【摘要】：目的:建立SD大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(Adjuvant-induced arthritis,AA)模型,研究龍膽苦苷(Gentiopicroside GPS)高中低劑量對于AA大鼠的足厚度、足周長、足體積、ALT、AST水平、以及滑膜組織IL-6、TNF-α水平的影響。并通過病理組織學(xué)檢查以及X-光實(shí)驗(yàn)研究GPS對于AA大鼠關(guān)節(jié)炎的保護(hù)作用。方法:SD大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1ml弗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant,FCA)對大鼠進(jìn)行關(guān)節(jié)炎造模。除空白組外,造模成功的SD大鼠隨機(jī)分為5組,分別為:弗氏完全佐劑誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型組、GPS高劑量組(120mg/kg)、GPS中劑量組(60mg/kg)、GPS低劑量組(30mg/kg)、陽性對照甲氨蝶呤(MTX)組(0.2mg/kg),于致炎成功后d1-d7內(nèi)按試驗(yàn)設(shè)計(jì)各組給藥劑量分別給大鼠灌胃給藥。每天用游標(biāo)卡尺、足趾容積測量儀對大鼠原發(fā)側(cè)足厚度、足周長、足體積進(jìn)行測量,評(píng)估大鼠爪腫脹程度;光學(xué)顯微鏡下觀察踝關(guān)節(jié)組織病理形態(tài)學(xué)的變化,酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測IL-6、TNF-α的水平,以及肝功能ALT、AST水平。結(jié)果:各給藥組對AA大鼠的治療作用造模后3天開始,AA大鼠注射側(cè)后爪出現(xiàn)明顯的腫脹,紅斑,行動(dòng)不便等癥狀,關(guān)節(jié)滑膜明顯增生,分布雜亂,并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤和血管翳形成。連續(xù)灌胃給藥7天后,GPS高、中、低劑量組(120mg/kg,60mg/kg,30mg/kg)、MTX組(0.2mg/kg)給藥均能不同程度的改善AA大鼠足腫脹程度,減輕滑膜組織炎癥,且GPS低、中劑量組(30mg/kg,60mg/kg)的抗炎效果較高劑量組(120mg/kg)更為顯著(P0.01)。各給藥組對AA大鼠骨破壞的抑制作用與正常組相比,AA組大鼠關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹,骨破壞,趾間縫隙比較大。與AA組相比,GPS(30、60、120mg/kg)組減少了關(guān)節(jié)腫脹,骨破壞,趾間縫隙比較小。由此可以看出龍膽苦苷對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有一定的抗炎作用。各給藥組對AA組大鼠血清中ALT、AST的下調(diào)本實(shí)驗(yàn)通過測大鼠血清中ALT、AST變化,發(fā)現(xiàn)與正常組相比,AA組AST、ALT明顯升高。表明佐劑對大鼠肝臟造成一定損傷。GPS(30、60、120mg/kg)與AA組對比發(fā)現(xiàn),AST、ALT含量都有一定下降,說明龍膽苦苷具有抗炎作用。并且與正常組相比,高劑量組AST水平下調(diào),和正常組相比(P0.05,P0.01)說明高劑量組出現(xiàn)保肝作用。各給藥組對AA組大鼠滑膜組織中TNF-α和IL-6下調(diào)本實(shí)驗(yàn)分析了大鼠血漿中TNF-α和IL-6水平的變化,發(fā)現(xiàn)各組大鼠滑膜的TNF-α、IL-6的水平,和正常組比較,AA組TNF-α和IL-6水平均出現(xiàn)上調(diào)(P0.01)。但GPS(30、60、120mg/kg)組與AA組相比,TNF-α和IL-6水平均出現(xiàn)下調(diào)(P0.01、P0.05)。說明龍膽苦苷對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎具有良好的抗炎作用。結(jié)論:GPS低、中劑量(GPS:30mg/kg,60mg/kg)對AA大鼠炎癥癥狀的緩解作用高于GPS高劑量(120mg/kg),說明了GPS對AA大鼠抗炎治療作用與劑量有關(guān),中劑量對抗炎作用更好,從AST、ALT和TNF-α、IL-6的分析中可以看出GPS(30、60mg/kg)對大鼠炎癥的有一定抑制作用,同時(shí)GPS(120mg/kg)高劑量組還出現(xiàn)保肝作用。
【圖文】：

5.1 各給藥組對 AA 大鼠的治療作用5.1.1 GPS 對 AA 大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響大鼠注射 FCA 3 天后，注射側(cè)的后爪出現(xiàn)輕微的紅腫，病情隨著時(shí)間逐漸加重，約過 7 天后，其癥狀為踝關(guān)節(jié)紅腫，且已至整個(gè)腳掌及趾關(guān)節(jié)均出現(xiàn)紅腫。造模后的 10 天，出現(xiàn)明顯的腫脹，說明模型建造成功。各組大鼠的致炎給藥后足腫脹程度的結(jié)果顯示如 Fig.1，表明未給藥組腳掌及踝關(guān)節(jié)仍表現(xiàn)為紅腫，給藥組的低、中、高劑量及 MTX 組依次對 AA 大鼠炎癥有不同程度的改善作用。Fig.2.3.4 為各組大鼠給藥后爪腫脹度，關(guān)節(jié)周長，足厚度的影響,圖中發(fā)現(xiàn)使用GPS 和 MTX 治療均表現(xiàn)出 FCA 誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)周長和足厚度明顯改善，且腫脹程度也逐漸減輕（P<0.01），從模型組開始顯示出顯著性，第 2 天炎癥達(dá)到峰值，第 7 天開始接近其正常的對照值，且 GPS 中劑量和 MTX 與 GPS 低、高劑量相比，，抗炎作用更強(qiáng)（P<0.05 或 P<0.01）。

圖 2 GPS 對 AA 大鼠足體積的影響(n=6)*代表和空白組相比 P＜0.05 ，**代表和空白組相比 P＜0.01；#代表和模型組相比5 ， ##代表和模型組相比 P＜0.01。圖 3 GPS 對 AA 大鼠關(guān)節(jié)周長的影響(n=6)*代表和空白組相比 P＜0.05，**代表和空白組相比 P＜0.01；#代表和模型組相比
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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