【摘要】：石榴果皮為石榴最外層硬殼部分和內(nèi)部不可食用的薄膜層,是石榴汁加工過程中的副產(chǎn)物,含有70多種活性物質(zhì),主要包括多酚、黃酮、有機(jī)酸等,研究證實(shí)部分物質(zhì)具有抗氧化、降血脂、防癌抗腫瘤、抑菌消炎等功效,能夠預(yù)防及緩解多種慢性疾病如心腦血管疾病、白血病、阿爾茨海默氏病等。本研究對石榴皮結(jié)合型植物化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行分離鑒定,并初步評價(jià)了石榴皮游離型、結(jié)合型及分離得到的單體化合物的抑菌活性。(1)結(jié)合型多酚化合物提取條件優(yōu)化。以多酚為指標(biāo),在單因素的基礎(chǔ)上,采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化了石榴皮結(jié)合酚的酸降解條件,得到最佳參數(shù):鹽酸濃度6.10 mol/L、酸解時(shí)間2.01 h、酸解溫度44.17 ℃℃,料液比1:20,在此條件下結(jié)合酚濃度為 30.76 μM GAE/g,模型回歸方程:y = 30.60 +0.95 A +0.27 B +2.07 C +0.62 D-0.13 AB-0.63 AC-1.09 AD +0.075 BC-0.085 BD-1.21 CD-7.89 A2-8.06 B2-7.67 C2-8.51D2,R2Adj=0.9779。(2)石榴皮酸降解前后多酚化合物比較分析。通過HPLC分析了石榴皮酸降解前后多酚化合物的指紋圖譜并比較了二者之間的差異,采用MALDI-TOF-MS與文獻(xiàn)比對的方法鑒定了酸降解前后石榴皮中的主要多酚。結(jié)果表明,石榴皮中游離型小極性酚類化合物種類多于結(jié)合型化合物種類,而中等極性化合物種類中結(jié)合型多于游離型;對主要離子碎片進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)酸降解后釋放至少六種結(jié)合酚類化合物,分別為Punicacortein、Granatin B、Valoneic acid bilactone、Delphinidin-3-O-glucoside、Caffeic acid hexoside、Vanillic acid hexoside。(3)結(jié)合型化合物分離鑒定。利用有機(jī)試劑去除石榴皮游離型化合物后,所剩殘?jiān)捎蒙鲜鰞?yōu)化參數(shù)進(jìn)行酸降解,利用有機(jī)試劑萃取降解液,得到富含結(jié)合型化合物的粗提物。抗菌活性測試結(jié)果表明,粗提物對金黃色葡萄球菌具有顯著的抑制作用,采用活性追綜和多種柱層析相結(jié)合的方法對粗提物進(jìn)行分離純化,得到6個(gè)單體化合物,利用現(xiàn)代波譜學(xué),結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)對比將這些化合物的結(jié)構(gòu)鑒定為:(1)β-胡蘿卜苷,(2)β-豆甾醇,(3)熊果酸,(4)科羅索酸,(5)積雪草酸,(6)阿江欖仁酸,其中化合物4、5、6為首次從石榴皮中分離得到。(4)結(jié)合型化合物抑菌活性評價(jià)。對從石榴皮結(jié)合型粗提物中分離得到的6個(gè)單體化合物進(jìn)行初步抑菌活性測試,結(jié)果表明,化合物2、3、5均有選擇性抑菌活性�；衔�2能抑制產(chǎn)氣腸桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的生長,化合物3能抑制恥垢分歧桿菌、金黃色葡萄球菌的生長,化合物5能明顯抑制金黃色葡萄球菌和恥垢分歧桿菌的生長,MIC值分別為16μg/ml和64μg/ml,化合物5可與化合物6產(chǎn)生協(xié)同抑菌效果,對恥垢分歧桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌產(chǎn)生較強(qiáng)抑制活性,抑制效果高于化合物5。該研究結(jié)果說明,石榴皮中的游離型和結(jié)合型多酚化合物存在明顯差異,結(jié)合型提取物中的主要抑菌活性成分為五環(huán)三萜類化合物,該研究結(jié)果為石榴皮的深加工與綜合利用奠定了理論基礎(chǔ),具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

圖２－１沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ｔｈｅ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋Ｇａｌｌｉｃ邋ａｃｉｄ逡逑沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：逡逑Ｙ＝０．００３７Ｘ＋邋０．０５１３，相關(guān)系數(shù)邋Ｒ２邋＝邋０．９９５９逡逑上式中：Ｘ代表沒食子酸濃度，ｐｇ／ｍＬ；邋Ｙ代表吸光度。式中表明沒食子酸當(dāng)量逡逑（ｐＭ邋ＧＡＥ／ｇ）在０－７００范圍內(nèi)與吸光度呈線性關(guān)系，該方程可用于石榴皮多酚含量的逡逑線性測定。逡逑沒食子酸當(dāng)量計(jì)算公式為：逡逑沒食子酸當(dāng)量＝?jīng)]食子酸濃度Ｘ邋Ｖ邋ｐｍｏｌＧＡＥ／ｇ逡逑Ｍ邋ｘ邋ｍ逡逑上式中：Ｖ為旋蒸后溶液體積１０ｍＬ；邋Ｍ為沒食子酸相對分子質(zhì)量１７０．１２，，邋ｍ為逡逑石榴皮粉質(zhì)量２ｇ。逡逑２．２．３提取游離型多酚化合物溶劑選擇逡逑

２．４酸、堿水解方法的選擇及單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析逡逑２．４．１游離型多酚化學(xué)物的提取溶劑的選擇結(jié)果逡逑不同提取溶劑對游離型石榴皮多酚提取效果的影響如圖２－２所示。從圖中可見，逡逑甲醇提取所得的游離型多酚含量遠(yuǎn)高于其他溶劑，水和丙酮次之。因此游離型多酚的逡逑提取選用甲醇作為提取溶劑。逡逑１０邋ｒ逡逑§邐ｎ逡逑ｉ邐內(nèi)逡逑Ｅ逡逑ｐ邋５邐內(nèi)逡逑ｋ邐Ｔ逡逑，邐＾邋ｒ＾ｉ邋．邐ｒｈ逡逑懺邐ｒ逡逑環(huán)己烷邋氯仿乙酸乙酯丙＿邋甲醇邋水邋正丁醇逡逑溶劑逡逑圖２－２不同溶劑對游離酚降解效果圖逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ｄｉａｇｒａｍ邋ｆｏｒ邋ｆｒｅｅ邋ｐｈｅｎｏｌｓ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｓｏｌｖｅｎｔ逡逑２．４．２結(jié)合型多酚化學(xué)物的提取溶劑的選擇結(jié)果逡逑不同提取溶劑對結(jié)合型石榴皮多酚提取效果如圖２－３所示，從圖中可見，酸性提逡逑取條件下丙酮提取的量要遠(yuǎn)高于其他溶劑的提取量，其次為水和甲醇，因此可采用丙逡逑酮作為酸降解提取結(jié)合型多酚的最佳溶劑。堿性提取條件下水提取的效果最好，其次逡逑為丙酮和甲醇。分別采用酸降解和堿降解法對石榴皮結(jié)合酚進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)酸降解釋逡逑放的結(jié)合酚含量普遍高于堿降解，因此本研究采用酸降解提取結(jié)合酚的方式。逡逑１０逡
【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1;R285

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本文編號：2648520