【摘要】：目的及意義通竅散瘀方為治療缺血性腦中風的臨床經(jīng)驗方,由葛根、白芍、薄荷組成,具有通竅醒腦,活血散瘀之功效,臨床療效確切,其主要藥效成分為葛根素、芍藥苷及薄荷腦。課題組前期成功制備了通竅散瘀組分方鼻用微乳制劑。本課題擬基于前期研究基礎(chǔ),以正常大鼠及嗅阻斷大鼠為實驗動物,對通竅散瘀組分溶液和通竅散瘀組分微乳經(jīng)鼻遞藥的藥動學行為進行對比,深入研究制劑處方配伍因素及劑型因素對藥物腦靶向性及生物利用度的影響,進一步為“鼻通腦絡(luò)”中醫(yī)理論提供實驗佐證,為中藥復方納米經(jīng)鼻遞藥系統(tǒng)的研發(fā)提供實驗依據(jù)。研究方法本文利用微透析技術(shù)結(jié)合UPLC-MS/MS對通竅散疲組分方制劑經(jīng)鼻遞藥藥代動力學進行研究,具體研究內(nèi)容如下:1.微透析探針回收率影響因素考察本實驗建立葛根素與芍藥苷的HPLC含量測定的方法,并對其進行方法學考察。采用建立的HPLC含量測定方法考察探針對測定藥物(葛根素和芍藥苷)的吸附性、探針回收率的穩(wěn)定性以及灌流速度和藥物濃度對探針回收率的影響。2.微透析探針體內(nèi)回收率考察本實驗建立了體內(nèi)測定葛根素與芍藥苷的UPLC-MS/MS的方法,并對其進行方法學考察。在體內(nèi)植入腦探針和血液探針,腦探針的定位參照大鼠腦立體定位圖譜,確定紋狀體的位置,以前囟為基點,AP:+0.5mm,ML:±3mm,DV:-4mm處定位,血液探針沿向心室方向植入頸靜脈,以生理鹽水為灌流液,采用零凈通量法測定探針在血液及腦部紋狀體部位的在體回收率。3.通竅散瘀組分制劑體內(nèi)藥動學研究①通竅散瘀全方制劑正常大鼠體內(nèi)藥動學研究:以雄性SD大鼠為實驗動物,設(shè)置通竅散瘀溶液組、通竅散瘀微乳組;將血液探針埋植于頸靜脈,腦探針埋植于大腦紋狀體部位;分別以相同的劑量(以葛根素7mg/kg計)鼻腔給藥,微透析取樣,UPLC-MS/MS檢測透析液中藥物濃度,以探針回收率對藥物濃度進行校正,采用DAS 3.0軟件進行非房室模型擬合得到藥動學參數(shù)。②通竅散疲全方制劑嗅阻斷大鼠體內(nèi)藥動學研究:對雄性SD大鼠嗅球部位進行破壞,制備嗅阻斷大鼠模型。以嗅阻斷大鼠為實驗動物,設(shè)置通竅散瘀溶液組、通竅散瘀微乳組,進行藥動學考察,研究方法同上。③通竅散瘀單組分制劑正常大鼠體內(nèi)藥動學研究:以雄性SD大鼠為實驗動物,設(shè)置通竅散瘀單組分溶液組、通竅散瘀單組分微乳組,進行藥動學考察,研究方法同上。實驗結(jié)果1.微透析探針回收率影響因素考察本實驗建立了葛根素與芍藥苷的HPLC檢測方法,方法學考察顯示專屬性、線性、精密度和穩(wěn)定性均符合要求,可用于體外葛根素與芍藥苷的含量測定。本實驗通過考察探針對藥物的吸附作用及探針回收率的穩(wěn)定性,發(fā)現(xiàn)腦探針和血液探針及微透析系統(tǒng)對葛根素及芍藥苷無吸附作用,且兩種探針在5 h即整個體內(nèi)實驗過程中回收率基本保持穩(wěn)定,說明選擇的這兩種探針可用于進一步的體內(nèi)微透析實驗。同時通過考察藥物濃度及灌流速度對探針回收率的影響推斷藥物濃度對探針的回收率不產(chǎn)生影響。并通過考察灌流速度對探針回收率的影響,結(jié)合實際將后續(xù)在體實驗中將流速設(shè)置為1.5μL/min。2.微透析探針體內(nèi)回收率考察本實驗以大豆苷元為內(nèi)標物建立了葛根素與芍藥苷的UPLC-MS/MS體內(nèi)含測方法,方法學研究顯示專屬性、線性、精密度與準確度、穩(wěn)定性均符合體內(nèi)分析要求,可用于體內(nèi)葛根素與芍藥苷的含量測定。采用零凈通量法測定探針在血液及紋狀體部位的在體回收率,實驗結(jié)果顯示,葛根素腦探針的回收率為(54.61±0.30)%,血液探針的回收率為(36.81±0.17)%;芍藥苷腦探針的回收率為(40.24±1.05)%,血液探針的回收率為(38.53±1.21)%。3.通竅散瘀組分制劑體內(nèi)藥動學研究3.1通竅散疲組分制劑正常大鼠體內(nèi)藥動學研究本部分結(jié)合微透析技術(shù)對通竅散瘀組分溶液劑和微乳劑正常大鼠經(jīng)鼻遞藥后血液藥動學與腦部藥動學行為進行考察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與溶液劑相比,微乳制劑對葛根素與芍藥苷血液中的生物利用度無影響,而可以顯著提高腦部的生物利用度,增強藥物在腦部的吸收。課題組開發(fā)的中藥復方微乳制劑腦靶向性更好,對于腦中風的治療具有重要的意義。3.2通竅散瘀組分制劑嗅神經(jīng)阻斷大鼠體內(nèi)藥動學研究本部分結(jié)合微透析技術(shù)對通竅散瘀組分溶液劑和微乳劑嗅阻斷大鼠經(jīng)鼻遞藥后藥動學行為進行考察,并與正常大鼠的藥動學行為進行對比。結(jié)果表明與正常大鼠相比,嗅阻斷大鼠葛根素及芍藥苷的AUC0.t顯著性降低,表明嗅神經(jīng)通路的存在能夠增加葛根素及芍藥苷在腦部的吸收。葛根素及芍藥苷的腦靶向指數(shù)較正常大鼠均明顯降低,表明嗅神經(jīng)通路是經(jīng)鼻遞藥后提高腦部生物利用度的重要途徑,在鼻腦通路中具有重要的作用。3.3通竅散瘀單組分微乳正常大鼠體內(nèi)藥動學研究本部分結(jié)合微透析技術(shù)對通竅散瘀單組分微乳和單組分溶液正常大鼠經(jīng)鼻遞藥后藥動學行為進行考察,血液藥動學結(jié)果表明與其他成分配伍能夠提高葛根素的血液中生物利用度,降低芍藥苷的血液生物利用度。腦部藥動學結(jié)果表明,與其他成分配伍能夠提高葛根素與芍藥苷的腦部生物利用度。與單組分制劑相比,成分間的配伍能夠提高制劑的腦靶向性。在中藥復方經(jīng)鼻遞藥系統(tǒng)中,配伍因素對于腦靶向性具有重要影響,對于腦部疾病的治療具有重要作用。實驗結(jié)論本課題結(jié)合微透析技術(shù)對鼻腔給藥通竅散瘀組分制劑的體內(nèi)藥動學進行研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)課題組前期制備的中藥復方微乳經(jīng)鼻遞藥制劑能夠明顯提高腦靶向性,有利于對腦中風的治療�？疾炝诵嵘窠�(jīng)通路在整個鼻-腦通路中的作用,表明嗅神經(jīng)通路在整個鼻-腦通路中占據(jù)重要作用,對于藥物的吸收具有顯著影響;發(fā)現(xiàn)了鼻腦多通路的存在,進一步驗證了“鼻通腦絡(luò)”的中醫(yī)理論。中藥復方制劑中處方配伍因素影響藥物經(jīng)鼻入腦,對于中藥復方納米經(jīng)鼻遞藥系統(tǒng)的研發(fā)具有重要意義。
【圖文】：

Ａ：空白供試品Ｂ：葛根素和芍藥苷混合對照品Ｃ：樣品供試品逡逑圖１．１．１葛根素與芍藥苷的ＨＰＬＣ圖譜（１號峰表示葛根素，２號峰表示芍藥苷）逡逑２．４標準曲線的制備逡逑精密量取１邋ｍＬ葛根素儲備液與１邋ｍＬ芍藥苷儲備液置于１０邋ｍＬ容量瓶中，加入生逡逑理鹽水定容，即得混合對照品儲備液。使用生理鹽水將混合對照品儲備液不斷稀釋，逡逑分別制備成葛根素濃度為邋４９．６５邋｜ｉｇ／ｍＬ、１９．８６邋ｐｇ／ｍＬ、９．９３０邋｜ｉｇ／ｍＬ、３．９７２邋ｐｇ／ｍＬ、０．９９３０逡逑ｌ＿ｉｇ／ｍＬ、０．４９６５邋ｐｇ／ｍＬ；茍藥苷濃度為邋５０．０５邋ｆｉｇ／ｍＬ、２０．０２邋｜＿ｔｇ／ｍＬ、１０．０１邋｜ｊ＿ｇ／ｍＬ＇邋４．００４逡逑噸／ｍＬ、ＬＯＯｌ＾ｇ／ｍＬ、０．５００５｜ｉｇ／ｍＬ的系列濃度混合對照品溶液，按照“２．１”項下測逡逑定葛根素與芍藥苷的ＨＰＬＣ條件對峰面積進行測定。以峰面積作為縱坐標，對應的葛逡逑根素或芍藥苷的濃度作為橫坐標進行線性回歸，葛根素的回歸方程：ｒ＝邋３０．２３ＪＴ邋＋逡逑０．７１６７，，邋ｒ＝ｌ，表明葛根素在０．４９６５明／ｍＬ－４９．６５邋＾ｇ／ｍＬ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；芍藥苷逡逑的回歸方程為：ｒ＝１２．５０Ｚ－０．３６２８，邋ｒ＝ｌ，表明芍藥苷在０．５００５邋＾ｇ／ｍＬ－５０．０５明／ｍＬ范圍逡逑

９．９３０邐２９７．０逡逑１９．８６邐５９６．２逡逑４９．６５邐１５０４．０逡逑表１．１．２芍藥苷標準曲線的濃度及峰面積表逡逑濃度（ｐｇ／ｍＬ）邐峰面積逡逑０．５００５邐７．７逡逑１．００１邐１２．４逡逑４．００４邐５０．５逡逑１０．０１邐１２２．８逡逑２０．０２邐２４７．７逡逑５０．０５邐６２６．２逡逑葛根素逡逑２０００邋－逡逑
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R283.6;R285.5

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本文編號：2651337