【摘要】：本研究以紅細(xì)胞膜為材料,制備了一種安全性高、生物相容性好、能有效包被丹參酮IIA磺酸鈉的納米載藥系統(tǒng),并對其生物學(xué)特性進(jìn)行了考察。主要研究內(nèi)容和方法如下:1、建立STS-Nano-RBC HPLC分析方法。2、在10%×PBS(pH7.4)的低滲條件下使紅細(xì)胞(RBC)內(nèi)容物流失,再通過超聲法使紅細(xì)胞膜裂解為小囊泡,此時(shí)加入丹參酮IIA磺酸鈉(STS)溶液,最后恢復(fù)等滲條件并通過聚碳酸酯膜擠出法制得包被STS的納米紅細(xì)胞微粒(STS-Nano-RBC)。以包封率為指標(biāo)對制備溫度、低滲條件、藥物濃度、藥物與紅細(xì)胞膜的體積比等進(jìn)行優(yōu)化。采用透射電鏡、動態(tài)光散射儀、高效液相色譜儀及凝膠電泳儀等對納米紅細(xì)胞膜載藥體系的形態(tài)、粒徑、電位、包封率及其所包含蛋白種類等進(jìn)行表征。對STS-Nano-RBC的穩(wěn)定性和安全性進(jìn)行考察。3、通過透析法考察STS-Nano-RBC的體外釋放情況。采用尾靜脈注射法將STS-Nano-RBC注射入大鼠體內(nèi),考察其藥動學(xué)行為及組織分布。4、采用熒光顯微鏡法和高效液相色譜法考察EA.hy926細(xì)胞對STS-Nano-RBC的攝取情況。通過選擇不同的通道抑制劑和孵育條件對STS-Nano-RBC滲透入EA.hy926細(xì)胞的途徑進(jìn)行了初步考察。5、采用MTT法考察STS-Nano-RBC的細(xì)胞活性。構(gòu)建細(xì)胞水平氧化應(yīng)激模型,對STS-Nano-RBC的對氧化應(yīng)激受損細(xì)胞的保護(hù)情況進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:1、采用高效液相法建立STS-Nano-RBC體外分析方法,該方法靈敏性準(zhǔn)確、回收率高。2、載藥溫度為4℃,低滲溶液為10%×PBS,STS為1.0 mg/ml,STS和紅細(xì)胞膜的體積比為2:1條件下,STS-Nano-RBC具有最佳包封率。STS-Nano-RBC為粒徑均一的球形顆粒,粒徑為156±5.8 nm,電位-2.34±0.67mv,包封率為33.15±2.61%,所含蛋白種類與紅細(xì)胞膜相比無明顯減少。STS-Nano-RBC具有良好的穩(wěn)定性和安全性。3、體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,STS注射液在6 h釋放97%的藥物,STS-Nano-RBC在6 h的釋放量為44%,且在體外能緩慢釋放至36 h。大鼠體內(nèi)藥動學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,STS-Nano-RBC與相同劑量STS注射液在大鼠體內(nèi)的半衰期(t1/2)分別為6.92 h和2.59 h,平均滯留時(shí)間分別為8.14 h和2.23 h,STS注射液組在給藥后6 h達(dá)不到檢測限,而STS-Nano-RBC在給藥36 h后仍可監(jiān)測到。4、熒光顯微鏡觀察結(jié)果表明,將STS-Nano-RBC與EA.hy926細(xì)胞孵育6 h,STS-Nano-RBC可有效滲透入細(xì)胞;采用HPLC法對滲透入細(xì)胞的STS-Nano-RBC進(jìn)行定量檢測,結(jié)果表明,STS注射液組在孵育2 h時(shí),藥物滲透量達(dá)20.4%,24 h時(shí)滲透量為26.7%,STS-Nano-RBC在孵育2 h時(shí),藥物滲透量僅5.4%,24 h時(shí)滲透量為33.2%,表明與注射液組相比,STS-Nano-RBC可更有效的將藥物轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)。對STS-Nano-RBC轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入EA.hy926細(xì)胞的過程進(jìn)行初步考察,結(jié)果表明過程不僅受溫度、ATP、環(huán)境pH和滲透壓的影響,同時(shí)受網(wǎng)格蛋白和小窩蛋白調(diào)控。5、細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,Nano-RBC對EA.hy926細(xì)胞基本無毒,STS濃度低于100μg/ml時(shí),細(xì)胞存活率高于75%,因此本實(shí)驗(yàn)選擇10-150μg/ml作為考察兩組制劑對氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞保護(hù)作用的濃度范圍。采用750μmol/l的H2O2損傷EA.hy926細(xì)胞12 h,構(gòu)建氧化應(yīng)激損傷細(xì)胞模型,再以含不同濃度藥物的STS-Nano-RBC和STS注射液干預(yù),結(jié)果表明,在80-150μg/ml范圍內(nèi)STS-Nano-RBC與STS注射液組相比顯示出更優(yōu)越的氧化應(yīng)激保護(hù)作用。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,可以得出結(jié)論:STS-Nano-RBC制備過程簡單、穩(wěn)定性好、安全性高、可延長STS在大鼠體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間,增強(qiáng)STS在細(xì)胞水平逆轉(zhuǎn)氧化應(yīng)激損傷效果,納米紅細(xì)胞膜載體有望發(fā)展為有臨床應(yīng)用前景的納米給藥體系。
【圖文】：

磺酸鈉A（TIIA）是一種提取自中草藥丹參（salvia miltiorrhiza于具有擴(kuò)張動脈和增加血流的作用，現(xiàn)已被廣泛用于治療些年的研究表明其不僅在抗炎和抗氧化應(yīng)激方面有顯著傷血管的作用[27]。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮 IIA 可通過管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)來減少心肌壞死面積，。然而，較差的水溶性限制了丹參酮 IIA 的臨床應(yīng)用[31]酸鈉（STS），作為丹參酮 IIA 的磺酸化產(chǎn)物，極大的提高在體內(nèi)清除速率快，按照 50mg/kg 的劑量尾靜脈注射 ST濃度低于 20 ng/m[32-33]。因此，尋求一種合適的藥物載A 磺酸鈉的體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，進(jìn)而改善其藥效是目前臨床需

S-Nano-RBC 的制備：取上述制備的 STS-RBC 混懸液 1 ml，采用濾其依次通過 800 nm、400 nm、200 nm 孔徑的聚碳酸酯膜 21 次，no-RBC 懸浮液。將 STS-Nano-RBC 懸浮液置于 5 ml 超濾離心管內(nèi)，5 30 min，棄去游離 STS, 將超濾離心后得到的 STS-Nano-RBC 重新 溶液中，4℃避光儲存于冰箱中備用。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R283.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 孫雅楠;馬琳;張彪;蘇靖;邱明豐;;基于紅細(xì)胞的載藥系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年04期

2 石遠(yuǎn);李秀英;王天怡;常笛;鄭力;王思玲;;丹參酮ⅡA與丹參酮ⅡA磺酸鈉體內(nèi)藥動學(xué)與藥效學(xué)[J];中國藥劑學(xué)雜志(網(wǎng)絡(luò)版);2009年03期

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本文編號：2662966