【摘要】：目的:探索在高糖環(huán)境下合歡皮提取物(Acacia julibrissin extract,AJE)是否對體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞(Human retinal vascular endothelial cells,HRCECs)的增殖及其VEGF表達有影響,以此為依據(jù)進一步明確合歡皮提取物是否可用于治療糖尿病視網(wǎng)膜相關病變。方法:于體外建立高糖環(huán)境來培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞,并用細胞免疫熒光法予以鑒定;通過預實驗確定合歡皮提取物實驗濃度后,利用MTT比色分析法研究不同濃度合歡皮提取物對HRCECs增殖的作用;利用蛋白質(zhì)免疫印跡法明確不同濃度合歡皮提取物對HRCECs中VEGF表達的影響。結(jié)果:人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞在高糖環(huán)境的培養(yǎng)下由于不同濃度合歡皮提取物的干預,其細胞增殖水平會受到不同程度地抑制。具體表現(xiàn)有:1、根據(jù)MTT比色法數(shù)據(jù)結(jié)果分析得出:1)在同一培養(yǎng)時間下,低糖組HRCECs數(shù)量相對于高糖組是明顯減少的,P0.05,在統(tǒng)計學上具有差異;2)HRCECs經(jīng)過24h、48h培養(yǎng)后,不同濃度合歡皮提取物(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)+高糖組不同組別之間兩兩比較,HRCECs細胞抑制率隨著合歡皮提取物濃度升高而增加,結(jié)果具有顯著性差異(P0.05);但HRCECs經(jīng)過72h培養(yǎng)后,不同濃度合歡皮提取物(10μg/ml、20μg/ml)+高糖組兩組之間的吸光度值在統(tǒng)計學上無明顯差異,濃度為(30μg/ml、40μg/ml)合歡皮提取物+高糖組兩組間吸光度值亦無明顯差異,(P0.05),無統(tǒng)計學意義,因此在接下來的實驗中選取24h及48h培養(yǎng)時間段進行研究;2、應用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)檢測本實驗不同分組HRCECs中VEGF的表達情況:1)HRCECs無論是經(jīng)過24h還是48h培養(yǎng)后,高糖組HRCECs中VEGF的表達量都高于低糖組,其蛋白條帶灰度值數(shù)據(jù)分析結(jié)果具有顯著差異,有統(tǒng)計學意義(P0.05);2)HRCECs在同一培養(yǎng)時間下,不同濃度合歡皮提取物(10μg/ml、20μg/ml、30μg/ml、40μg/ml)+高糖組不同濃度分組間兩兩比較,HRCECs中VEGF的表達量隨著合歡皮提取物濃度升高而降低,結(jié)果具有顯著性差異(P0.05)。結(jié)論:高糖環(huán)境能夠促使體外培養(yǎng)的HRCECs增殖及其VEGF表達增加;高糖環(huán)境下培養(yǎng)的HRCECs增殖受不同濃度AJE的抑制,在一定時間范圍內(nèi),其規(guī)律呈濃度依賴性;同時不同濃度的AJE干預下可下調(diào)HRCECs中VEGF的表達。
【圖文】：

第四章 實驗結(jié)果培養(yǎng)與傳代：7℃ 的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)原代 HRCECs，，培養(yǎng)一至兩顯微鏡下可見其為扁平梭狀，其中混有多種雜液，待細胞培養(yǎng)一至兩周時，雜質(zhì)細胞已明養(yǎng)皿底部，并出現(xiàn)細胞接觸抑制現(xiàn)象（見圖比例規(guī)律開始傳代，約 1~2 天予以換液，取對

4.1 HRCECs培養(yǎng)至14天時，細胞呈鋪路石樣×200的鑒定：標記的第 VIII 因子相關抗原抗體孵育后，人視網(wǎng)膜黃綠色熒光，黑綠色的為胞核，細胞輪廓清楚（見育 HRCECs 成功。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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