【摘要】：濕疹(Eczema)是由多種內(nèi)外因素引起的皮膚炎癥,急性期皮損以丘皰疹為主,有滲出傾向,慢性期以苔蘚樣變?yōu)橹?易反復(fù)發(fā)作。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),中藥復(fù)方茯苓湯對小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎有顯著抑制作用[1],臨床上治療濕疹,療效較好且副作用小,優(yōu)于傳統(tǒng)抗組胺藥[2]。利用超高速液相色譜-二極管陣列檢測器-電噴霧-質(zhì)譜(UFLC-DAD-ESI-MS)技術(shù)對復(fù)方茯苓湯整方成分進(jìn)行了定性和定量分析,初步研究了其主要成分的體外藥物代謝及抗炎作用,證實芍藥苷(Paeoniflorin,PF)是復(fù)方茯苓湯的主要活性成分之一且具有較好的抗炎活性,相關(guān)研究也證實PF具有明確的抗變態(tài)反應(yīng)及抗炎作用[3,4]。T淋巴細(xì)胞(T lymphocyte)是淋巴細(xì)胞的主要組分,是機(jī)體免疫識別、應(yīng)答以及調(diào)控的主要細(xì)胞,在免疫系統(tǒng)中處于主導(dǎo)地位[5]。T淋巴細(xì)胞在濕疹發(fā)病中起著關(guān)鍵性作用,前期研究證實PF可抑制活化的T淋巴細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其凋亡,并抑制IFN-y水平,PF治療濕疹的抗炎機(jī)制需深入研究。NF-κB/MAPK信號通路作為經(jīng)典的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在誘導(dǎo)細(xì)胞促炎因子和抗炎因子的表達(dá)、聚集、激活和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等過程中發(fā)揮重要的作用。NF-κB是由RelA(P65)、Rel B、C-Rel、NF-κB2(P52)組成,其編碼的產(chǎn)物由同源和各種異源的NF-κB/Rel蛋白二聚體構(gòu)成,多為P50和P65,通過與其抑制蛋白IκB結(jié)合,參與下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,激活一系列激酶,從而調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)[6]。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是在真核細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的一類絲/蘇氨酸蛋白激酶,細(xì)胞外信號或刺激如炎性細(xì)胞因子、生長因子、細(xì)菌復(fù)合物等可以將MAPK信號通路激活,激活后可以將細(xì)胞外信號逐級放大傳至細(xì)胞核內(nèi),調(diào)控基因表達(dá)[7]。MAPKs家族包括:ERK(Extracellular signal-regulated kinase,ERK)、p38MAPK、ERK3、JNK(Jun N-terminal kinase,JNK)、BMK1/ERK5、ERK27、ERK8和NLK等8個亞家族。各個通路受不同的刺激因素作用后,激活轉(zhuǎn)錄因子,介導(dǎo)生物學(xué)效應(yīng)[8]。目的:研究PF對活化的人外周血T淋巴細(xì)胞NF-κB信號通路因子(NF-κB、IκB-α)、MAPK信號通路因子(JNK、ERK、p38)的影響,研究其抗炎機(jī)制。方法:對人外周血T淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離與體外培養(yǎng),CD3聯(lián)合CD28單抗活化T淋巴細(xì)胞,蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測不同濃度PF對活化的T淋巴細(xì)胞NF-κB p65、IκB-α 磷酸化、磷酸化 p38(p-p38)、磷酸化 ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化 JNK(p-JNK)表達(dá)的影響。結(jié)果:1、PF抑制活化的T淋巴細(xì)胞NF-κB p65表達(dá):在0-120min內(nèi),隨時間延長,活化的T淋巴細(xì)胞中NF-κB p65表達(dá)增加。CD3+CD28組NF-κB p65含量顯著高于空白對照組(P0.01),PF呈濃度依賴性抑制p65表達(dá),其中1OμM PF組與CD3+CD28組比較能顯著抑制NF-κBp65表達(dá)(P0.05)。2、PF抑制活化的T淋巴細(xì)胞NF-κB信號通路IκB-α磷酸化:在0-120min內(nèi),IκB-α的含量隨時間的延長而減少,在60min時幾乎完全降解。活化的T淋巴細(xì)胞中P-IκB-α含量高于空白對照組(P0.05),1μM PF、5μM PF與CD3+CD28組比較,能抑制T淋巴細(xì)胞P-IκB-α的表達(dá)(P0.01),1OμMPF組與CD3+CD28組比較,能顯著抑制T淋巴細(xì)胞P-IκB-α的表達(dá)(P0.001)。3、PF對活化的T淋巴細(xì)胞MAPKs信號通路因子JNK、ERK磷酸化無影響:在0-120min內(nèi),JNK、ERK磷酸化在1Omin時表達(dá)最高。與CD3+CD28組比較,1μM PF、5μM PF、1OμM PF對MAPKs信號通路因子ERK、JNK的磷酸化表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。4、PF抑制活化的T淋巴細(xì)胞MAPKs信號通路因子p38磷酸化:在0-120min內(nèi),p38磷酸化在1Omin時表達(dá)最高。P-p38表達(dá)水平隨著PF濃度增加而減少,5μM PF組與CD3 + CD28組比較,能夠抑制T淋巴細(xì)胞P-p38的表達(dá)(P0.05),10μM PF組與CD3+CD28組比較,能顯著降低T淋巴細(xì)胞P-p38的表達(dá)(P0.01)。結(jié)論:1、PF呈濃度依賴性抑制活化的T淋巴細(xì)胞中NF-κB p65表達(dá)及IκB-α磷酸化,提示PF可能通過NF-κB信號通路抑制T淋巴細(xì)胞活化。2、PF呈濃度依賴性抑制活化的T淋巴細(xì)胞中p38磷酸化,PF對活化的T淋巴細(xì)胞中JNK、ERK磷酸化無影響。3、NF-κB信號通路和p38磷酸化參與PF介導(dǎo)的對人T淋巴細(xì)胞的免疫抑制,表明PF作為重要的抗炎藥物值得深入研究。
【圖文】：

０－１２０ｍｉｎ內(nèi)，ＣＤ３聯(lián)合ＣＤ２８單抗活化的ＮＦ－ｋＢＰ６５表達(dá)水平隨時間延長而增加。因逡逑此，，我們選擇ＣＤ３聯(lián)合ＣＤ２８單抗活化Ｔ淋巴細(xì)胞１２０ｍｉｎ來研究ＰＦ對ＮＦ－ｋＢ邋ｐ６５表達(dá)逡逑的影響（見圖２，表１）。逡逑邐ＣＤ３＋ＣＤ２８邐逡逑０邐１０邐３０邐６０邋１２０ｍｉｎ逡逑ＮＰ－ＫＢＰyj_~栧義希穡幔悖簦礤義希。海蒎澹義希板危擔(dān)板危保埃板危保擔(dān)板義希裕椋恚澹ǎ恚椋睿╁義賢跡插澹茫模常茫模玻富罨�；涇巴细胞ＮＦ－ｋＢ邋７w叮檔謀澩镥義媳恚卞澹茫模常茫模玻富罨模粵馨拖赴危疲椋悖攏穡叮檔謀澩镥義襄巫榱恚。赍危希恚椋鑠危歟希恚椋鑠危常埃恚椋鑠危叮埃恚椋鑠危保玻埃恚礤義希校叮擔(dān)穡幔悖簦椋睿掊宥戎靛澹埃玻

本文編號：2662036