【摘要】：霍山石斛(Dendrobium huoshanense)是我國一種傳統(tǒng)的藥用植物,其莖部位可經(jīng)加工成為楓斗,是一種珍貴的補(bǔ)品。本文以栽培的霍山石斛莖部位為原料提取多糖,以小鼠Raw264.7巨噬細(xì)胞為模型評價(jià)多糖的抗炎活性,并對高活性組分的結(jié)構(gòu)進(jìn)行解析,對其抗炎信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行探討,以期為闡明霍山石斛多糖功能與結(jié)構(gòu)之間的聯(lián)系奠定基礎(chǔ)。(1)以巨噬細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)NO水平為指標(biāo),對霍山石斛不同成分進(jìn)行活性導(dǎo)向分離,經(jīng)脫脂、水提醇沉、DE-52陰離子交換樹脂分離、乙醇分級,獲得抗炎活性不同的5種組分,其中以多糖組分c DHP-W1抗炎活性最佳。(2)理化性質(zhì)分析表明,c DHP-W1是一相對分子質(zhì)量為24 k Da、主要由Man和Glc按1.00:8.21摩爾比所組成的均一多糖,其碳水化合物含量為97.79%,特性粘度(?)為0.7192,并含有4.3%乙�；�1.4%的糖醛酸。高碘酸氧化、FT-IR、GC-MS及1D和2D NMR分析揭示,c DHP-W1的主鏈由1,4-linked-Glcp、1,4-linked-Manp和1,4,6-linked-Glcp所組成,其支鏈為T-linked-Glcp。(3)利用LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞炎癥模型,初步探討了c DHP-W1的抗炎活性及其作用機(jī)制。濃度梯度實(shí)驗(yàn)表明,c DHP-W1能夠劑量依賴地抑制LPS誘導(dǎo)的NO、PGE2、TNF-α和IL-1β等炎性介質(zhì)的分泌,當(dāng)濃度達(dá)到200μg/m L時(shí),抑制效果最為顯著。LPS及c DHP-W1處理時(shí)間實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)c DHP-W1預(yù)處理時(shí)間為1 h、LPS處理時(shí)間為24 h時(shí),c DHP-W1對NO、PGE2、TNF-α和IL-1β分泌的抑制效果最佳。RT-PCR分析表明,不同的LPS及c DHP-W1處理時(shí)間下,i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)量各不相同,當(dāng)c DHP-W1預(yù)處理時(shí)間為1 h、LPS處理時(shí)間為12 h時(shí),c DHP-W1可顯著下調(diào)i NOS、COX-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)。Western Blot分析表明,c DHP-W1預(yù)處理1 h可有效抑制LPS激發(fā)的p38、ERK、JNK的磷酸化和IκB、p65的核移位,提示c DHP-W1可通過抑制LPS激活的由TLR4介導(dǎo)的NF-κB和MAPK信號通路,從而抑制巨噬細(xì)胞炎性介質(zhì)的表達(dá)與分泌。
【圖文】：

第三章 結(jié)果與分析第三章 結(jié)果與分析導(dǎo)向分離純化石斛莖經(jīng)脫脂、水提醇沉可以得到霍山石斛粗多糖（c-cDHP） sevge脫蛋白法處理后得到精制多糖 cDHP，用陰離子交換樹脂 DE離得到水洗糖（cDHP-W）和鹽洗糖（cDHP-S）兩種組分，，其得率9%，8.6%。80%分級醇沉可以從 cDHP-W 中分離出醇沉糖（cDHP- 4.9%。以細(xì)胞活力為檢測指標(biāo)測定各組分對細(xì)胞是否具有毒性，以檢測指標(biāo)對各個(gè)組分進(jìn)行抗炎活性篩選。

圖 3. 2 霍山石斛各組分的 NO抑制率fig 3.2 NO inhibition rate of the components of Dendrobium huoshanense注：圖中數(shù)據(jù)以三次平行試驗(yàn)結(jié)果平均值表示，其中*表示與正常組相比具有顯著差p<0.05）,**表示與正常組相比具有極顯著差異（p<0.01）。由圖 3.2 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在霍山石斛各組分濃度為 25~400 μg/mL 的范圍內(nèi)，其 LPS 誘導(dǎo)產(chǎn)生的 NO 有一定的抑制效果，且顯示出劑量依賴性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表cDHP、cDHP、cDHP-W、cDHP-W1 對 NO 分泌的最佳抑制濃度為 200 μg/m抑制率達(dá)到 33.8%。其中，cDHP-W1 表現(xiàn)出比其他霍山石斛組分更強(qiáng)的抗炎活性，表明 cDHP-W1 是霍山石斛中的的主要抗炎活性多糖。2 抗炎活性多糖 cDHP-W1 的結(jié)構(gòu)解析2.1 理化性質(zhì)利用葡聚糖凝膠 Sephedex S-200 對抗炎活性多糖 cDHP-W1 進(jìn)一步純化后理化分析，結(jié)果表明，cDHP-W1 的碳水化合物含量為 97.79%，特性粘度（
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285;R284.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王小軍;蔡曦光;劉華;邱勇玉;;黃芪多糖對穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病患者外周單核巨噬細(xì)胞Toll樣受體4/核因子-κB通路的影響[J];臨床內(nèi)科雜志;2017年07期

2 錢明雪;李勝立;李凡;潘利華;查學(xué)強(qiáng);李德文;羅建平;;6種石斛多糖抗亞急性酒精性肝損傷作用的比較[J];中國藥學(xué)雜志;2015年24期

3 孟海濤;汪鶴;查學(xué)強(qiáng);潘利華;羅建平;;霍山石斛不同提取物抗小鼠亞急性酒精性肝損傷活性的比較研究[J];食品科學(xué);2015年13期

4 王鵬程;趙珊;馮健;趙宏;王秋紅;匡海學(xué);;基于NF-κB信號通路的中藥抗?jié)冃越Y(jié)腸炎研究進(jìn)展[J];中草藥;2015年10期

5 田長城;羅建平;;霍山石斛中不同多糖組分的保肝活性[J];食品科學(xué);2015年07期

6 余道倫;李偉;;高檔滋補(bǔ)品石斛肉鴿營養(yǎng)液軟包裝的研制[J];湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

7 郝冉;王正明;查學(xué)強(qiáng);潘利華;羅建平;;霍山石斛多糖的腸黏膜免疫調(diào)節(jié)活性及在小腸中的吸收分布[J];食品科學(xué);2014年09期

8 張浩;昝金行;劉培勛;;誘導(dǎo)型一氧化氮合酶抑制劑的研究進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2013年06期

9 余剛;夏云建;尹航;;霍山石斛多糖抗運(yùn)動性疲勞實(shí)驗(yàn)研究[J];運(yùn)動;2013年02期

10 李勝立;陳程;楊思林;潘利華;張海林;張樂樂;羅建平;;霍山石斛類原球莖免疫調(diào)節(jié)活性的有效部位及其毒理安全性評價(jià)[J];藥物評價(jià)研究;2012年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 關(guān)爽;紅景天苷的抗炎作用及其對炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡夢君;化橘紅黃酮對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的抗炎作用及其機(jī)制探究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

2 鄭珊;中藥抗炎制劑的研發(fā)[D];西南大學(xué);2015年

3 王正明;提取溫度對霍山石斛多糖理化性質(zhì)及腸道粘膜免疫活性的影響[D];合肥工業(yè)大學(xué);2013年

4 李晨;大蒜素對炎癥性腸病的治療作用及其對MAPK信號通路的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

5 姜蘇薇;霍山石斛多糖對非酒精性脂肪性肝損傷的干預(yù)及改善作用研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2012年

6 李秀芳;霍山石斛和四種藥典石斛多糖降血糖活性比較研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2012年

7 武劍;柴胡多糖對巨噬細(xì)胞免疫功能的調(diào)節(jié)及對TLR4信號通路的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

8 張俊青;金釵石斛有效成分對脂多糖激活星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2010年

9 鮑麗娟;四種石斛抗腫瘤活性的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2007年

10 黃森;霍山石斛多糖提取分離以及抗腫瘤活性的研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2007年

本文編號：2643916