【摘要】：目的:對2015年版《中國藥典》阿膠的鑒定項和含量測定項檢測方法進(jìn)行優(yōu)化,提高其實用性。運(yùn)用多元多息分析方法對阿膠及其他動物皮膠進(jìn)行檢測,借用多元統(tǒng)計分析方法對檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納分析,力求找到阿膠與其他動物皮膠的差異,為阿膠的真?zhèn)舞b別提供新的思路。方法:應(yīng)用2015年版《中國藥典》阿膠的鑒定項和含量測定項檢測方法對收集到的不同廠家阿膠以及不同動物皮膠樣品進(jìn)行檢測,驗證藥典方法,尋找應(yīng)用中的不足,開展優(yōu)化研究。分別應(yīng)用UV、HPLC、ICP-MS、離子交換色譜等方法對阿膠及不同動物皮膠進(jìn)行檢測,利用檢測數(shù)據(jù)建立多元統(tǒng)計分析模型,對其進(jìn)行區(qū)分。結(jié)果:1.對2015年版《中國藥典》阿膠的鑒定項進(jìn)行了優(yōu)化,增加了牛皮膠特征多肽和豬皮膠特征多肽的檢測,能夠有效鑒別出摻牛皮膠和豬皮膠的阿膠偽品;建議以模糊校正因子為指標(biāo)制定阿膠特征多肽的含量范圍,大約在0.8～1.4之間,為摻偽阿膠的鑒定提供了新的思路。2.對2015年版《中國藥典》阿膠的含量測定項進(jìn)行了優(yōu)化,更改了流動相與進(jìn)樣體積;采用一測多評的方法,以甘氨酸為參照控制L-羥脯氨酸、丙氨酸、L一脯氨酸3種氨基酸的含量,實現(xiàn)利用甘氨酸一種對照品同時測定樣品中4種氨基酸的含量。3.將13個不同動物皮膠樣品的紫外吸收光譜數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析,結(jié)果顯示4種動物皮膠聚為兩大類,豬皮膠聚為一類,其他動物皮膠聚為一類。4.應(yīng)用考馬斯亮藍(lán)染色法對18批阿膠、偽品阿膠及不同動物皮膠樣品進(jìn)行了蛋白質(zhì)含量測定,結(jié)果阿膠、牛皮膠、馬皮膠蛋白質(zhì)含量結(jié)果比較相近,豬皮膠的含量稍低。2批網(wǎng)購偽品阿膠與1批假福膠蛋白質(zhì)含量與正品相近,無顯著差異。5.測定了25批不同動物皮膠17種氨基酸的含量。建立了不同廠家17種AA含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分福牌阿膠和東阿阿膠;建立了不同動物皮膠17種氨基酸含量的OPLS-DA模型,能夠有效區(qū)分阿膠、牛皮膠、馬皮膠、豬皮膠4種動物皮膠,并且由OPLS-DA散點圖得出結(jié)論L-脯氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸在4種動物皮膠中的含量差異較大,是4種動物皮膠的差異性成分。6.測定了3個廠家17批阿膠4種游離氨基酸的含量,總結(jié)了游離氨基酸的含量范圍;建立了不同廠家4種游離氨基酸含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分福牌阿膠、東阿阿膠和宏濟(jì)堂阿膠。7.不同動物皮膠以及不同廠家阿膠樣品Cl-,SO42-,NO3-,PO43-4種陰離子含量有差異,其中,豬皮膠含有PO43-,而其他動物皮膠未檢出;華鵬阿膠中只檢出Cl-,SO42-,兩種陰離子,其他動物皮膠及其他品牌阿膠中均檢出Cl-,SO42-,NO3-三種陰離子;豬皮膠中Cl-含量較高;宏濟(jì)堂阿膠SO42-含量最高,其他品牌阿膠及其他動物皮膠均是Cl-含量最高。8.建立了 4種不同動物皮膠樣品的17種微量元素含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分不同動物皮膠,并且由OPLS-DA的S-Plot圖得出結(jié)論Na、K、Ca、Mg4種元素在不同動物皮膠中的含量差異較大,是4種動物皮膠的差異性元素。結(jié)論:優(yōu)化后的藥典方法重復(fù)性好,可操作性強(qiáng),更適于阿膠中4種氨基酸的含量測定及摻假阿膠的鑒定;不同廠家阿膠及不同動物皮膠在紫外光譜、蛋白質(zhì)含量、AA含量、游離AA含量、微量元素含量及陰離子含量上有差異。紫外光譜法可以有效區(qū)分豬皮膠和其他動物皮膠;17種AA含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分福牌阿膠和東阿阿膠;17種氨基酸含量的OPLS-DA模型,能夠有效區(qū)分阿膠、牛皮膠、馬皮膠、豬皮膠4種動物皮膠;4種游離氨基酸含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分福牌阿膠、東阿阿膠和宏濟(jì)堂阿膠;17種微量元素含量的PLS-DA模型,能夠有效的區(qū)分阿膠、牛皮膠、馬皮膠、豬皮膠4種動物皮膠。通過本文的研究,對阿膠的藥典方法進(jìn)行了優(yōu)化,并采用模式識別的方法實現(xiàn)了對不同廠家、不同動物皮膠的識別,為阿膠的質(zhì)量評價及鑒定提供了新的思路和方法。
【圖文】：

將“２．２”項下５個不同濃度的對照品溶液注入高效液相色譜儀，，進(jìn)樣量３邋ＵＬ，測逡逑定峰面積，并以峰面積值（Ｙ）對含量（Ｘ）進(jìn)行回歸，分別計算標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。線逡逑性關(guān)系見表２－２。標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖２－２。逡逑２０逡逑

圖３－１牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇ３－１邋Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ邋Ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋Ｂｏｖｉｎｅ邋Ｓｅｒｕｍ邋Ａｌｂｕｍｉｎ逡逑２．５精密度試驗逡逑精密量取第３個系列濃度的蛋丨＇丨質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)液ｌｍＬ，精密加入考馬斯亮藍(lán)Ｇ２５０溶液５ｍＬ，逡逑顯色５ｍｉｎ，在５９５ｎｍ處測定吸光度值，重復(fù)測定６次，計算得ＲＳＤ值為０．邋１２％，結(jié)果見表逡逑３－１，表明儀器精密度良好。逡逑表３－１精密度實驗結(jié)果逡逑Ｔａｂ３－１邋Ｔｈｅ邋Ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ邋Ｔｅｓｔ逡逑測定次數(shù)邐１邐２邐３邐４邐５邐６邐ＲＳＤ％逡逑吸光度值邐０．４７３邐０．４７３邐０．４７２邐０．４７３邐０．４７２邐０．４７２邐０．１２逡逑２．６重復(fù)性實驗逡逑S胃＝海慚罰斗藎直鳶湊鍘埃玻場畢釹路椒ㄌ酳蔚啊藏�，全@舴諶%精密量取逡逑ｌｍＬ，精密加入考馬斯亮藍(lán)Ｇ２５０溶液５ｍＬ，邋Ｖ色５ｍｉｎ，在５９５ｎｍ處測定吸光度俏。計逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2642467