【摘要】：目的:研究化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠腎臟損傷的干預(yù)作用,并探討其作用機(jī)制是否與調(diào)控腎組織Notch和Hedgehog(Hh)通路的激活有關(guān)。方法:60只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)選取10只作為正常組(C組),50只為造模組。造模組大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量(35 mg/kg)鏈脲佐菌素(streptozotion,STZ)腹腔注射以建立糖尿病大鼠模型。成模大鼠隨機(jī)分為模型組(M組)、化瘀通絡(luò)中藥組(Q組)和厄貝沙坦組(I組)。Q組和I組分別給予相應(yīng)藥物灌胃,C組和M組予相應(yīng)體積的純凈水灌胃,連續(xù)灌胃16周。期間定期監(jiān)測(cè)血糖、飲水量、進(jìn)食量、尿量、24h尿蛋白定量;于第16周末大鼠稱(chēng)重,麻醉后留取血、尿標(biāo)本,取右腎稱(chēng)重,留取腎組織標(biāo)本,采用光鏡、電鏡進(jìn)行病理學(xué)觀察;采用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry technique,IHC)、實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)和蛋白印跡法(Western Blot)對(duì)Notch和Hh信號(hào)通路中相關(guān)蛋白及m RNA表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果:1化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠“瘀血阻絡(luò)證”的干預(yù)作用1.1大鼠一般狀況C組大鼠一般狀況良好,糖尿病(diabetes mellitus,DM)造模成功后,M、Q、I組大鼠出現(xiàn)不同程度的毛色晦暗、反應(yīng)遲鈍、舌色爪色紫暗等癥狀,于第12周部分大鼠出現(xiàn)膿瘡等并發(fā)癥。于第12周開(kāi)始,各治療組大鼠與模型組相比,上述癥狀有不同程度減輕。1.2隨機(jī)血糖和血脂水平與C組相比,各造模組大鼠甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和極低密度脂蛋白膽固醇水平明顯升高(P0.01)。而與M組相比,化瘀通絡(luò)中藥組大鼠甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇和極低密度脂蛋白膽固醇水平明顯降低(P0.01)。各造模組大鼠的隨機(jī)血糖值,組間比較未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。1.3 24小時(shí)尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果從干預(yù)第4周末開(kāi)始,與C組對(duì)比,各造模組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量均明顯上升(P0.01);但于第12周和16周末,與M組對(duì)比,Q組和I組大鼠的24小時(shí)尿蛋白定量均明顯降低(P0.01);于第16周末,Q組較I組明顯降低(P0.01)。1.4血凝指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果與C組比較,各造模組大鼠血漿凝血酶原時(shí)間(prothrombin time,PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(activated partial thromboplastin time,APTT)、凝血酶時(shí)間(thrombin time,TT)均明顯縮短(P0.05或P0.01),國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(international standardization ratio,INR)明顯減小(P0.01),血漿纖維蛋白原(fibrinogen,FIB)水平明顯升高(P0.01)。與M組比較,Q組大鼠PT、INR和APTT均明顯增大(P0.05或P0.01),I組無(wú)明顯差異(P0.05)。在TT和FIB方面,各造模組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠腎臟損傷的干預(yù)作用2.1腎臟肥大指數(shù)比較與C組對(duì)比,各造模組大鼠腎臟肥大指數(shù)明顯升高(P0.01);而與M組對(duì)比,Q組DKD大鼠的腎臟肥大指數(shù)明顯降低(P0.01)。2.2光鏡及透射電鏡觀察結(jié)果光鏡觀察可見(jiàn)各造模組大鼠出現(xiàn)不同程度的腎小球體積增大,腎小囊腔隙狹窄,腎小球基底膜增厚,系膜基質(zhì)增多,腎小管上皮細(xì)胞腫脹;電鏡可見(jiàn)基底膜不規(guī)則性增厚,足突部分融合;而各治療組病理改變較模型組有不同程度減輕。2.3腎功能檢測(cè)與C組對(duì)比,各造模組大鼠血肌酐、尿素氮及尿酸水平均顯著升高(P0.01);與M組對(duì)比,Q組大鼠的血肌酐和血尿酸水平顯著降低(P0.01)。3化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠腎組織Notch通路表達(dá)的干預(yù)作用3.1 Real-time PCR檢測(cè)腎組織Notch1、Jagged1、HES1和Hey1 m RNA表達(dá)與C組對(duì)比,各造模組大鼠腎皮質(zhì)Notch1、Jagged1、HES1和Hey1m RNA表達(dá)量明顯升高(P0.01);與M組對(duì)比,Q組和I組大鼠Notch1、Jagged1、HES1和Hey1 m RNA表達(dá)量均明顯減少(P0.01);與I組對(duì)比,Q組大鼠HES1 m RNA表達(dá)量明顯減少(P0.01)。3.2免疫組化法檢測(cè)腎組織Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白表達(dá)Notch1蛋白陽(yáng)性信號(hào)主要定位于腎小球固有細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞的胞漿,呈黃色或棕黃色顆粒狀;Hey1蛋白陽(yáng)性信號(hào)主要定位于腎小球固有細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核和/或胞漿;HES1蛋白陽(yáng)性信號(hào)主要定位于腎小球固有細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核;Jagged1蛋白陽(yáng)性信號(hào)主要定位于腎小管上皮細(xì)胞的胞漿。Notch1、HES1、Hey1和Jagged1蛋白于C組大鼠有少量表達(dá),M組表達(dá)明顯增多,Q組和I組較M組有所減少。3.3 Western Blot檢測(cè)腎皮質(zhì)中Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白表達(dá)與C組對(duì)比,各造模組大鼠Notch1、Hey1、HES1和Jagged1蛋白的表達(dá)量均明顯增多(P0.01);與M組對(duì)比,Q組和I組大鼠Notch1、Hey1、HES1和Jagged1蛋白的表達(dá)量均明顯減少(P0.01);與I組對(duì)比,Q組Hey1和HES1兩種蛋白表達(dá)量明顯減少(P0.01)4化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠腎組織Hh通路表達(dá)的干預(yù)作用4.1免疫組化檢測(cè)各組大鼠腎組織GLI1、SHH、FSP1、LN蛋白結(jié)果GLI1、SHH、FSP1和LN蛋白的陽(yáng)性信號(hào)均定位于腎小管上皮細(xì)胞的胞漿,呈黃色或棕黃色顆粒狀。C組大鼠GLI1、SHH、FSP1、LN蛋白表達(dá)微弱,M組大鼠表達(dá)明顯增多,Q組和I組表達(dá)量較M組有所減少。4.2 Real-time PCR檢測(cè)腎組織GLI1、SHH、FSP1 m RNA表達(dá)與C組比較,各造模組大鼠GLI1、SHH、FSP1 m RNA表達(dá)均明顯增多(P0.01);在SHH m RNA表達(dá)方面,與M組比較,Q組和I組表達(dá)量均降低(P0.05),Q組和I組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。在GLI1和FSP1 m RNA表達(dá)方面,與M組比較,Q組和I組表達(dá)量均降低(P0.01);與Q組比較,I組表達(dá)量增加(P0.05或P0.01)。4.3 Western Blot檢測(cè)各組大鼠腎組織GLI1、SHH、FSP1蛋白結(jié)果與C組對(duì)比,各造模組大鼠GLI1、SHH、FSP1蛋白的表達(dá)量均明顯增多(P0.01);與M組對(duì)比,Q組和I組大鼠GLI1、SHH、FSP1蛋白的表達(dá)量均明顯減少(P0.01);與I組對(duì)比Q組GLI1、SHH、FSP1蛋白表達(dá)量明顯降低(P0.01)。結(jié)論:1.模型大鼠血糖升高后逐漸出現(xiàn)蛋白尿及DKD腎臟病理改變,提示DKD模型復(fù)制成功。且模型大鼠存在糖脂代謝紊亂,血液處于高凝狀態(tài),出現(xiàn)典型的血瘀癥狀,符合中醫(yī)瘀血阻絡(luò)證改變。2.化瘀通絡(luò)中藥能明顯改善DKD大鼠瘀血阻絡(luò)狀態(tài),降低大鼠尿蛋白,減輕腎臟病理?yè)p傷,對(duì)大鼠腎臟有明顯的保護(hù)作用。3.化瘀通絡(luò)中藥能夠抑制Notch通路Notch1、Jagged1、HES1和Hey1蛋白的高表達(dá),這可能是其減少尿蛋白排泄,減輕腎臟損傷的作用機(jī)制之一。4.化瘀通絡(luò)中藥能明顯抑制Hh通路的部分活化,從而減少FSP1和LN的表達(dá),這可能是其減輕腎小管損傷和腎間質(zhì)纖維化的重要途徑之一。
【圖文】：

-1 化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)血糖的[mmol/L, (x )]1-1 Effects of Huayu Tongluo herbs on random blood glucose (Rith diabetic kidney disease at different time points [mmol/L, (xcontrol; M, model; Q, Huayu Tongluo herbs; I, irbesartan)

化瘀通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎臟病大鼠不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)[mmol/L, (x )]1 Effects of Huayu Tongluo herbs on random blood glth diabetic kidney disease at different time points [mmcontrol; M, model; Q, Huayu Tongluo herbs; I, irbes
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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2 吳鑫;曠惠桃;周月紅;;曠惠桃治療糖尿病腎病經(jīng)驗(yàn)[J];湖南中醫(yī)雜志;2018年02期

3 蔡鷹;紀(jì)永章;絡(luò)文香;鄒建波;徐莉萍;王愛(ài)萍;;龍須草袋煎劑治療糖尿病腎病的臨床觀察[J];中國(guó)中醫(yī)藥科技;2018年01期

4 侯光明;;天芪降糖膠囊對(duì)早期糖尿病腎病及血脂代謝的影響[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2017年24期

5 陳曉明;魯曉龍;;益氣化瘀法聯(lián)合纈沙坦治療糖尿病腎病3期417例[J];環(huán)球中醫(yī)藥;2018年01期

6 謝沂均;張倩;薛耀明;;microRNA在糖尿病腎病小管間質(zhì)纖維化中的作用[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2017年05期

7 張文;鄭衛(wèi)莉;王東;;金水寶膠囊輔助治療對(duì)糖尿病腎病患者血清炎性因子、氧化應(yīng)激及腎功能的影響[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2017年19期

8 黃穎睿;楊大來(lái);汪小燕;胡娜;;不同糖代謝狀態(tài)下血清同型半胱氨酸水平與微量清蛋白尿的關(guān)系研究[J];中國(guó)全科醫(yī)學(xué);2017年S2期

9 莫翠瑤;劉云峰;;2型糖尿病胰島素抵抗與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2017年12期

10 張琳;;從“毒損腎絡(luò)”學(xué)說(shuō)探討慢性腎臟病診療的研究進(jìn)展[J];云南中醫(yī)中藥雜志;2017年02期

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1 鄧茜;NF-κB和Fcγ R在糖尿病腎病中的作用及黃芩素干預(yù)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

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