發(fā)布時間：2020-05-01 13:02

【摘要】：目的:本研究以bEnd.3細胞建立氧糖剝奪模型模擬椎-基底動脈缺血乏氧狀態(tài),初步探討血定眩膠囊含藥血清對缺血乏氧環(huán)境對bEnd.3細胞自噬和相關蛋白表達的影響,為活血定眩膠囊的臨床應用及進一步推廣提供科學依據(jù),最終在細胞及蛋白水平上為中醫(yī)藥防治椎動脈型頸椎病提供研究思路。方法:制備活血定眩膠囊含藥血清;培養(yǎng)bEnd.3細胞并傳代,將傳至3代的bEnd.3細胞建立OGD模型,并設置分組:空白組,OGD模型組,活血定眩膠囊含藥血清高、中、低劑量組(15%、10%、5%),西藥組,按照相應條件進行給藥并干預6h。在顯微鏡下觀察正常細胞形態(tài);采用單丹磺酰尸胺染色觀察bEnd.3細胞自噬小體;硝酸根還原酶法檢測一氧化氮含量;微量酶標法檢測乳酸脫氫酶釋放量;采用Western blot技術檢測bEnd.3細胞p62、Bcline-1、LC3蛋白的表達水平;觀察活血定眩膠囊含藥血清對bEnd.3細胞自噬及相關蛋白表達的影響。結果:1對P1代bEnd.3細胞進行復蘇,于第二天時可見其貼壁生長,呈長條形或梭形或多邊形,胞漿豐富,形態(tài)飽滿。在適宜的條件下第三天時細胞增殖分裂加快,長滿瓶底,呈鋪路石樣。2單丹磺酰尸胺染色在熒光顯微鏡下觀察自噬小體,表現(xiàn)為大小不一、形狀不等、致密濃染的熒光顆粒。3活血定眩膠囊含藥血清對bEnd.3細胞中NO含量的影響:與空白組相比,OGD模型組由于乏氧饑餓,細胞活性減低,細胞受損,NO分泌減少,兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清組及西藥組NO的含量較高,且具有統(tǒng)計學意義(P0.05);活血定眩膠囊含藥血清中劑量組與西藥組之間無明顯差異,兩組療效相當,且含藥血清中劑量組高于活血定眩膠囊含藥血清高劑量、低劑量組;4活血定眩膠囊含藥血清對bEnd.3細胞中LDH釋放量的影響:與空白組相比,模型組LDH釋放量明顯增多,且差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清高、中、低劑量組與西藥組LDH釋放量較低,且與模型組相比,活血定眩膠囊含藥血清組高、低劑量組與西藥組具有統(tǒng)計學意義(P0.05);5活血定眩膠囊含藥血清對自噬相關蛋白Bcline-1、LC3、p62的影響:與空白組比較,OGD模型組p62、Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達水平均升高,Becline-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表達具有統(tǒng)計學意義(P0.01),p62蛋白表達無統(tǒng)計意義(P0.05);與模型組相比,活血定眩含藥血清中劑量組和西藥組p62表達明顯下降,Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表達明顯升高,具有統(tǒng)計學意義(P0.01),p62蛋白表達中活血定眩膠囊含藥血清中劑量組與西藥組見無統(tǒng)計學意義(P0.05),且p62與Becline-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ兩組之間表達呈負相關。結論:1活血定眩膠囊可明顯改善乏氧饑餓條件對bEnd.3細胞造成的損傷,增加NO的分泌量并且抑制LDH的釋放量,改善血管內(nèi)皮細胞活性;2活血定眩膠囊含藥血清通過影響p62、Bcline-1、LC3相關自噬蛋白的表達水平從而調(diào)控乏氧饑餓環(huán)境下bEnd.3細胞自噬,進一步改善血流,調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮功能,促進血管新生,為活血定眩膠囊防治CSA提供新思路。
【圖文】：

活血定眩膠囊含藥血清對 OGD 環(huán)境下 bEnd.3 細胞自噬及相關蛋白表達的影響4 統(tǒng)計學方法采用 SPSS22.0 軟件進行數(shù)據(jù)處理，其中正態(tài)分布或接近正態(tài)分布的均以均數(shù)±標準差（ X±S）表示。組間比較用 t 檢驗，多組之間比較采用單因素方差分析，P＜0.05即有統(tǒng)計學意義。三 實驗結果1 bEnd.3 細胞形態(tài)學結果對 P1 代 bEnd.3 細胞進行復蘇，于第二天時可見其貼壁生長，，呈長條形或梭形或多邊形，胞漿豐富，形態(tài)飽滿。在適宜的條件下第三天時細胞增殖分裂加快，長滿瓶底，呈鋪路石樣。如圖 1 所示：

MDC染色
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2646675