)處理細(xì)胞2h,再與LPS(1 000 ng·m L-1)共孵育24h后,q RT-PCR檢測mi R-21基因表達(dá)。2.分別使用攜帶mi R-21 NC、mi R-21 OE、mi R-21 NC、mi R-21 KD的慢病毒感染RAW264.7細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩選,構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系,LPS處理24h,CCK8檢測細(xì)胞活力,q RT-PCR檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP和mi R-21基因表達(dá),Western Blot檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP蛋白表達(dá)。3.GEN預(yù)處理慢病毒介導(dǎo)的mi R-21 NC、mi R-21 OE、mi R-21 NC、mi R-21 KD細(xì)胞2h,再與LPS共孵育24h,CCK8檢測細(xì)胞活力,q RT-PCR檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP基因表達(dá),Western Blot檢測caspase-3、caspase-8、Bcl-2、Bax、CHOP蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.與對照組相比,LPS(1 000 ng·m L-1,24h)可以明顯上調(diào)TNF-α和IL-6 m RNA表達(dá)(P0.05),促進(jìn)COX-2和i NOS蛋白表達(dá)。因此,我們選取1 000 ng·m L-1 LPS孵育24h作為活化RAW264.7細(xì)胞的最佳藥物濃度和作用時間。與對照組相比,LPS可明顯增強(qiáng)細(xì)胞活力(P0.05),降低細(xì)胞凋亡率,下調(diào)caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)。與LPS組相比,GEN(10、20、40μM)可呈濃度依賴性抑制LPS活化的RAW264.7細(xì)胞活力(P0.05),升高細(xì)胞凋亡率,并促進(jìn)caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá),抑制Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)。綜合考慮,在GEN 20μM具有統(tǒng)計學(xué)差異,所以,我們選取20μM為GEN最佳藥物濃度。與對照組相比,LPS可明顯上調(diào)mi R-21表達(dá)(P0.05);與LPS組相比,GEN可明顯下調(diào)mi R-21表達(dá)(P0.05)。2.與mi R-21 NC組相比,mi R-21 OE組mi R-21表達(dá)上調(diào)約2.5倍(P0.05),與mi R-21 NC相比較,mi R-21 KD組中mi R-21表達(dá)下調(diào)約70%(P0.05),可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。mi R-21 OE增強(qiáng)LPS活化的RAW264.7細(xì)胞活力(P0.05),下調(diào)caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá),上調(diào)Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)。mi R-21 KD抑制LPS活化的RAW264.7細(xì)胞活力(P0.05),上調(diào)caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá),下調(diào)Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)。3.與RAW264.7+GEN+LPS組相比,mi R-21 OE+GEN+LPS組細(xì)胞活力明顯增強(qiáng)(P0.05),caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá)均下降,Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)均升高。與RAW264.7+GEN+LPS組相比,mi R-21 KD+GEN+LPS組細(xì)胞活力明顯下降(P0.05),caspase-3、caspase-8、Bax、CHOP基因(P0.05)及蛋白表達(dá)均升高,Bcl-2基因(P0.05)及蛋白表達(dá)均下降。結(jié)論:GEN可能通過下調(diào)mi R-21表達(dá),促進(jìn)LPS活化的RAW264.7細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

圖 1-1 構(gòu)建 LPS 活化的 RAW264.7 細(xì)胞模型 RAW264.7 細(xì)胞經(jīng) LPS 處理 12h或者 24h。qRT-PCR 檢測 TNF-α（A）、IL-6（B）mRNA 表達(dá)，Western Blot 檢測 COX-2（C）、iNOS （D）蛋白表達(dá)。n=3， x±s，*P<0.05。1.3.2 GEN 對 LPS 活化的 RAW264.7 細(xì)胞活力影響分別使用 10、20、40 μM GEN 預(yù)處理細(xì)胞 2h，再與 LPS（1 000 ng·mL-1）共孵育 24h。與對照組相比，LPS 明顯增加細(xì)胞活力（P<0.05）；GEN（10、20、40μM ）則呈濃度依賴性抑制 LPS 活化的 RAW264.7 細(xì)胞活力，見圖 1-2。

LPS 活化的 RAW264.7 細(xì)胞活力的影響 不同育細(xì)胞 2h，再與 LPS 共同孵育 24h，，CCK8 *P<0.05。 LPS 活化的 RAW264.7 細(xì)胞凋亡率的N（10、20、40 μM ）預(yù)孵育細(xì)胞 2h，再與 LP用 Annexin V-FITC/PI 凋亡試劑盒檢測細(xì)胞凋率為 5.3%，GEN 組（10、20、40 μM）凋
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王磊;張黎明;;鎂離子對金雀異黃素在遺傳性高血壓大鼠血壓調(diào)節(jié)作用的影響[J];生命科學(xué)儀器;2017年06期

2 吳雅冬;田蕊;胡玉紅;朱紫薇;夏文焱;劉艷娣;;金雀異黃素對孕期母鼠肥胖的影響研究[J];黑龍江醫(yī)藥科學(xué);2018年01期

3 劉春鳳;;金雀異黃素乙二胺鹽的制備及理化性質(zhì)研究[J];北方藥學(xué);2018年06期

4 范玉貞;王玉華;;金雀異黃素抗腫瘤作用的研究進(jìn)展[J];實(shí)用腫瘤學(xué)雜志;2008年01期

5 朱松柏;呂永曼;;金雀異黃素抗癌作用分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];華中醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

6 袁志蘭,周青,王斌,戈應(yīng)濱,袁孝如;缺氧誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞19中血管內(nèi)皮生長因子mRNA表達(dá)及金雀異黃素的抑制作用[J];中國臨床康復(fù);2005年18期

7 李琴山;劉洋;馮贊杰;錢民章;;金雀異黃素抑制單核細(xì)胞趨化蛋白-1誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡[J];中國病理生理雜志;2007年05期

8 佘戟,莫麗兒,梁念慈;合成金雀異黃素水溶性硫酸酯的研究[J];化學(xué)通報;2000年01期

9 陳桂茹,常鳳啟,陳玉海;高效液相色譜法測定金轉(zhuǎn)停中金雀異黃素[J];中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2000年02期

10 劉文，宋芝娟，梁念慈;Effects of genistein on aggregation and cytosolic free calcium in pig platelets[J];Acta Pharmacologica Sinica;1998年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 孫莉靜;袁偉杰;姜小宇;李保春;崔若蘭;;金雀異黃素對PDGF刺激下大鼠系膜細(xì)胞增殖及周期調(diào)節(jié)蛋白的影響[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

2 逄曉云;于榕;貢沁燕;;金雀異黃素對正常的和過氧化氫損傷的內(nèi)皮細(xì)胞的影響[A];第八屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會暨第七屆Servier獎頒獎大會會議摘要集[C];2003年

3 劉楠梅;袁偉杰;于建平;劉先鋒;賈鳳玉;;金雀異黃素對糖尿病大鼠代謝紊亂及腎臟病理的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

4 劉楠梅;袁偉杰;劉先鋒;賈鳳玉;;金雀異黃素對高糖培養(yǎng)下腎小球系膜細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

5 李云;張勇;;鋅與金雀異黃素對小鼠胚胎肢芽的影響[A];第四屆第二次中國毒理學(xué)會食品毒理學(xué)專業(yè)委員會與營養(yǎng)食品所毒理室聯(lián)合召開學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

6 賈鳳玉;袁偉杰;劉楠梅;劉先鋒;張曉瑛;;金雀異黃素對晚期糖基化終末產(chǎn)物刺激大鼠系膜細(xì)胞的保護(hù)作用[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

7 賈鳳玉;袁偉杰;劉楠梅;劉先鋒;張曉瑛;;金雀異黃素對終末糖化產(chǎn)物刺激大鼠系膜細(xì)胞終末糖化產(chǎn)物受體表達(dá)的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

8 孫莉娜;趙婷婷;鞠婷;王瀟然;張黎明;于桂春;;金雀異黃素和鎂劑聯(lián)合應(yīng)用對自發(fā)性高血壓大鼠血壓的影響及相關(guān)血管機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十七次全國神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編（上）[C];2014年

9 姜曉宇;張愛平;丁堯海;王艷俠;張磊;石書梅;李宏棟;;金雀異黃素對大鼠腎小球基質(zhì)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2006年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2006年

10 劉楠梅;袁偉杰;于建平;張小瑛;石姝;;金雀異黃素對糖尿病大鼠腎臟細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生及降解的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會腎臟病學(xué)分會2004年年會”暨“第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會議”論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 記者 王夕;齊艷：我們?yōu)槭裁匆喑宰仙澄铮縖N];北京科技報;2014年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前8條

1 袁志蘭;金雀異黃素抑制眼內(nèi)新生血管性疾病的作用和機(jī)理研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2005年

2 王晶華;金雀異黃素合成工藝優(yōu)化及抗腫瘤活性研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2006年

3 游江;金雀異黃素抑制增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變的研究[D];中南大學(xué);2006年

4 劉芳;抗Ⅳ型膠原抗體偶聯(lián)金雀異黃素抑制后發(fā)障的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

5 扶志敏;調(diào)控MnSOD/FoxM1表達(dá)介導(dǎo)金雀異黃素逆轉(zhuǎn)H460源性肺癌干細(xì)胞樣細(xì)胞表型[D];暨南大學(xué);2017年

6 金延澤;金雀異黃素對大鼠異位子宮內(nèi)膜的作用及相關(guān)機(jī)制[D];延邊大學(xué);2012年

7 王媛媛;金雀異黃素對高糖環(huán)境足細(xì)胞自噬和炎癥損傷的干預(yù)機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

8 陳棟;金雀異黃素對尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）生長的影響及其機(jī)制研究[D];中國海洋大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 向麗萍;金雀異黃素調(diào)控miR-21對LPS活化的小鼠巨噬細(xì)胞凋亡的影響[D];湖南師范大學(xué);2019年

2 翟曉涵;金雀異黃素調(diào)控Nrf2及二相解毒酶的表達(dá)對Caco-2細(xì)胞氧化損傷保護(hù)機(jī)制的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2013年

3 甄井龍;金雀異黃素對雌性大鼠卵巢儲備功能的作用研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2018年

4 王娟;金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細(xì)胞增殖遷移作用及其機(jī)制的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2017年

5 李程;7-二氟甲氧基-5，4’-二甲氧基金雀異黃素穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖南師范大學(xué);2011年

6 陳曉蛟;金雀異黃素對哮喘小鼠胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素介導(dǎo)的Th2優(yōu)勢免疫的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2015年

7 梅煜明;蛋白酪氨酸激酶及金雀異黃素對人腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 向劍;金雀異黃素經(jīng)Nrf2和PI3K上調(diào)HO-1表達(dá)減輕Aβ神經(jīng)毒性損傷[D];南華大學(xué);2017年

9 計江東;金雀異黃素抑制缺氧人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞VEGF表達(dá)機(jī)理的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

10 高晉;金雀異黃素抗胰腺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

本文編號：2666294