發(fā)布時間：2020-05-14 08:51

【摘要】：冬蟲夏草(Ophiocordyceps sinensis(Berk.)Sacc)是冬蟲夏草菌寄生在鱗翅目蝙蝠蛾科幼蟲或幼蟲尸體形成的干燥復合體,主要分布于青藏高原地區(qū),海拔高度2800米以上的高寒草甸和灌木地帶為冬蟲夏草的集中分布區(qū)域,具有調節(jié)免疫、降血脂、抗腫瘤、抗菌、抗疲勞等多種效用。目前市場上冬蟲夏草混淆品較多,且多為蟲草屬近緣種,其性狀與化學成分(腺苷、核苷等)與正品冬蟲夏草相似度高,現(xiàn)有中國藥典方法難以進行有效的鑒別,嚴重影響了臨床用藥的安全。有必要篩選冬蟲夏草中的特異性成分作為質量標志物,制定更科學、合理的冬蟲夏草的質量標準。本文通過制備色譜的方法分離提取出了冬蟲夏草中的特異性成分T2和T5。通過方法學考察,T2、T5的制備方法簡便、易行,能夠有效的純化、富集T2、T5�？疾炝薚2、T5的穩(wěn)定性,T2容易受到溫度和空氣的影響發(fā)生部分降解,在90℃的時候,降解產物為T4,70和50℃的時候降解產物為T3、T4,低溫干燥時不發(fā)生降解;與空氣接觸會促進T2的降解反應。T5比較穩(wěn)定,不會發(fā)生降解反應。確定了T2和T5的最佳干燥方法為冷凍干燥。運用UPLC-Q-TOF/MS的方法對T2、T5的化學結構進行了初步的研究,結果顯示T2、T5很有可能是一種小分子的多肽。使用LC-MS/MS測序并驗證,結果表明T2、T5就是小分子的多肽。具體方法如下:在正離子模式下,挑選一級質譜中強度排名前二十的碎片做二級質譜,所得的碎片信息使用MASCOT軟件檢索并與NCBI數(shù)據(jù)庫進行比對,得到所有來源于冬蟲夏草及其同屬的蛋白、肽段序列的陽性結果。測序結果中排名最高的四個肽段序列,其中T2得分最高的兩個肽段SVTDPFHPGGPGLIR、IILLILK來源于冬蟲夏草,T5中ETGNLLR肽段來源于冬蟲夏草,LLLALVK來源于冬蟲夏草同屬Ophiocordyceps unilateralis。課題組下一步的工作是從測序結果中篩選出得分最高的幾個肽段SVTDPFHPGGPGLIR、IILLILK、ETGNLLR、LLLALVK,用色譜和質譜進行比對和驗證,確定T2和T5的結構,最終建立基于T5的冬蟲夏草質量控制的新方法,并對T2、T5的活性進行研究,以期對冬蟲夏草的質量控制和功效說明作出貢獻。
【圖文】：

圖 1-1 冬蟲夏草 T2 特異性圖譜Fig1-1 The specificity of the T2 spectrum（注：S1 為蛹蟲草，S2 為涼山蟲草，，S3 為古尼蟲草，S4 為冬蟲夏草）材料與試劑1 實驗材料

圖1-3不同流動相的考察Fig 1-3 Different mobile phase(a. 乙腈-水溶液 b. 乙腈-0.1%甲酸水溶液 c. 甲醇-水)) 檢測波長的考察
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王妍;張國民;哈偉;;穿山甲應用及炮制研究進展[J];中國現(xiàn)代中藥;2015年03期

2 陳天羽;楊學連;陸昕怡;李月;馬維維;金夢;邵瑩;吳啟南;;我國藥用動物品種沿革與發(fā)展[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;2015年03期

3 程元柳;邱乙;彭成;萬德光;沈才洪;侯飛俠;國錦琳;;冬蟲夏草資源管理法規(guī)探討[J];時珍國醫(yī)國藥;2015年02期

4 郭曉慶;孫佳明;張輝;;水蛭的化學成分與藥理作用[J];吉林中醫(yī)藥;2015年01期

5 金曉東;張杰;李佑;顧正兵;;高效液相制備色譜制備土貝母中土貝母苷甲、乙、丙對照品的研究[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2014年12期

6 范學海;朱頤申;陳蘭婷;李文惠;韋萍;;液質聯(lián)用在多肽及蛋白質定性方面的研究進展[J];生物技術通報;2014年06期

7 熊耀坤;梁爽;洪燕龍;楊秀娟;沈嵐;杜焰;馮怡;;應用反相高效制備液相同時分離川芎中阿魏酸、洋川芎內酯I和H[J];中國中藥雜志;2013年12期

8 李曉飛;晏容;劉云;侯曉暉;婁方明;;不同產地與品種斑蝥中化學成分的GC-MS分析[J];湖北農業(yè)科學;2012年20期

9 關世俠;袁中文;周郁斌;張怡;葉小玲;胡波;;不同品種水蛭抗凝抗血栓作用的比較[J];中國醫(yī)院藥學雜志;2012年14期

10 周利兵;姜紫勤;;5種鹿茸中氨基酸和生物活性的研究[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2011年15期

相關博士學位論文 前1條

1 程顯隆;膠類藥材質量控制關鍵技術研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2014年

相關碩士學位論文 前1條

1 程元柳;基于核苷類指標性成分的冬蟲夏草質量控制研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2015年

本文編號：2663108