【摘要】：精索靜脈曲張(Varicocele,VC)是一種血管病變,指精索內(nèi)蔓狀靜脈叢的異常擴(kuò)張、伸長和迂曲,可導(dǎo)致疼痛不適及進(jìn)行性睪丸功能減退,是男性不育癥的常見誘因之一。近年來研究表明生殖激素的調(diào)控及細(xì)胞凋亡對生精細(xì)胞的影響是VC誘發(fā)生精功能障礙的重要因素。臨床上運(yùn)用通脈方治療VC性不育癥取得較好療效,可有效改善因VC引起的精液質(zhì)量下降。為進(jìn)一步探究通脈方治療VC的機(jī)制,開展本實(shí)驗(yàn)研究。目的:探究通脈方對VC大鼠血清激素水平的調(diào)節(jié)及生精細(xì)胞凋亡的調(diào)控,評價通脈方對VC模型大鼠睪丸生精功能的修復(fù)作用。方法:先將72只7周SD雄性大鼠隨機(jī)分為空白對照組12只和造模組60只,參考Turner經(jīng)典造模法,并運(yùn)用顯微外科器械結(jié)扎性腺靜脈,減少側(cè)支循環(huán)建立VC模型。術(shù)后30d,再將造模組大鼠隨機(jī)分為5組:模型對照組、邁之靈組、通脈方低劑量組、通脈方中劑量組和通脈方高劑量組,每組各12只。分組后開始對各組大鼠灌胃給藥,給藥體積為1mL/100g體重。邁之靈組大鼠灌胃給予邁之靈水溶液,給藥劑量為5.4mg/kg體重,相當(dāng)于臨床用藥劑量;通脈方低劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為5.45g/kg體重,相當(dāng)于臨床用藥劑量1/2;通脈方中劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為10.89g/kg體重,相當(dāng)于臨床用藥劑量;通脈方高劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為21.78g/kg,體重相當(dāng)于臨床用藥劑量2倍。模型對照組、空白對照組按上法灌服等體積的蒸餾水,每日給藥一次,共48d。藥物干預(yù)48d后,將大鼠麻醉,下腔靜脈取血,采用放射免疫法測定大鼠血清黃體生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)及睪酮(T)濃度。將雙側(cè)附睪組織剪碎,游離出精液,采用WLJY-9000北京偉力彩色精子質(zhì)量檢測系統(tǒng)對大鼠精液進(jìn)行分析。將睪丸剪成兩半,一半進(jìn)行HE染色觀察病理學(xué)改變及免疫組化檢測 Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表達(dá),另一半用于 WesternBlot檢測Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表達(dá)。結(jié)果:(1)HE染色結(jié)果空白對照組:曲細(xì)精管邊界整齊,未見萎縮和塌陷。間質(zhì)細(xì)胞未見增生,生精小管之間連接緊密,基底膜完整;支持結(jié)構(gòu)豐富,管腔中可見大量成熟精子;模型對照組:睪丸組織可見曲細(xì)精管排列紊亂,生精上皮細(xì)胞脫落變性,精子少見;間質(zhì)水腫,間質(zhì)細(xì)胞增生;間質(zhì)小血管充血,管壁增厚明顯,管腔狹窄;通脈方低劑量組:曲細(xì)精管排列較有序規(guī)整,大小較一致;少量生精上皮細(xì)胞脫落變性,精子可見;間質(zhì)細(xì)胞增生,間質(zhì)水腫,間質(zhì)小血管偶見充血;通脈方中劑量組:曲細(xì)精管排列有序規(guī)整,邊界整齊,可見各級生精上皮細(xì)胞,精子可見;少見間質(zhì)細(xì)胞增生及間質(zhì)水腫,管壁增厚不明顯;通脈方高劑量組:曲細(xì)精管排列有序規(guī)整,大小較一致,見各級生精上皮細(xì)胞,管腔有大量精子;少見間質(zhì)水腫及間質(zhì)細(xì)胞增生;邁之靈組:曲細(xì)精管排列有序規(guī)整,大小較一致,精子少見;未見間質(zhì)水腫,未見間質(zhì)細(xì)胞增生。(2)精子濃度分析表明:與空白對照組比較,模型對照組精子濃度顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組精子濃度顯著改善(P0.05)。(3)精子總活力分析表明:與空白對照組比較,模型對照組精子總活力明顯降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組精子總活力顯著提高(P0.05),邁之靈組精子總活力改善不明顯(P0.05)。表明通脈方可改善精子總活力,效果優(yōu)于邁之靈。(4)血清FSH檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組FSH分泌顯著上升(P0.05);與模型對照組比較,通脈方低劑量組、通脈方中劑量組FSH分泌顯著下降(P0.05)。(5)血清LH檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組LH分泌顯著增高(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組LH分泌顯著降低(P0.05)。(6)血清T檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組T分泌顯著下降(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組T分泌顯著增高(P0.05)。(7)睪丸組織Hsp60檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組Hsp60表達(dá)顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組、邁之靈組Hsp60表達(dá)顯著增高(P0.05),表明各劑量組通脈方與邁之靈均可上調(diào)Hsp60。(8)睪丸組織Hsp90檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Hsp90表達(dá)顯著下降(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組、邁之靈組Hsp90表達(dá)顯著增強(qiáng)(P0.05),表明各劑量組通脈方與邁之靈均可上調(diào)Hsp90的表達(dá)。(9)睪丸組織Bax檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Bax表達(dá)顯著增高(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組與邁之靈組Bax表達(dá)顯著降低(P0.05),表明各劑量組通脈方及邁之靈均可下調(diào)Bax的表達(dá)。(10)睪丸組織Bcl-2檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Bcl-2表達(dá)顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組與邁之靈組大鼠睪丸組織Bcl-2表達(dá)顯著增高(P0.05),表明各劑量組通脈方及邁之靈均可顯著上調(diào)Bcl-2表達(dá)。結(jié)論:通脈方修復(fù)VC大鼠生精功能的機(jī)制可能為抑制睪丸生精細(xì)胞凋亡,其抑制生精細(xì)胞凋亡的機(jī)制為上調(diào)Hsp60、上調(diào)Hsp90和下調(diào)Bax、上調(diào)Bcl-2的表達(dá),調(diào)控生殖激素分泌,從而保護(hù)睪丸生精功能,改善精子質(zhì)量。通脈方可顯著改善精子質(zhì)量,療效顯著優(yōu)于邁之靈。
【圖文】：

各組大鼠附辜精子濃度

圖５．各組大鼠血清ＦＳＨ表達(dá)情況逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2635528