【摘要】：越來越多的研究表明,植物凝集素對生殖過程中包括受精、胚胎著床、胚胎發(fā)育及妊娠過程等每一個環(huán)節(jié)都會產生影響。本實驗室從事植物凝集素相關研究已經超過十年。研究表明,植物凝集素能安全有效阻止受精、抑制胚胎著床及終止不同時期的妊娠。目的:本研究采用云南紅蕓豆植物凝集素(Red Kidney Bean Lectin,RKBL,or Phytohemmaglutinin,PHA),研究長期使用對小鼠陰道結構和組織形態(tài)的影響作用;觀察RKBL凝膠劑對精子凝集的作用;探究反復使用RKBL終止妊娠對雌鼠妊娠及其后代發(fā)育的影響;以及觀察給予RKBL后子宮內紅蕓豆植物凝集素受體或結合位點數量的變化。期望能為研究新型的既能避孕又能預防包括HIV(Human Immunodeficiency Virus,人類免疫缺陷病毒)在內的性傳播疾病的殺微生物劑、研究新型引產藥物和為生殖醫(yī)學應用提供理論依據和實驗基礎。方法:1、將不同濃度的RKBL通過陰道口注入小鼠陰道。連續(xù)給藥四個月后,斷頸處死小鼠,取下其陰道及周圍組織,制作石蠟切片并經蘇木精染色,顯微鏡下觀察陰道上皮及下層組織的形態(tài)學變化。2、采用Sander-Cramer方法,即在0.5ml含不同濃度RKBL的凝膠劑中,加入0.1ml精液,觀察20s內致死精子的最低蕓豆凝集素劑量,并觀察RKBL對精子凝集的有效濃度;在“V”型管底部加入等體積含不同濃度RKBL的凝膠劑,觀察殺精和凝集精子的效果。3、以RKBL重復處理孕鼠造成2次流產后,觀察對雌鼠第三次妊娠的影響并連續(xù)觀察新生小鼠生長至21d(即斷奶期)的相關生理及神經行為學指標。4、用FITC(Fluorescein Isothiocyanate,異硫氰酸熒光素)標記的RKBL凝集素作為探針,研究子宮給藥(RKBL)后對RKBL受體或結合位點的數量及分布的影響。結果:1、長期(4個月)陰道連續(xù)給予RKBL的實驗組小鼠陰道無炎癥、病變、過敏反應等不良現象,陰道粘膜上皮細胞形態(tài)完好無破損。2、當凝膠劑中RKBL濃度高于或等于1mg/ml時,會使精子瞬間失活致死,即Sander-Cramer方法20s內致死的最低劑量為1mg/ml;RKBL濃度高于0.01mg/ml時,可以不同程度地凝集精子;3、與對照組比較,使用RKBL重復流產不影響雌鼠再次妊娠,但是雌鼠的平均產仔數稍許降低,幼崽生長速度稍快于對照組,其他各項指標均無明顯差異。4、RKBL受體廣泛存在于小鼠子宮,其中在子宮黏膜(即內膜)部分熒光反應相對較弱,子宮肌層部分和子宮漿膜上熒光較強;給予RKBL處理后,受體分布情況發(fā)生變化,子宮黏膜、子宮肌層部分和子宮漿膜上中的熒光反應強度均有不同程度的增加,其中子宮壁肌肉中熒光強度增強尤為明顯。結論:1、紅蕓豆植物凝集素(RKBL)長期作用于陰道安全無不良反應。2、1mg/ml為體外殺精的最低RBKL濃度;各低濃度RBKL凝膠均能使精子產生不同程度的凝集;在“V”型管實驗中,各試驗濃度的RKBL凝膠劑均能阻止精子穿透。3、RKBL重復(2次)處理導致流產后,對雌鼠無明顯不良影響,對子代生長發(fā)育無明顯負面影響。4、RKBL受體廣泛存在于小鼠子宮,給予紅蕓豆植物凝集素刺激后,受體受體在子宮粘膜、子宮肌層和漿膜都在不同程度上增加。
【圖文】：

圖 2.1 小鼠不同濃度 PHA 陰道給藥蘇木精染色陰道切片（圖 2.1A：PBS 組 100×；圖 2.1B：為圖 A 的局部放大 400×；圖 2.1C：1mg/ml 濃度的 PHA 組100×；圖 2.1D：為圖 C 的局部放大 400×；圖 2.1E：2.5mg/ml 濃度的 PHA 組 100×；圖 1F：為圖 E 的局部放大 400×；圖 2.1G：5mg/ml 濃度的 PHA 組 100×；圖 2.1H：圖 G 的局部放大 400×）2.3 討論實驗結果證明，對小鼠進行長期陰道注入濃度為 2.5mg/只或以下濃度的紅蕓豆植物凝集素（RKBL），不會引起陰道上皮細胞的不良反應，用藥組與對照組沒有明顯差異，應用于陰道是安全的。目前市面上還沒有一種安全有效的的殺微生物劑產品。 現階段很多已經進人體臨床試驗的藥物一般都是凝膠劑型或生物黏附劑型的[41]。常見的殺精子劑為壬苯醇醚-9 或 N9，但壬苯醇醚-9 會引起陰道上皮細胞的破損，而陰道上皮的損傷，又將會增加包括 HIV-1 在內的病毒的感染風險。并且已有實驗證明苯醇醚-9

圖 3.1 含不同濃度 RKBL 的凝膠劑凝集精子圖片（圖 3.1A：含 5mg/ml RKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1B：含 2.5mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1C：含1mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1D：含0.5mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1E：含0.25mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1F：含0.1mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1G：含0.05mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1H：含0.025mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1I：含0.01mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1J：含0.005mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×；圖 3.1K：含 0.0025mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子100×，右下角小圖為其局部放大 400×；圖 3.1L：含不 0.001mg/mlRKBL 的凝膠劑凝集精子 100×，，右下角小圖為其局部放大 400×）3.2.2 “V 型管”穿透試驗結果
【學位授予單位】：云南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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相關碩士學位論文 前1條

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本文編號：2662961