【摘要】：研究目的:1.小檗堿能否緩解結(jié)腸癌進(jìn)程中腸粘膜通透性增高;2.結(jié)腸癌進(jìn)程中是否存在腫瘤細(xì)胞對(duì)腸粘膜多胺的掠奪;3.結(jié)腸癌進(jìn)程中,小檗堿是否通過(guò)調(diào)節(jié)多胺機(jī)制達(dá)到對(duì)腸粘膜損傷的修復(fù)作用。研究方法:1.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)移植瘤生長(zhǎng)的影響。建立荷瘤鼠(HCT116)模型,根據(jù)SPSS分組法隨機(jī)分成正常組、模型組、小檗堿低劑量組(6.25 mg/kg)、小檗堿中劑量組(12.5 mg/kg)及小檗堿高劑量組(25 mg/kg),觀(guān)察裸鼠日常生命體征與進(jìn)食等情況并記錄。通過(guò)對(duì)給藥期間裸鼠腫瘤體積的測(cè)量、給藥結(jié)束后瘤重及抑瘤率的測(cè)定、結(jié)合荷瘤鼠體重變化曲線(xiàn),評(píng)價(jià)小檗堿對(duì)裸鼠結(jié)腸癌移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用。2.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜通透性的影響。通過(guò)對(duì)荷瘤鼠血漿D-乳酸含量的測(cè)定、腸粘膜HE染色病理切片的觀(guān)察、瘤重與血漿D-乳酸相關(guān)性分析、腸粘膜緊密連接蛋白ZO1,Occludin的蛋白表達(dá),觀(guān)察小檗堿對(duì)荷瘤鼠腸粘膜通透性的影響。3.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究。(1)小檗堿對(duì)HCT116及IEC6共培養(yǎng)體系中多胺含量的影響:采用CCK8法測(cè)定小檗堿對(duì)HCT116細(xì)胞增殖抑制作用,確定小檗堿劑量及最佳作用時(shí)間;進(jìn)行IEC6細(xì)胞單培養(yǎng)(24 h,48 h,72 h)及不同時(shí)間點(diǎn)(24 h,48 h,72 h)的HCT116細(xì)胞與IEC6細(xì)胞共培養(yǎng)2,觀(guān)察IEC6細(xì)胞通透性(FD4濃度)的變化;HCT116細(xì)胞與IEC6細(xì)胞共培養(yǎng)后,采用高效液色譜法分別測(cè)定兩種細(xì)胞多胺含量。(2)小檗堿對(duì)HCT116荷瘤鼠腸粘膜多胺含量、腫瘤多胺含量及多胺代謝蛋白表達(dá)的影響:采用高效液相色譜法測(cè)定腸粘膜及腫瘤多胺含量,采用WB法觀(guān)察小檗堿給藥后腫瘤組織多胺代謝相關(guān)蛋白ODC、OAZ1、SSAT、C-MYC、HIF-1α的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)移植瘤生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明:模型組裸鼠腫瘤體積增長(zhǎng)最快,與模型組相比,給藥組腫瘤體積增長(zhǎng)緩慢;解剖后稱(chēng)定瘤重,模型組瘤重明顯高于給藥組;計(jì)算抑瘤率后,給藥組低、中、高劑量組,抑瘤率分別為20.9%、33.7%、42.2%;在作出荷瘤鼠體重變化曲線(xiàn)后發(fā)現(xiàn),正常組體重明顯高于給藥組及模型組,其中,模型組最低,且在第三周,給藥組及模型組體重均出現(xiàn)小幅度下降,可能表現(xiàn)為癌性營(yíng)養(yǎng)不良。2.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜通透性的影響。結(jié)果表明:正常組血漿D-乳酸濃度最低,與正常組比較,模型組及給藥組均較高,其中,模型組最高;通過(guò)腸粘膜病理切片發(fā)現(xiàn),模型組腸粘膜屏障被破壞嚴(yán)重,與模型組相比,給藥組腸粘膜損傷得到明顯修復(fù);在計(jì)算血漿D-乳酸與瘤重相關(guān)性曲線(xiàn)中,發(fā)現(xiàn)血漿D-乳酸與腫瘤負(fù)荷關(guān)系密切且呈正相關(guān)(P0.001);緊密連接蛋白ZO1,Occludin的結(jié)果表明,與正常組相比,模型組緊密連接蛋白下調(diào),與模型組相比,給藥后緊密連接蛋白表達(dá)上調(diào)。3.小檗堿對(duì)荷瘤鼠(HCT116)腸粘膜損傷的修復(fù)作用機(jī)制研究。(1)小檗堿對(duì)HCT116及IEC6共培養(yǎng)體系中多胺含量的影響:CCK8數(shù)據(jù)表明,小檗堿(0-50μM)對(duì)HCT116細(xì)胞有抑制作用,且72 h效果最好,48 h次之;HCT116細(xì)胞與IEC6細(xì)胞共培養(yǎng),通過(guò)測(cè)定IEC6的FD4濃度,得知48 h是最佳共培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn);在對(duì)共培養(yǎng)后HCT116,IEC6細(xì)胞多胺含量的測(cè)定中,結(jié)果為H_(co)H_(co給藥)H_單,I_單Ico_(給藥)Ico;(2)小檗堿對(duì)HCT116荷瘤鼠腸粘膜多胺含量、腫瘤多胺含量及多胺代謝蛋白表達(dá)的影響:對(duì)腸粘膜多胺含量的測(cè)定,與正常組相比,模型組總多胺濃度較低,與模型組相比,給藥組總多胺含量增加,且隨給藥濃度增大,多胺含量增加明顯;對(duì)腫瘤組織總多胺含量的測(cè)定,與模型組相比,給藥組總多胺下降明顯,且給藥組中高劑量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),腫瘤多胺代謝相關(guān)蛋白表達(dá)為C-MYC,ODC下調(diào),OAZ1上調(diào),SSAT上調(diào),HIF-1α上調(diào)。研究結(jié)論:1.小檗堿對(duì)結(jié)腸癌進(jìn)程中腸粘膜通透性增高有緩解作用;2.結(jié)腸癌進(jìn)程中存在腫瘤細(xì)胞對(duì)腸粘膜多胺的掠奪;3.結(jié)腸癌進(jìn)程中,小檗堿可通過(guò)多胺機(jī)制達(dá)到對(duì)腸粘膜損傷的修復(fù)作用。
【圖文】：

統(tǒng)計(jì)分析方法驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，采用單因素方差分析GraphPad Prism5.0 軟件分析，以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜有極顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。驗(yàn)結(jié)果小檗堿對(duì)荷瘤鼠腫瘤體積的影響驗(yàn)分為正常組（正常裸鼠，無(wú)移植瘤，生理鹽水），模型組（生理低劑量（6.25 mg/kg），小檗堿中劑量（12.5 mg/kg），小檗堿高劑）。給藥過(guò)程中，隔天測(cè)量腫瘤大小，，如圖 2-1 所示，模型組腫瘤，與模型組相比，給藥組腫瘤體積增長(zhǎng)緩慢，表明小檗堿有抑制腫。

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文荷瘤鼠腫瘤瘤重的影響法已確認(rèn)造模成功，給藥結(jié)束后立即處死裸鼠，剝下腫瘤如圖 2-2 所示，肉眼可見(jiàn)小檗堿給藥組腫瘤小于模型組，較為明顯。如圖 2-3 所示，模型組腫瘤組織重量 0.92±0.35，12.5，25 mg/kg）分別為 0.72±0.23 g，0.61±0.31 g，0.5知，與模型組相比，給藥組瘤重明顯低于模型組，其中小計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2636562