【摘要】：目的:本課題復制糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)大鼠模型采用一次性大劑量(60mg·kg-1)對wistar大鼠空腹腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)的方法,觀察當歸紅芪提取物對DN大鼠腎組織的病理改變及DN大鼠腎組織中NF-κB信號通路相關基因和蛋白等的影響,探討當歸紅芪提取物對DN大鼠的作用及產生該作用可能的機制。方法:90只SPF級wistar雄性大鼠,體重160±20g,適應環(huán)境喂養(yǎng)1周,按隨機數字表抽取12只為正常組,剩下的大鼠則采用一次性空腹腹腔注射STZ60mg·kg-1,正常組大鼠注射相等劑量的檸檬酸鈉緩沖液(0.1mol/L),三天之后大鼠尾靜脈采血,如果測得的空腹血糖值≥16.7mmol·L-1,21天之后檢測24h尿蛋白,若該值30mg,就標志著DN造模成功。把造模時體重未達標的大鼠以及沒有達到成模標準的大鼠18只剔除,剩余成模大鼠隨機分為5組:模型組、當歸紅芪高劑量組、當歸紅芪中劑量組、當歸紅芪低劑量組、西藥組,每組為12只。分組后開始灌胃給藥,每日一次,當歸紅芪低、中、高劑量組分別以1.8g·kg-1·d-1、3.6g·kg-1·d-1、7.2g·kg-1·d-1等不同劑量給藥,西藥組以17.5mg·kg-1·d-1劑量予厄貝沙坦灌胃,正常組和模型組用等量的超純水灌胃,持續(xù)給藥8周。所有大鼠均使用常規(guī)飼料飼養(yǎng),提供充足的飼料和水。在給藥的第4周和第8周末,對除正常組外的各組大鼠進行12小時斷食但不斷水的處理,之后檢測大鼠24小時尿蛋白定量;8周末稱大鼠的體重,把大鼠固定在鼠架,股動脈取血;取大鼠雙腎,然后稱腎臟重量,算出大鼠腎肥大指數;甲醛液浸泡、冰凍保存腎臟,用于光鏡下腎臟病理形態(tài)學的觀察,免疫組化法檢測腎組織中NF-κB、TNF-α蛋白的表達;實時熒光定量PCR(qPCR)法檢測腎組織中NF-κB、TNF-αmRNA的表達。結果:1各組大鼠一般情況:正常組大鼠狀態(tài)較好,而DN各組大鼠毛發(fā)粘連晦暗,神情萎靡,易怒,活動度明顯下降,大便稀溏、難成形,進食、飲水量明顯增加,尿量亦增多明顯,體重快速下降。用藥治療后,各組治療組大鼠與模型組大鼠比較癥狀明顯緩解。2各組大鼠體重,腎肥大指數的對比:與正常組比較,模型組大鼠體重有明顯的下降趨勢(P0.01);與模型組比較,各治療組大鼠體重均有不同程度的回升,其中中藥中劑量組回升明顯高于其它各治療組,但差異沒有統計學意義(P0.05);與正常組比較,模型組大鼠腎臟均顯著增大,差異有統計學意義(P0.05);與模型組比較,各治療組大鼠腎重指數均有不同程度降低,其中中藥中、高劑量組和西藥組下降最為明顯(P0.05);各治療組大鼠腎重指數之間差異較小(P0.05)。3各組大鼠24h尿蛋白的對比:與正常組對比,模型組大鼠24h尿蛋白定量有顯著的增高趨勢,差異有統計學意義(P0.01);與模型組比較,各治療組大鼠24h尿蛋白定量均有不同程度的降低,其中中藥中、高劑量組和西藥組下降最為顯著,差異有統計學意義(P0.01);各治療組之間比較,西藥組低于中藥低劑量組,且兩者之間存在著明顯的差異(P0.05)。4各組大鼠FBG的變化:與正常組比較,模型組大鼠的FBG有顯著增高趨勢,差異有統計學意義(P0.01);與模型組比較,各治療組之間大鼠的FBG均有不同程度的下降(P0.05),其中中藥各劑量組下降均較為顯著,差異有統計學意義(P0.05);西藥和中藥各組間相比,中藥中、高劑量組小于西藥組,且前者與后兩者之間亦存在顯著的差異(P0.05)。5各組大鼠血脂的變化:與正常組比較,模型組大鼠的膽固醇顯著升高,差異有統計學意義(P0.05);與模型組比較,各治療組大鼠膽固醇均呈現降低的趨勢,以中藥中、高兩劑量組降低趨勢最為顯著(P0.05);與正常組比較,模型組大鼠甘油三酯顯著升高,差異有統計學意義(P0.05);與模型組比較,中藥各組和西藥組大鼠的甘油三酯均略有下降(P0.05);各治療組之間比較,中藥中劑量組與西藥組之間存在著明顯的差異(P0.05)。6各組大鼠腎功能的變化:與正常組比較,模型組大鼠的血肌酐有著顯著的升高,差異有統計學意義(P0.05);與模型組對比,各治療組大鼠血肌酐均有所降低,以中藥中、高兩劑量組降低的最為顯著(P0.05);各治療組大鼠血肌酐之間差異較小(P0.05)。與正常組比較,模型組大鼠的尿素氮升高較為明顯(P0.05);和模型組比較,中藥中劑量組大鼠尿素氮下降較為明顯,差異有統計學意義(P0.05);各治療組之間比較,無明顯差異(P0.05)。7腎臟病理形態(tài)學觀察:HE染色中可見:正常組大鼠腎小球大小正常,基底膜無增厚現象,未見系膜基質的增生,腎小管無炎癥細胞的浸潤,腎間質亦無纖維組織增生。模型組中,腎小球體積增大,可見基底膜厚度增加,系膜增生,間質區(qū)可見炎性細胞的浸潤,腎小管上皮細胞出現空泡變性;與模型組比較,各治療組均有不同程度的恢復。8各組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α的基因表達:和正常組比較,模型組大鼠腎組織NF-κB基因的表達顯著升高,差異有統計學意義(P0.05);與模型組比較,各治療組大鼠腎組織NF-κB mRNA量都有所減少,以中藥中、高兩劑量組及西藥組下降最為顯著(P0.05);各治療組進行比較,西藥組和中藥中劑量組兩組之間存在著明顯的差異(P0.05)。和正常組比較,模型組大鼠腎組織TNF-α基因的表達顯著升高,差異有統計學意義(P0.05);與模型組比較,各治療組大鼠腎組織TNF-αmRNA均有所下降,差異有統計學意義(P0.05);各治療組之間比較,不存在著明顯的差異(P0.05)。9各組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α的蛋白表達:與正常組對比,模型組大鼠腎組織NF-κB、TNF-α有明顯升高趨勢(P0.01);與模型組對比,各治療組腎組織NF-κB、TNF-α均有明顯降低趨勢(P0.05)。各治療組之間比較,西藥組和中藥低劑量組有著顯著的差異(P0.05)。結論:1當歸紅芪提取物可以降低DN大鼠的24h尿蛋白量,下調血肌酐、尿素氮的水平,減輕并改善DN大鼠的腎臟病理損害,保護大鼠的腎功能。2當歸紅芪提取物可以通過抑制腎組織中NF-κB、TNF-α基因和蛋白的表達,對DN大鼠腎組織起到一定的治療作用,這可能是當歸紅芪提取物治療DN的機制之一。
【圖文】：

各組大鼠體重的比較(x±s）

21圖 2 各組大鼠腎肥大指數比較( x ±s）4.3 各組大鼠 24h 尿蛋白定量的對比與正常組對比，模型組大鼠 24h 尿蛋白定量有顯著的增高趨勢，差異有統學意義(P＜0.01)；與模型組比較，各治療組大鼠 24h 尿蛋白定量均有不同程的降低，，其中中藥中、高劑量組和西藥組下降最為顯著，差異有統計學意義＜0.01)；各治療組之間比較，西藥組低于中藥低劑量組，且兩者之間存在著顯的差異(P＜0.05)。見表 3，圖 3。
【學位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2633331