【摘要】：目的:探討補腎健脾活血方干預大鼠廢用性肌萎縮的作用及可能的機制。材料與方法:SPF級2月齡wistar雌性大鼠40只,體重(240~260)g,適應性喂養(yǎng)一周后,按體重隨機分層的方法分組,分別為空白對照組、模型組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組,每組各8只大鼠。除正常組外各組均給予尾懸吊造模處理,造模同時根據(jù)人和大鼠體表面積比進行臨床等劑量換算后灌胃給藥:補腎健脾活血方低、中、高劑量組給予等體積相應濃度的補腎健脾活血方混懸液灌胃,空白對照組和模型組給予與給藥組等體積的蒸餾水灌胃。每日灌胃一次,第28d灌胃2h后,稱重,腹腔注射麻醉,腹主動脈取血,靜置2h后,離心(2500rpm,4℃,20min),收集血清,進行分裝,置于-80℃冰箱保存,分離大鼠后肢比目魚肌,稱重后,左后肢比目魚肌置于4%多聚甲醛固定,右后肢比目魚肌置于-80℃冰箱保存。對各組大鼠體重、比目魚肌進行稱重,計算各組大鼠肌肉濕重體重比;ELISA法檢測血清中肌肉生長抑制素(MSTN)含量的表達;HE染色比較各組大鼠比目魚肌肌肉橫截面肌纖維數(shù)目,觀察細胞核聚集情況;Western blotting法檢測比目魚肌肌肉組織中蛋白激酶B(AKT),叉頭蛋白轉(zhuǎn)錄因子(FOXO1),SMAD蛋白3(SMAD3)肌環(huán)指蛋白(Mu RF1),萎縮素第一型基因(Atrogin-1)蛋白的表達。結(jié)果:1.補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌肌肉濕重體重比的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌肌肉體重比明顯下降(P0.01);與模型組相比,補腎健脾活血方低、中、高劑量組大鼠比目魚肌肌肉體重比有所增加(P0.05);與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量組與補腎健脾活血方高劑量組大鼠比目魚肌肌肉體重比均無明顯差異(P0.05),但是隨著補腎健脾活血方藥物濃度的增加,補腎健脾活血方低、中、高劑量組大鼠比目魚肌肌肉濕重體重比呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢。2.補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌肌纖維數(shù)目和細胞核聚集情況的影響相同放大倍數(shù)條件下,與空白對照組相比較,模型組大鼠肌纖維橫截面明顯減小,肌纖維密度顯著增加,肌纖維之間的筋膜橫截面顯著增大,肌束之間的筋膜橫截面明顯減小,細胞核高度聚集;與模型組相比,補腎健脾活血方低、中、高劑量組肌纖維橫截面均明顯增大,肌纖維密度均顯著降低,肌束之間的筋膜的橫截面均明顯增大,細胞核聚集程度均下降;隨著補腎健脾活血方低、中、高劑量中藥濃度的增加,肌纖維橫截面增大的程度逐漸增加,肌纖維密度降低的程度也逐漸增加,肌束之間的筋膜的橫截面的增大越來越明顯,細胞核聚集程度下降也越來越顯著。3.補腎健脾活血方通過調(diào)控TGF-β/myostatin信號通路干預廢用性肌萎縮3.1補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠血清中肌肉生長抑制素(MSTN)含量的影響與空白對照組相比,模型組大鼠血清MSTN含量明顯增多(P0.01);與模型組相比,補腎健脾活血方低、中、高劑量組大鼠血清MSTN含量有均下降,其中補腎健脾活血方低劑量組表達下降(P0.05),補腎健脾活血方中、高劑量組表達顯著下降(P0.01),與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量組和補腎健脾活血方高劑量組大鼠血清MSTN含量表達均沒有顯著性差異(P0.05)。3.2補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌中Smad3蛋白表達的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌中Smad3蛋白表達量降低(P0.05);與模型組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中Smad3蛋白表達量升高不明顯,無顯著差異(P0.05),補腎健脾活血方中劑量組和高劑量組大鼠比目魚肌中Smad3蛋白表達明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),且隨著藥物劑量濃度的增加,Smad3蛋白表達量呈逐步升高的趨勢;與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中Smad3蛋白表達明顯減少(P0.01),補腎健脾活血方高劑量組Smad3蛋白表達量明顯增加(P0.01)。3.3補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌中Akt蛋白表達的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌中Akt蛋白表達量降低(P0.05);與模型組相比,補腎健脾活血方低、中、高劑量組大鼠比目魚肌中Akt蛋白表達量均升高(P0.05),與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中Akt蛋白表達量顯著減少(P0.01),補腎健脾活血方高劑量組大鼠比目魚肌中Akt蛋白表達量沒有顯著性差異(P0.05)。3.4補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌中FOXO1蛋白表達的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌中FOXO1蛋白表達量升高(P0.05)。與模型組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中FOXO1蛋白表達量降低(P0.05),補腎健脾活血方中劑量和高劑量組大鼠比目魚肌中FOXO1蛋白表達量均顯著降低(P0.01);與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量和高劑量組大鼠肌肉中FOXO1蛋白表達量均沒有明顯差異,但是補腎健脾活血方低、中、高劑量組大鼠肌肉中FOXO1蛋白表達量具有逐漸降低的趨勢。4.補腎健脾活血方通過調(diào)控泛素蛋白酶體途徑干預廢用性肌萎縮4.1補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌中Mur F-1蛋白表達的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌中Mur F-1蛋白表達量升高(P0.05)。與模型組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中Murf1蛋白表達量降低(P0.05),補腎健脾活血方中劑量組和高劑量組大鼠比目魚肌中Murf1蛋白表達量顯著降低(P0.01);與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方高劑量組大鼠比目魚肌中Murf1蛋白表達量升高(P0.05)。4.2補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌中MAFbx蛋白表達的影響與空白對照組相比,模型組大鼠比目魚肌中MAFbx蛋白表達升高(P0.05)。與模型組相比,補腎健脾活血方低劑量組大鼠比目魚肌中MAFbx蛋白表達量降低(P0.05),補腎健脾活血方中劑量組和高劑量組大鼠比目魚肌中MAFbx蛋白表達量均顯著降低(P0.01);與補腎健脾活血方中劑量組相比,補腎健脾活血方低劑量組和高劑量組大鼠比目魚肌中MAFbx蛋白表達量均沒有明顯差異(P0.05),但隨著補腎健脾活血方藥物濃度的增加大鼠肌肉中MAFbx蛋白表達量呈逐漸降低的趨勢。結(jié)論:1.補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮具有干預作用。2.補腎健脾活血方干預廢用性肌萎縮的可能作用機制之一是與該方調(diào)控TGF-β/myostatin信號通路以及泛素蛋白酶體途徑有關(guān),體現(xiàn)出該方的多靶點作用機制。
【圖文】：

- 18 -圖1 各組大鼠比目魚肌與體重比注：A：空白對照組 B：模型組 C：補腎健脾活血方低劑量組 D：補腎健脾活血方中劑量組 E：補腎健脾活血方高劑量組2.補腎健脾活血方對廢用性肌萎縮大鼠比目魚肌肌纖維數(shù)目和細胞核聚集情況的影響相同放大倍數(shù)條件下，與空白對照組相比較，模型組大鼠肌纖維橫截面明顯減小，肌纖維密度顯著增加，肌纖維之間的筋膜橫截面顯著增大，肌束之間的筋膜橫截面明顯減小，，細胞核高度聚集；與模型組相比，補腎健脾活血方低、中、高劑量組肌纖維橫截面均明顯增大，肌纖維密度均顯著降低，肌束之間的筋膜的橫截面均明顯增大，細胞核聚集程度均下降；隨著補腎健脾活血方低、中、高劑量中藥濃度的增加，肌纖維橫截面增大的程度逐漸增加，肌纖維密度降低的程度也逐漸增加，肌束之間的筋膜的橫截面的增大越來越明顯，細胞核聚集程度下降也越來越顯著。結(jié)果見

- 19 -圖2 各組大鼠比目魚肌肌肉橫切面HE染色結(jié)果（400×）注：A:空白對照組 B:模型組 C:補腎健脾活血方低劑量組 D:補腎健脾活血方中劑量組 E:補腎健脾活血方高劑量組
【學位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2640972