【摘要】：目的通過(guò)積雪草酸(Asiatic acid,AA)對(duì)人舌鱗癌Tca8113細(xì)胞增殖、凋亡、遷移作用的影響及小鼠移植瘤模型的影響探討其體內(nèi)外抗舌癌的作用及其抗腫瘤機(jī)制。方法1、用MTT法檢測(cè)不同濃度的AA對(duì)Tca8113細(xì)胞的增殖抑制作用,根據(jù)結(jié)果篩出合適的藥物濃度及時(shí)間用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2、利用集落形成實(shí)驗(yàn)觀察AA對(duì)Tca8113細(xì)胞克隆形成的影響。3、通過(guò)Hoechst 33342染色觀察AA對(duì)細(xì)胞凋亡形態(tài)的影響,進(jìn)一步用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率情況。4、用流式細(xì)胞術(shù)分析AA對(duì)Tca8113細(xì)胞周期分布的情況。5、通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AA對(duì)Tca8113細(xì)胞遷移變化的影響。6.、通過(guò)Western blot法檢測(cè)AA對(duì)Tca8113細(xì)胞中細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、p53、p21及細(xì)胞遷移相關(guān)蛋白N-Cadherin、E-Cadherin、Vimentin表達(dá)情況的影響。7、通過(guò)比較人舌鱗狀細(xì)胞癌異種移植瘤模型,觀察AA對(duì)小鼠舌鱗癌移植瘤的抑制作用,采用TUNEL法分析AA對(duì)腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果1、AA能夠有效的抑制Tca8113細(xì)胞的增殖且具有劑量依賴性,其24h的IC_(50)值為42.13μmol·L~(-1)(P0.05)。2、AA能抑制Tca8113細(xì)胞克隆的形成(P0.05)。3、與對(duì)照組相比,AA處理組凋亡細(xì)胞數(shù)和凋亡率均升高(P0.05)。4、AA處理后細(xì)胞周期逐漸阻滯在G_2/M期(P0.05)。5、與對(duì)照組相比,AA處理組其細(xì)胞遷移愈合能力降低(P0.05)。6、Western blot結(jié)果顯示:Tca8113細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)量降低,Bax、cleaved capase-3和p53、p21表達(dá)量升高;同時(shí)遷移相關(guān)蛋白E-cadherin表達(dá)增加,而N-cadherin、Vimentin表達(dá)呈劑量依賴性降低(P0.05)。7、AA抑制裸鼠舌鱗狀細(xì)胞癌移植瘤的生長(zhǎng),同時(shí)促進(jìn)腫瘤組織中癌細(xì)胞凋亡(P0.05)。結(jié)論AA能抑制舌鱗癌Tca8113細(xì)胞的增殖及遷移,能誘導(dǎo)舌鱗癌Tca8113細(xì)胞凋亡,以上作用與AA呈一定濃度依賴性,其促凋亡機(jī)制可能與p53相關(guān)通路有關(guān),其對(duì)遷移的抑制可能與調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變(Epithelial to Mesenchymal Transition,EMT)相關(guān)因子有關(guān)。
【圖文】：

圖 1AA 對(duì) Tca-8113 細(xì)胞增殖的影響(x±s，n = 6注:*P <0.05，**P <0.01vs Control Tca8113 細(xì)胞克隆形成能力的影響30、40、50 μmol·L-1濃度的 AA 作用舌鱗癌 1 周后克

圖 2AA 對(duì) Tca-8113 細(xì)胞克隆形成的影響( x±s，n = 3)注：*P <0.05，**P < 0.01vs Control三、AA 對(duì) Tca8113 細(xì)胞凋亡的影響當(dāng) Hoechst33342 染色時(shí)，正常細(xì)胞在熒光顯微鏡下顯示弱藍(lán)光，而凋亡細(xì)
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2634158