發(fā)布時間：2020-05-10 07:22

【摘要】：目的:探討芍藥甘草湯對兔頸型頸椎病模型頸椎間盤和頸部肌組織形態(tài)學(xué)的改變情況、炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平的改變情況,以及頸椎間盤和頸部肌組織miR-146a/-155-NF-κB信號通路相關(guān)因子表達的影響,從而揭示芍藥甘草湯的作用機制。方法:30只6月齡的新西蘭大白兔用SPSS18.0軟件操作程序分為5組,高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組、正常組,每組各6只。除正常組外的其余4組動物均參照張欣等無創(chuàng)兔頸型頸椎病動物模型的建立方法進行改進造模,并于8周后對5組動物分別進行相應(yīng)干預(yù)。高劑量組、中劑量組、低劑量組分別給予高劑量、中劑量、低劑量芍藥甘草湯灌胃治療,每次每只兔子灌胃劑量80ml,每天早、晚各灌服1次;模型組和正常組不予干預(yù),正常飼養(yǎng)。5組兔子均連續(xù)干預(yù)4周,干預(yù)結(jié)束后第二天五組兔子均耳緣靜脈采血,離心取上清血清備用,采用ELISA檢測血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平。然后處死各組兔子取其頸后肌和椎間盤組織進行各項指標(biāo)的檢測:經(jīng)過4%多聚甲醛固定、脫鈣、石蠟包埋、切片,脫蠟入水后行HE染色,封片后行椎間盤和頸后肌組織形態(tài)學(xué)觀察和各組間比較;Western blotting法檢測椎間盤組織中信號通路關(guān)鍵節(jié)點MyD88、NF-κBP65的蛋白水平;RT-qPCR技術(shù)檢測各組椎間盤組織中TLR4、TRAF-6、miR-146a、miR-155 和頸后肌組織中 miR-146a、miR-155 的表達情況。結(jié)果:1.椎間盤和頸后肌組織大體肉眼觀察:與正常組相比,高劑量組、中劑量組、低劑量組和模型組均出現(xiàn)不同程度炎癥損傷表現(xiàn),且高劑量組、中劑量組、低劑量組炎癥損傷程度比模型組輕。說明芍藥甘草湯治療頸型頸椎病是有效的。2.在組織形態(tài)學(xué)上,椎間盤和頸后肌組織退變程度均由輕至重依次是正常組、高劑量組、中劑量組、低劑量組、模型組。說明芍藥甘草湯干預(yù)可以改善頸椎間盤和頸后肌組織炎癥損傷程度,且呈劑量依賴性。3.血清炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6表達水平比較:干預(yù)前,模型組、高、中、低劑量組與正常組相比,各組間對照均具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),而模型組、高、中、低劑量組之間進行比較均無差異性(P0.05),說明本次實驗造模成功;干預(yù)后,高、中、低劑量組的表達水平均明顯下降,且模型組與正常組相比有顯著差異性(P0.01),模型組、高、中、低劑量組之間相比較,各組間對照均具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),說明芍藥甘草湯可以降低血清炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表達水平,且呈劑量依賴性。4.椎間盤和頸后肌組織中MyD88、NF-κBP65蛋白表達水平比較:干預(yù)后,低、中、高劑量組的表達均降低,且模型組與正常組相比具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),模型組、低、中、高劑量組之間相比,各組間對照也均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。說明芍藥甘草湯可以降低椎間盤和頸后肌組織中MyD88、NF-κB P65的蛋白表達,且呈劑量依賴性。5.椎間盤和頸后肌組織中miR-146a、miR-155、TLR4、TRAF-6表達水平的比較:干預(yù)后,低、中、高劑量組miR-146a的表達水平均升高,miR-155、TLR4、TRAF-6的表達水平均降低,且模型組與正常組相比具有顯著差異性(P0.01),模型組、低、中、高劑量組各指標(biāo)之間進行比較,各組間對照也均具有差異性(P0.05)。說明芍藥甘草湯可以升高椎間盤和頸后肌組織中miR-146a的表達,降低miR-155、TLR4、TRAF-6的表達,且均呈劑量依賴性。結(jié)論:1.高、中、低三種不同劑量的芍藥甘草湯均對緩解兔頸型頸椎病的炎癥損傷有效,且其效果呈劑量依賴性:高劑量組中劑量組低劑量組模型組。2.芍藥甘草湯對兔頸型頸椎病的治療作用機制之一可能是通過改變頸型頸椎病兔頸椎間盤和頸后肌組織中miR-146a、miR-155的表達而抑制NF-κB信號通路釋放TNF-α、IL-1β、IL-6等炎癥因子,從而改善頸部炎癥損傷,治療頸型頸椎病。
【圖文】：

指下猶如撥琴弦感；至造模結(jié)束時，兔頸后肌肉變性，顯現(xiàn)出明顯條索狀肌痙逡逑攣，甚至部分兔耳后頸部出現(xiàn)皮膚糜爛，有少量液體滲出等頸部癥狀，且從造模過程中逡逑至造模結(jié)束兔子體重逐漸下降，精神狀態(tài)愈來愈差。見圖２－１。干預(yù)過程中，高、中、逡逑低劑量組兔噴嚏、鼻涕癥狀漸消失，頸后肌痙攣和僵硬狀況出現(xiàn)不同程度的緩解，撥動逡逑時指下組織阻力逐漸減小，部分兔耳后頸部的囊性突起逐漸減輕，而模型組均無明顯變逡逑化；至干預(yù)結(jié)束時，各組兔頸后肌硬度減輕情況：高劑量組＞中劑量組＞低劑量組＞模逡逑型組，頸部突起減輕情況：高劑量組＞中劑量組＞低劑量組＞模型組。造模后整個干預(yù)逡逑過程順利，沒有兔子死亡，且無異常情況出現(xiàn)。逡逑ｉ邋ｉ逡逑圖２－１模型兔造模過程中一般情況表現(xiàn)逡逑１８逡逑

圖１－１干預(yù)前（造模后）各組血清炎癥因子ＴＮＦ－ｏｕ邋ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６表達逡逑２邋—般情況逡逑本實驗以６月齡新西蘭大白兔為實驗對象，除正常組外的其余４組大白兔在造模過程逡逑中，，均出現(xiàn)不同程度流鼻涕、打噴嚏、頸后肌肉逐漸變得痙攣、僵硬，撥動部分兔頸后逡逑肌肉時，指下猶如撥琴弦感；至造模結(jié)束時，兔頸后肌肉變性，顯現(xiàn)出明顯條索狀肌痙逡逑攣，甚至部分兔耳后頸部出現(xiàn)皮膚糜爛，有少量液體滲出等頸部癥狀，且從造模過程中逡逑至造模結(jié)束兔子體重逐漸下降，精神狀態(tài)愈來愈差。見圖２－１。干預(yù)過程中，高、中、逡逑低劑量組兔噴嚏、鼻涕癥狀漸消失，頸后肌痙攣和僵硬狀況出現(xiàn)不同程度的緩解，撥動逡逑時指下組織阻力逐漸減小，部分兔耳后頸部的囊性突起逐漸減輕，而模型組均無明顯變逡逑化；至干預(yù)結(jié)束時，各組兔頸后肌硬度減輕情況：高劑量組＞中劑量組＞低劑量組＞模逡逑型組，頸部突起減輕情況：高劑量組＞中劑量組＞低劑量組＞模型組。造模后整個干預(yù)逡逑
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2656954