發(fā)布時間：2020-05-15 05:54

【摘要】：目的:建立可靠穩(wěn)定的明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)以及焦慮動物模型,提供客觀規(guī)范的抗焦慮中藥藥效評價方法;在此基礎上研究荷葉黃酮的抗焦慮作用,為抗焦慮中藥提供候選藥物。方法:1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的建立1.1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的研制系統(tǒng)采用攝像視頻跟蹤技術識別目標。硬件系統(tǒng)采用封閉的箱體,紅外燈作為背景光源,白熾燈作為明室光源,模擬自然環(huán)境。軟件采用Microsoft Visua1 C++6.0開發(fā),利用圖像處理、數(shù)據(jù)挖掘等技術提取多項指標體系以及圖像信息。1.2系統(tǒng)可靠性、穩(wěn)定性的驗證(1)40只Wistar大鼠,隨機分為兩組:明室無燈組(明室燈光照度為2 lux,暗室照度為2 lux)、明室有燈組(明室燈光照度為400 lux,暗室照度為2 lux),錄制視頻,人工記錄5min內Wistar大鼠在檢測箱中兩室滯留時間,對系統(tǒng)所提供的明暗環(huán)境的進行驗證。(2)明暗環(huán)境成立的基礎上,人工手動記錄5min內40只Wistar大鼠在檢測箱中的運動時間,同時軟件根據(jù)不同的運動閾值(運動閾值取9、18、27、36、45、54 cm/s),分析得到不同的運動時間。將兩者記錄得到的運動時間進行相關性分析,確定最佳的運動閾值。(3)在成立的明暗環(huán)境和最佳運動閾值下,記錄5 min內20只Wistar大鼠的穿箱次數(shù)、入暗次數(shù)、明室時間以及暗室時間等指標,并將人工記錄數(shù)據(jù)與軟件分析結果進行相關性分析,對指標可靠性進行驗證。2焦慮動物模型的建立2.1慢性應激致雌雄大鼠焦慮模型的建立雌雄各24只SD大鼠,隨機分為雌性正常組、雄性正常組、雌性模型組、雌性模型組。慢性應激模型組采用足電、禁水、禁食、光照、黑暗、單籠、傾斜等9種應激因子刺激21天,每天隨機進行1種應激刺激。造模結束后,進行大鼠曠場實驗、新奇事物探索實驗、明暗箱實驗。2.2不確定性空瓶飲水應激致大鼠焦慮模型的建立16只SD大鼠隨機分為:正常組、空瓶應激模型組。分別在造模第7 d、14 d、21 d采用曠場實驗、新奇事物探索實驗和明暗箱實驗評價不確定性空瓶應激對SD大鼠焦慮的影響。2.3慢性束縛致小鼠焦慮模型的建立30只ICR小鼠按體重隨機分為:正常對照組、慢性束縛模型組。模型組每天束縛1次,每次6 h。14天后采用采用曠場實驗、明暗箱實驗、高架十字迷宮實驗評價CRS對小鼠自主活動能力以及焦慮的影響。3荷葉黃酮抗焦慮作用研究3.1荷葉黃酮對狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究90只ICR小鼠隨機分為空白對照組(0.5%CMC-Na)、荷葉黃酮低、中、高劑量組(0.75、1.5、3 g/kg)、陽性藥1組(氫溴酸西酞普蘭10mg/kg)、陽性藥2組(地西泮2 mg/kg)。灌胃給藥14天后,采用曠場實驗、高架十字迷宮實驗、明暗箱實驗評價荷葉黃酮對小鼠自主活動能力及焦慮的影響。'3.2荷葉黃酮對小鼠慢性束縛狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究105只ICR小鼠隨機分正常對照組、束縛6h模型組、荷葉黃酮低、中、高劑量組(0.75、1.5、3 g/kg)、陽性藥1組(氫溴酸西酞普蘭10mg/kg)、陽性藥2組(地西泮2 mg/kg),灌胃給藥14天后,采用曠場實驗、明暗箱實驗、高架十字迷宮實驗評價荷葉黃酮對CRS模型小鼠自主活動能力以及焦慮的影響。結果:1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的建立1.1明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)的研制建立了穩(wěn)定可靠、單次可檢測4樣本、提取明室時間、穿箱次數(shù)、運動時間等20多項指標體系以及多種圖像信息的明暗箱實驗圖像分析處理系統(tǒng)。1.2系統(tǒng)可靠性、穩(wěn)定性的驗證:(1)明室有燈組的穿箱次數(shù)(P0.05)、明室時間(P0.01)顯著減少、暗室時間顯著增加(P0.05),且暗室時間所占百分率為79.4%。(2)當運動閾值為18 cm/s時,r為0.996,人機相關系數(shù)最高(P0.01)。(3)運動閾值為18 cm/s時,穿箱次數(shù)、明室滯留時間、暗室滯留時間等指標參數(shù)的人機相關性系數(shù)r均大于0.99(P0.01)。2焦慮動物模型的建立2.1慢性應激致雌雄大鼠焦慮模型的建立雌雄模型組的中央運動時間、中央?yún)^(qū)運動時間比率、明室時間、穿箱次數(shù)均顯著減少(P0.01或p0.05),探索潛伏期(P0.01)均顯著性增加。2.2不確定性空瓶飲水應激致大鼠焦慮模型的建立不確定空瓶模型在14d、21d時,分別與對應空白組相比,中央運動時間、明室時間顯著減少(P0.05)、探索潛伏期顯著增加(P0.05或P0.01)。2.3慢性束縛致小鼠焦慮模型的建立束縛模型組的中央?yún)^(qū)時間、中央?yún)^(qū)時間比率、穿箱次數(shù)、開臂時間、開臂時間百分比、開臂次數(shù)百分比均顯著減少(P0.05或P0.01)。3荷葉黃酮抗焦慮作用研究3.1荷葉黃酮對狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究荷葉黃酮(3g/kg)可顯著增加ICR小鼠OE(P0.01)。3.2荷葉黃酮對小鼠慢性束縛狀態(tài)性焦慮模型的抗焦慮作用研究與空白組相比,CRS模型組的OE%、0T%、明室時間、穿箱次數(shù)的均顯著減少(P0.05)。與CRS模型組相比,荷葉黃酮(3g/kg)組的OE、OE%、OT%、穿箱次數(shù)顯著增加(P0.05或P0.01)。結論:本研究采用視頻跟蹤、圖像處理、數(shù)據(jù)挖掘等技術,創(chuàng)新性的研制了提取信息量大、數(shù)據(jù)可靠、單次檢測樣本量大、自動化程度高的明暗箱圖像分析處理系統(tǒng);從心理應激、軀體應激、社會應激等誘發(fā)因素角度,成功建立了慢性應激(9種應激)、不確定性空瓶飲水應激(14d,21d)、慢性束縛(6h/d,14d)三種穩(wěn)定可靠、重復性較好的焦慮動物模型�；诖�,研究荷葉的抗焦慮作用,得出荷葉黃酮(3g/kg)對狀態(tài)性、特質性焦慮模型有抗焦慮作用。
【圖文】：

圖１－１－１明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)硬件效果圖逡逑注：Ａ明暗箱明暗箱圖像分析處理系統(tǒng)硬件整體效果圖逡逑Ｂ明暗箱＠像分析處理系統(tǒng)硬件效果圖逡逑

頂部中間位置安裝有攝像頭，攝像頭上裝有紅外截止濾景光源波長８５０邋ｎｍ，側面平行照射，安裝于２倍于老鼠身約為（７－１０邋ｃｍ），底部為不銹鋼柵，鋼柵下方有用于收集抽屜。ＣＡＮ現(xiàn)場總線接收軟件發(fā)送指令，開啟紅外光，工暗箱中動物活動情況，采集到的模擬信號由圖像采集卡轉化件系統(tǒng)。本系統(tǒng)硬件跟實驗室穿梭實驗、獲得性無助采用的明暗箱實驗圖像分析處理系統(tǒng)實物圖，見圖１－１－４。逡逑
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2664572