【摘要】：目的以款冬花生品、蜜炙品及甘草炙品為研究對(duì)象,采用對(duì)比研究的模式,通過響應(yīng)曲面試驗(yàn)優(yōu)化炮制工藝;借助紫外可見分光光度法、高效液相色譜法定量分析,液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法定性分析,藥效及體內(nèi)外肝毒性試驗(yàn),研究款冬花炮制前后成分及功效變化,闡釋款冬花炮制機(jī)理。方法1.以酚酸類、黃酮類、款冬酮及總生物堿含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),采用三因素三水平的響應(yīng)曲面試驗(yàn)考察輔料用量、炒制溫度、炒制時(shí)間對(duì)蜜炙及甘草炙款冬花炮制工藝的影響,優(yōu)選出最佳炮制條件。2.采用HPLC-DAD方法建立10個(gè)產(chǎn)地款冬花生品及其不同炮制品的指紋圖譜,運(yùn)用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)、CA及PCA等方法,綜合分析款冬花不同炮制品的質(zhì)量,并研究其成分變化規(guī)律。3.采用氨水引咳試驗(yàn),對(duì)款冬花不同炮制品作用的昆明種小鼠進(jìn)行咳嗽次數(shù)及咳嗽潛伏期的對(duì)比研究。4.選用昆明種小鼠為研究對(duì)象,通過測(cè)定款冬花生品、蜜炙品及甘草炙品作用后小鼠肝臟指數(shù)、血清AKP、GOT、GPT活力及小鼠肝組織炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平,以確定不同炮制品對(duì)小鼠肝臟毒性的影響程度。5.對(duì)不同炮制品進(jìn)行體外肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn),以抑制率為檢測(cè)指標(biāo),分析不同炮制品在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)肝細(xì)胞的作用。結(jié)果1.蜜炙款冬花最佳炮制工藝條件為:取款冬花生品,加入生品量20%的蜜水,在100℃下炒制9 min;甘草炙款冬花最佳炮制工藝條件為:取款冬花生品,加入生品量40%的甘草汁,在120℃下炒制9 min。2.建立了不同產(chǎn)地款冬花及其不同炮制品的共有模式,款冬花生品的相似度為0.867~0.991,蜜炙品為0.785~0.979,甘草炙品為0.785~0.980。CA將不同炮制品均分為4類,與相似度評(píng)價(jià)結(jié)果基本一致,表明不同產(chǎn)地間款冬花炮制品具有一定的相似性和穩(wěn)定性。PCA篩選出方差累計(jì)值達(dá)74.230%的2個(gè)主成分,并得到與之相關(guān)的成分群,同時(shí)不同產(chǎn)地炮制品的綜合得分情況表明,該成分群在生品、蜜炙品及甘草炙品中穩(wěn)定存在。3.生品高劑量組,蜜炙品、甘草炙品不同劑量組均表現(xiàn)出與陽(yáng)性組相近的止咳療效;其中蜜炙品、甘草炙品不同劑量組止咳效果明顯優(yōu)于相應(yīng)的生品不同劑量組,尤其以蜜炙品高劑量組止咳效果最佳。陽(yáng)性組,生品、蜜炙品、甘草炙品不同劑量組均有延長(zhǎng)小鼠咳嗽潛伏期的效果,其中蜜炙品、甘草炙品不同劑量組效果與陽(yáng)性組相近,均優(yōu)于生品不同劑量組。4.款冬花生品及不同炮制品給藥的小鼠肝重指數(shù)及血清中AKP數(shù)值相當(dāng),且均與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㧐0.05)。通過對(duì)血清GOT數(shù)據(jù)進(jìn)行分析表明:生品低劑量組、蜜炙品低劑量組無肝毒性;甘草炙品中劑量組有一定毒性,但毒性較小;蜜炙品高劑量組、甘草炙品高劑量組毒性較大。血清GPT數(shù)據(jù)中,蜜炙品中劑量組無毒;生品低劑量組毒性較小。綜合血清生化數(shù)據(jù)僅蜜炙品低、中劑量組表現(xiàn)出減毒效果�？疃ú煌谥破方o藥的小鼠肝組織IL-1β、IL-6、TNF-α值均增大,其中生品高劑量組與蜜炙品不同劑量組給藥的小鼠肝組織IL-1β值相對(duì)較大;蜜炙品不同劑量組,甘草炙品低、中劑量組給藥的小鼠肝組織IL-6值相對(duì)較大;生品中、高劑量組,蜜炙品低、中劑量組給藥的小鼠肝組織TNF-α值相對(duì)較大。5.通過數(shù)據(jù)分析得到原藥液中生物堿部位IC50值分別為:生品0.2996 mg·g~(-1),蜜炙品0.2217 mg·g~(-1),甘草炙品0.3828 mg·g~(-1),因此,各炮制品對(duì)肝細(xì)胞的抑制率結(jié)果為:蜜炙品㧐生品㧐甘草炙品。結(jié)論本研究采用對(duì)比分析方式對(duì)款冬花炮制工藝、炮制前后成分變化及炮制后止咳藥效、總生物堿部位體內(nèi)外毒性做了綜合分析,使款冬花炮制機(jī)理更加明確,同時(shí)擴(kuò)大了款冬花炮制品種,從工藝優(yōu)化、質(zhì)量評(píng)價(jià)到功效驗(yàn)證,為甘草炙款冬花的應(yīng)用提供了支撐。
【圖文】：

4t/min圖 1-1 對(duì)照品（A）、生品（B）、蜜炙品（C）和甘草炙品（D）HPLC 圖1.綠原酸；2.蘆丁；3.金絲桃苷；4.異綠原酸 B；5.異綠原酸 A；6.異綠原酸 C；7.款冬酮

2.4.4 成分推斷以上述色譜條件及質(zhì)譜條件對(duì)生品、蜜炙品、甘草炙品進(jìn)行分析，得到相應(yīng)的總離子流圖，以甘草炙品為例見圖1-2，，查閱資料得腎形千里光堿的分子量為365.42，以質(zhì)荷比 365.50~366.50 進(jìn)行單個(gè)離子的提取，結(jié)果見圖 1-3。結(jié)果顯示在生品、蜜炙品及甘草炙品中均含有腎形千里光堿，而其余生物堿類型在總生物堿部位沒有提取到，表明總生物堿部位成分以腎形千里光堿為主。表 1-2 梯度洗脫條件時(shí)間（min） 0.1% 甲酸（%） 乙腈（%）0 90 101 85 152 80 204 78 226 25 7511 5 9513 5 9514 90 1015 90 10
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R283

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2640417