【摘要】：Caco-2細胞是一種人源結(jié)腸腺癌細胞,同源性好,生命力強,經(jīng)過培養(yǎng),可形成連續(xù)的細胞單層,并在形態(tài)和功能上分化出與成熟小腸上皮細胞相近的狀態(tài)。因此,Caco-2細胞被廣泛用于體外腸道模型的構(gòu)建。作為附著依賴性細胞,單層培養(yǎng)模型是Caco-2細胞最常見的培養(yǎng)模型。在經(jīng)典的Transwell模型中,插入式半透濾膜上培養(yǎng)的Caco-2細胞單層是應(yīng)用最為廣泛的一種體外腸道模型。但是,這種模型中的細胞培養(yǎng)周期長達21天,并且存在著操作復(fù)雜、耗費較大、篩選通量不高等問題。為了構(gòu)建一種新型的Caco-2細胞模型,探究該模型在研究功能性成分吸收轉(zhuǎn)運方面的可行性,本課題基于納米纖維膜在組織工程中的應(yīng)用優(yōu)勢,擬用納米纖維膜作為Caco-2細胞的載體材料,構(gòu)建體外腸道模型,使Caco-2細胞充分表達出小腸上皮所具有的獨特生理功能,實現(xiàn)對營養(yǎng)物質(zhì)和藥物分子口服吸收行為的預(yù)測。基于此目的,本文首先從四種靜電紡納米纖維膜中篩選出了適合Caco-2細胞貼附生長的靜電紡聚乳酸納米纖維膜,作為Caco-2細胞培養(yǎng)的載體材料。Caco-2細胞形態(tài)學(xué)以及滲透實驗表明,基于靜電紡聚乳酸納米纖維膜的Caco-2細胞模型中,培養(yǎng)4天時,Caco-2細胞即可形成緊密的細胞單層;單層細胞的完整性結(jié)果表明,培養(yǎng)4天時,完整的細胞單層已形成;培養(yǎng)7天時,Caco-2細胞已經(jīng)分化成熟;堿性磷酸酶和P-糖蛋白的活性檢測結(jié)果表明,培養(yǎng)至第9天時細胞的堿性磷酸酶活性和轉(zhuǎn)運蛋白的活性已經(jīng)達到較高的水平,超過傳統(tǒng)Transwell插入式半透濾膜模型內(nèi)培養(yǎng)21天的Caco-2細胞�？梢�,此模型的培養(yǎng)周期相對于傳統(tǒng)培養(yǎng)模型大為縮短。隨后,基于靜電紡聚乳酸納米纖維膜的Caco-2細胞模型被用于預(yù)測槲皮素的吸收,結(jié)果表明,槲皮素的跨膜轉(zhuǎn)運呈pH依賴,需通過添加P-gp抑制劑來了解是否槲皮素是P-gp的底物,是否存在外排作用。同時,槲皮素在高濃度下的跨膜轉(zhuǎn)運機制以被動擴散為主�？偟膩碚f,基于靜電紡聚乳酸納米纖維膜構(gòu)建的Caco-2細胞模型能在4天內(nèi)形成完整致密的細胞融合單層,培養(yǎng)至7天,Caco-2細胞已分化成熟,即可用于吸收實驗。因此,基于靜電紡聚乳酸納米纖維膜的Caco-2細胞模型可快速構(gòu)建并該模擬腸道模型具備評價營養(yǎng)和藥物組分在小腸中吸收的能力。
【圖文】：

藥物組分吸收和代謝中起著關(guān)鍵作用［１２］。逡逑Vy的一焌：ｊ逡逑圖１－１小腸管壁構(gòu)造示意圖逡逑Ｆｉｇ邋１－１邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｓｍａｌｌ邋ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ邋ｗａｌｌ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ逡逑[鐓﹀義希歟樾桑海骸，

本文編號：2658424