【摘要】：目的:通過觀察升陽益胃湯對胃癌前病變(PLGC)模型大鼠微血管密度(MVD)及抑癌基因P16與野生型P53基因和蛋白表達的影響,分析升陽益胃湯改善胃黏膜病理狀態(tài)的機理,探討其對PLGC干預(yù)與治療的分子生物學(xué)機理,為臨床拓展升陽益胃湯在相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用提供實驗與理論基礎(chǔ)。方法:將96只SPF級Wistar大鼠按隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組,維酶素組、和升陽益胃湯高、中、低劑量組,每組16只,除空白組,其余各組大鼠予濃度為150μg·mL~(-1)MNNG溶液,避光自由飲用,同時將雷尼替丁溶于60℃濃鹽水2.25g·L~(-1)灌胃,每日一次,劑量為1mL·100g~(-1)連續(xù)12周,成功復(fù)制PLGC模型,于第12周開始分別予維酶素組與升陽益胃湯高、中、低劑量組以維酶素懸浮液與不同濃度升陽益胃湯濃縮液灌胃,一日一次,空白組與模型組以等體積生理鹽水灌胃,一日一次,連續(xù)6周,第18周末禁食24h,予水合氯醛麻醉處死取材,行蘇木素伊紅染色(HE染色)觀察胃黏膜病理狀況,免疫組化法檢測CD34以觀察胃黏膜微血管密度情況,免疫組化法檢測胃黏膜P16與野生型P53蛋白的表達情況,采用實時熒光定量PCR法檢測胃黏膜P16與野生型P53的轉(zhuǎn)錄水平,采用免疫組化法檢測胃黏膜P16與P53的相對表達量。結(jié)果:1、各組大鼠的一般狀態(tài)變化空白組大鼠飲食正常,精神狀態(tài)良好,皮毛光澤,體重正常,大便成灰白色顆粒狀。與空白組大鼠相比較,模型組大鼠飲食減少,精神狀態(tài)較差,喜扎堆,皮毛粗糙,體重增長緩慢,體形瘦小,大便不成形,墊料較空白組大鼠異味較重。各藥物組大鼠飲食較模型組大鼠好轉(zhuǎn),活動度增加,大便逐漸恢復(fù)顆粒狀,墊料異味減輕。2、各組大鼠胃黏膜病理狀態(tài)改變空白組大鼠胃黏膜厚度正常,胃黏膜上皮細胞呈單層柱狀,胞漿透明或呈小空泡狀,與腺管分界清楚,腺管排列整齊,大小形狀一致;與空白組相比較,模型組胃黏膜上皮萎縮變薄,腺體數(shù)量減少,間質(zhì)內(nèi)有炎性細胞浸潤,紅細胞增多,腺體結(jié)構(gòu)不規(guī)整,核漿比例增大,個別腺體出現(xiàn)囊狀擴張;與模型組相比較,各治療組腺體結(jié)構(gòu)較規(guī)則,炎性細胞浸潤減少,腺體數(shù)量逐漸增多,胃黏膜病理狀態(tài)有向愈趨勢,其中以升陽益胃湯高劑量組最為明顯。3、各組大鼠MVD改變與空白組大鼠相比,模型組微血管密度數(shù)明顯減少,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與模型組大鼠相比較,維酶素組與升陽益胃湯中劑量組組微血管數(shù)增多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),升陽益胃湯高劑量組微血管數(shù)明顯增多,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),藥物低組微血管數(shù)的變化差異性不顯著(P0.05)4、免疫組化檢測各組大鼠P16、野生型P53蛋白表達情況與空白組相比,模型組大鼠P16、P53蛋白表達量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組相比較,維酶素組、升陽益胃湯中劑量組組P16蛋白的表達量增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),升陽益胃湯高劑量組P16蛋白的表達量明顯增大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),升陽益胃湯低劑量組P16蛋白的表達量的變化差異沒有顯著性(P0.05)。與模型組相比較,維酶素組、升陽益胃湯低劑量組P53蛋白的表達量增大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),升陽益胃湯高、中劑量組P53蛋白的表達量明顯增大,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)5、熒光定量PCR各組大鼠胃黏膜P16、P53mRNA表達情況與空白組相比,模型組大鼠胃黏膜P16、P53m RNA表達量均降低,差距具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與模型組相比,升陽益胃湯高、中劑量組與維酶素組P16mRNA表達量均明顯升高,差距具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),升陽益胃湯低劑量組P16mRNA表達量上升不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,各治療組大鼠胃黏膜P53mRNA表達量均明顯升高,差距具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6、Western blot法檢測各組大鼠P16、P53蛋白相對表達量與空白組相比較,模型組大鼠胃黏膜P16、P53蛋白表達量明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與模型組相比,維酶素組以及升陽益胃湯高劑量組P16、P53蛋白表達量明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),升陽益胃湯低劑量組大鼠P16、P53蛋白表達量雖有升高,但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論首先本研究通過以MNNG為基礎(chǔ)的復(fù)合造模法復(fù)制PLGC模型,連續(xù)12周,結(jié)合病理黏膜狀態(tài)分析,成功復(fù)制PLGC模型。而經(jīng)過升陽益胃湯干預(yù)后,大鼠胃黏膜MVD值,以及野生型P53與P16均明顯升高,提示升陽益胃湯可能通過改善胃黏膜局部血液循環(huán)狀態(tài),升高抑癌基因P16與野生型P53的表達從而改善胃黏膜病理狀態(tài)達到干預(yù)與治療PLGC的目的。
【圖文】：

圖 1 各組大鼠 CD34 免疫組化 MOD 值組化檢測各組大鼠 P16、野生型 P53 蛋白表達情況空白組相比，模型組大鼠 P16、P53 蛋白表達量明顯降低，，差異具有統(tǒng)

各組大鼠胃黏膜P16表達情況
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R-332

【參考文獻】

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1 劉世煒;蔡s

本文編號：2643231