通脈方對精索靜脈曲張大鼠生殖激素及睪丸生精細胞凋亡的干預研究

發(fā)布時間：2020-04-21 07:33

【摘要】：精索靜脈曲張(Varicocele,VC)是一種血管病變,指精索內(nèi)蔓狀靜脈叢的異常擴張、伸長和迂曲,可導致疼痛不適及進行性睪丸功能減退,是男性不育癥的常見誘因之一。近年來研究表明生殖激素的調(diào)控及細胞凋亡對生精細胞的影響是VC誘發(fā)生精功能障礙的重要因素。臨床上運用通脈方治療VC性不育癥取得較好療效,可有效改善因VC引起的精液質(zhì)量下降。為進一步探究通脈方治療VC的機制,開展本實驗研究。目的:探究通脈方對VC大鼠血清激素水平的調(diào)節(jié)及生精細胞凋亡的調(diào)控,評價通脈方對VC模型大鼠睪丸生精功能的修復作用。方法:先將72只7周SD雄性大鼠隨機分為空白對照組12只和造模組60只,參考Turner經(jīng)典造模法,并運用顯微外科器械結(jié)扎性腺靜脈,減少側(cè)支循環(huán)建立VC模型。術后30d,再將造模組大鼠隨機分為5組:模型對照組、邁之靈組、通脈方低劑量組、通脈方中劑量組和通脈方高劑量組,每組各12只。分組后開始對各組大鼠灌胃給藥,給藥體積為1mL/100g體重。邁之靈組大鼠灌胃給予邁之靈水溶液,給藥劑量為5.4mg/kg體重,相當于臨床用藥劑量;通脈方低劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為5.45g/kg體重,相當于臨床用藥劑量1/2;通脈方中劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為10.89g/kg體重,相當于臨床用藥劑量;通脈方高劑量組大鼠灌胃給予通脈方水煎液,給藥劑量為21.78g/kg,體重相當于臨床用藥劑量2倍。模型對照組、空白對照組按上法灌服等體積的蒸餾水,每日給藥一次,共48d。藥物干預48d后,將大鼠麻醉,下腔靜脈取血,采用放射免疫法測定大鼠血清黃體生成激素(LH)、促卵泡激素(FSH)及睪酮(T)濃度。將雙側(cè)附睪組織剪碎,游離出精液,采用WLJY-9000北京偉力彩色精子質(zhì)量檢測系統(tǒng)對大鼠精液進行分析。將睪丸剪成兩半,一半進行HE染色觀察病理學改變及免疫組化檢測 Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表達,另一半用于 WesternBlot檢測Bax、Bcl-2、Hsp60、Hsp90 的表達。結(jié)果:(1)HE染色結(jié)果空白對照組:曲細精管邊界整齊,未見萎縮和塌陷。間質(zhì)細胞未見增生,生精小管之間連接緊密,基底膜完整;支持結(jié)構(gòu)豐富,管腔中可見大量成熟精子;模型對照組:睪丸組織可見曲細精管排列紊亂,生精上皮細胞脫落變性,精子少見;間質(zhì)水腫,間質(zhì)細胞增生;間質(zhì)小血管充血,管壁增厚明顯,管腔狹窄;通脈方低劑量組:曲細精管排列較有序規(guī)整,大小較一致;少量生精上皮細胞脫落變性,精子可見;間質(zhì)細胞增生,間質(zhì)水腫,間質(zhì)小血管偶見充血;通脈方中劑量組:曲細精管排列有序規(guī)整,邊界整齊,可見各級生精上皮細胞,精子可見;少見間質(zhì)細胞增生及間質(zhì)水腫,管壁增厚不明顯;通脈方高劑量組:曲細精管排列有序規(guī)整,大小較一致,見各級生精上皮細胞,管腔有大量精子;少見間質(zhì)水腫及間質(zhì)細胞增生;邁之靈組:曲細精管排列有序規(guī)整,大小較一致,精子少見;未見間質(zhì)水腫,未見間質(zhì)細胞增生。(2)精子濃度分析表明:與空白對照組比較,模型對照組精子濃度顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組精子濃度顯著改善(P0.05)。(3)精子總活力分析表明:與空白對照組比較,模型對照組精子總活力明顯降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組精子總活力顯著提高(P0.05),邁之靈組精子總活力改善不明顯(P0.05)。表明通脈方可改善精子總活力,效果優(yōu)于邁之靈。(4)血清FSH檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組FSH分泌顯著上升(P0.05);與模型對照組比較,通脈方低劑量組、通脈方中劑量組FSH分泌顯著下降(P0.05)。(5)血清LH檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組LH分泌顯著增高(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組LH分泌顯著降低(P0.05)。(6)血清T檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組T分泌顯著下降(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組T分泌顯著增高(P0.05)。(7)睪丸組織Hsp60檢測表明:與空白對照組比較,模型對照組Hsp60表達顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組、邁之靈組Hsp60表達顯著增高(P0.05),表明各劑量組通脈方與邁之靈均可上調(diào)Hsp60。(8)睪丸組織Hsp90檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Hsp90表達顯著下降(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組、邁之靈組Hsp90表達顯著增強(P0.05),表明各劑量組通脈方與邁之靈均可上調(diào)Hsp90的表達。(9)睪丸組織Bax檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Bax表達顯著增高(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組與邁之靈組Bax表達顯著降低(P0.05),表明各劑量組通脈方及邁之靈均可下調(diào)Bax的表達。(10)睪丸組織Bcl-2檢測顯示:與空白對照組比較,模型對照組Bcl-2表達顯著降低(P0.05);與模型對照組比較,通脈方各劑量組與邁之靈組大鼠睪丸組織Bcl-2表達顯著增高(P0.05),表明各劑量組通脈方及邁之靈均可顯著上調(diào)Bcl-2表達。結(jié)論:通脈方修復VC大鼠生精功能的機制可能為抑制睪丸生精細胞凋亡,其抑制生精細胞凋亡的機制為上調(diào)Hsp60、上調(diào)Hsp90和下調(diào)Bax、上調(diào)Bcl-2的表達,調(diào)控生殖激素分泌,從而保護睪丸生精功能,改善精子質(zhì)量。通脈方可顯著改善精子質(zhì)量,療效顯著優(yōu)于邁之靈。
【圖文】：

精子,大鼠