【摘要】：本課題在前期的化學(xué)、藥效學(xué)及藥動(dòng)學(xué)研究基礎(chǔ)上,以體內(nèi)次生代謝產(chǎn)物為著眼點(diǎn),采用LC-MS技術(shù),對(duì)各成分體內(nèi)代謝行為進(jìn)行探索,深入探討類葉牡丹有效部位化學(xué)成分的體內(nèi)質(zhì)變代謝。通過(guò)大鼠口服類葉牡丹有效部位后,收集不同時(shí)間點(diǎn)的血液、膽汁、尿液及糞便生物樣本,利用化學(xué)、色譜手段結(jié)合質(zhì)譜準(zhǔn)確定性進(jìn)行分析,鑒定類葉牡丹有效部位在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物,推測(cè)其在體內(nèi)可能的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程,同時(shí)闡述這些代謝產(chǎn)物的代謝轉(zhuǎn)化途徑,最終希望達(dá)到能夠解釋類葉牡丹有效部位獨(dú)特作用機(jī)制的目的。為探討類葉牡丹抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)有效部位的體內(nèi)轉(zhuǎn)化規(guī)律,本文以類葉牡丹中主要成分三萜皂苷和生物堿為研究對(duì)象,對(duì)有效部位中四種皂苷和二種生物堿成分大鼠體內(nèi)代謝的行為進(jìn)行了推測(cè)。首先通過(guò)負(fù)離子模式,對(duì)三萜皂苷和生物堿類化合物的質(zhì)譜裂解行為進(jìn)行了系統(tǒng)的分析研究;其次對(duì)其體內(nèi)的藥物效應(yīng)活性物質(zhì)的代謝機(jī)理、代謝過(guò)程進(jìn)行了探討,將化合物的質(zhì)譜裂解行為與可能的代謝特征相結(jié)合,運(yùn)用特征離子提取的有效方法,實(shí)現(xiàn)從復(fù)雜生物樣本中對(duì)原型成分和代謝產(chǎn)物的快速篩選和識(shí)別;最終闡明類葉牡丹抗RA有效部位三萜皂苷和生物堿類成分在大鼠體內(nèi)作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。本文主要包括以下研究?jī)?nèi)容:(1)三萜皂苷和生物堿類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律研究根據(jù)類葉牡丹中化合物的結(jié)構(gòu)特征,推測(cè)各類成分的裂解行為。在負(fù)離子模式下,Cauloside C產(chǎn)生m/z 765、603和471等特征碎片離子;Cauloside D產(chǎn)生m/z 1073、765、603和469等特征碎片離子;LeonticinD由于含有一個(gè)側(cè)位羥基,所以會(huì)產(chǎn)生 m/z 1089、927、619 和 469 等特征離子碎片;Cauloside H 產(chǎn)生 m/z 1251、781、763、619、469等特征碎片離子;Magnoflorine通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生m/z 325、310甲基鍵裂解碎片離子、m/z 322脫水離子碎片以及損失45Da胺基形成的m/z 295特征離子等;Caulophylline B質(zhì)譜數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生m/z 327、312甲基鍵裂解碎片離子以及損失45 Da胺基形成的m/z 297 特征離子等。類葉牡丹中存在很多結(jié)構(gòu)相近的成分,可能質(zhì)譜裂解行為也存在相似的特征。(2)類葉牡丹有效部位中三萜皂苷類成分的體內(nèi)代謝研究本章采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),通過(guò)對(duì)灌胃給藥大鼠不同采樣時(shí)間點(diǎn)的生物樣本進(jìn)行分析,從復(fù)雜的生物樣品中快速發(fā)掘藥物的代謝信息,發(fā)現(xiàn)并推斷原型成分和代謝產(chǎn)物的可能結(jié)構(gòu)。在大鼠血漿中發(fā)現(xiàn)7種原型成分及8個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去糖基產(chǎn)物、皂苷元產(chǎn)物、甘氨酸結(jié)合物等;在膽汁中未發(fā)現(xiàn)原型成分,發(fā)現(xiàn)6個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去糖基產(chǎn)物、硫化物及葡萄糖醛酸結(jié)合物等;在尿液中發(fā)現(xiàn)5種原型成分和8個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去糖基產(chǎn)物、皂苷元產(chǎn)物、硫化物及葡萄糖醛酸結(jié)合物等;在糞便中發(fā)現(xiàn)4種原型成分和9個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去糖基產(chǎn)物、皂苷元產(chǎn)物、硫化物及葡萄糖醛酸結(jié)合物等。綜上,在這些不同的生物樣品中均有相同的代謝產(chǎn)物發(fā)現(xiàn),提示去糖基、羥化、葡萄糖醛酸化、硫酸化和甘氨酸結(jié)合等可能是三萜皂苷類成分在大鼠體內(nèi)的重要代謝途徑。(3)類葉牡丹有效部位生物堿類成分的大鼠體內(nèi)代謝研究本章采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù),通過(guò)對(duì)比含藥生物樣品和空白生物樣品進(jìn)行分析,在大鼠的血漿中發(fā)現(xiàn)3種原型成分及8個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去甲基、羥化產(chǎn)物等;在膽汁中發(fā)現(xiàn)4種原型及6個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去甲基、羥化及硫化產(chǎn)物等;在尿液中發(fā)現(xiàn)3種原型成分及5個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去甲基、羥化及甲基化產(chǎn)物等;在糞便中發(fā)現(xiàn)3種原型成分及5個(gè)代謝產(chǎn)物,包括去甲基、甲基化產(chǎn)物等。綜上,在這些不同的生物樣品中均有相同的代謝產(chǎn)物發(fā)現(xiàn),提示去甲基、羥化、硫化及甲基化等可能是生物堿類成分在大鼠體內(nèi)的重要代謝途徑。本研究推測(cè)了類葉牡丹有效部位大鼠體內(nèi)成分的代謝特征規(guī)律,獲得了類葉牡丹抗RA有效部位生物轉(zhuǎn)化的整體信息,對(duì)于提高中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究效率及活性成分發(fā)現(xiàn)等提供了有效的研究思路。本研究明確了類葉牡丹有效部位中主要活性成分的代謝途徑,進(jìn)一步闡明類葉牡丹抗RA藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為新的藥效成分的發(fā)現(xiàn)提供了科學(xué)資料。
【圖文】：

Ｆｉｇ．２－１邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ邋ｆｏｒｍｕｌａ邋ｏｆ邋Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｃ逡逑Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｃ是一個(gè)具有常春藤皂苷元的單糖鏈二糖結(jié)構(gòu)的三萜皂苷，其中３－０－逡逑糖鏈為Ｇｌｃ（ｉ—２）Ａｒａ－，分子量７６６，分子結(jié)構(gòu)式為Ｃ４｜Ｈ６６0ｉ３，見(jiàn)圖２－１。逡逑在負(fù)離子模式下，一級(jí)質(zhì)譜Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｃ產(chǎn)生ｍ／ｚ邋８１１．４５邋［Ｍ＋ＨＣ００Ｈ－Ｈ］—和逡逑７６５．４４［Ｍ－Ｈ］＿分子離子峰及６０３．３９［Ｍ－Ｇｌｃ－Ｈ］＿。在實(shí)驗(yàn)的低碰撞能量下，ｍ／ｚ邋７６５．４４逡逑［Ｍ－Ｈｒ的二級(jí)質(zhì)譜３－０－糖鏈上首先失去１６２邋Ｄａ的葡萄糖糖基，產(chǎn)生特征性質(zhì)譜碎片逡逑離子ｍ／ｚ邋６０３．３９；邋ｍ／ｚ邋６０３．３９繼續(xù)失去１３２邋Ｄａ的阿拉伯糖基形成ｍ／ｚ邋４７１．３５的阜苷元逡逑碎片離子。因此，Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｃ的一級(jí)特征質(zhì)譜會(huì)出現(xiàn)ｍ／ｚ邋８１１．４５、７６５．４４、６０３．３９的逡逑離子峰；而其ｍ／ｚ邋７６５．４４［Ｍ－Ｈ］＿的二級(jí)質(zhì)譜特征碎片離子表現(xiàn)為ｍ／ｚ邋６０３．３９、４７１．３５。逡逑其質(zhì)譜信息及裂解行為見(jiàn)圖２－２，邋２－３。逡逑＾邐－ｅ；．４，邋３１１．．４ＥＭＬ：４．２４Ｅｅ邐■邐＾：９

圖邋２－４邋Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｄ邋結(jié)構(gòu)式逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ邋ｆｏｍｉｕｌａ邋ｏｆ邋Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｄ逡逑Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｄ是一個(gè)具有常春藤皂苷元的雙糖鏈四糖結(jié)構(gòu)的三萜皂苷，其中３－０－逡逑糖鏈為Ａｒａ－，２８－０－糖鏈為Ｒｈａ（ｉ邋—邋４）Ｇｌｃ（ｌ—６）Ｇｌｃ－，分子量為１０７４，，分子結(jié)構(gòu)式為逡逑Ｃ５３Ｈ８６0２２．見(jiàn)圖邋２－４。逡逑在負(fù)離子模式下，一級(jí)質(zhì)譜Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｄ產(chǎn)生ｍ／ｚ邋１１１９．５８［Ｍ＋ＨＣＯＯＨ－Ｈ］－、逡逑１０７３．５７［Ｍ－Ｈ］＿邋分子離子峰及邋７６５．４５［Ｍ－Ｒｈａ－Ｇｌｃ－Ｈ］—、６０３．３９［Ｍ－Ｒｈａ－Ｇｌｃ－Ｇｌｃ－Ｈ］－。在實(shí)逡逑驗(yàn)的低碰撞能量下，ｍ／ｚ邋１０７３．５７邋［Ｍ－Ｈｆ的二級(jí)質(zhì)譜Ｃ－２８位酯苷鍵發(fā)生斷裂，產(chǎn)生特逡逑征性質(zhì)譜離子碎片ｍ／ｚ邋６０３．３９邋；邋ｍ／ｚ邋４６９．丨６碎片離子為２８－０－脫掉的糖鏈逡逑Ｒｈａ（ｌ—４）Ｇｌｃ（ｉ—６）Ｇｌｃ－去質(zhì)子碎片。因此，Ｃａｕｌｏｓｉｄｅ邋Ｄ的一級(jí)特征質(zhì)譜會(huì)出現(xiàn)ｍ／ｚ逡逑１１１９．５８、１０７３．５７、７６５．４５、６０３．３９邋的離子峰；而其邋ｍ／ｚｌ２５１．６３［Ｍ－Ｈ］－的二級(jí)質(zhì)譜特征逡逑離子碎片表現(xiàn)為ｍ／ｚ邋６０３．３９、４６９．１６碎片。質(zhì)譜信息及裂解行為見(jiàn)圖２－５，邋２－６。逡逑心邐”…遍邐，0＂邐ＮＬ：８．}0逡逑
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2639772