【摘要】：目的:本研究為國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目組成部分旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探討蠲脈Ⅰ號(hào)溫陽(yáng)拆方、蠲脈Ⅰ號(hào)全方、金匱腎氣丸對(duì)家兔ASO模型的防治作用,并通過(guò)進(jìn)一步研究探討溫陽(yáng)方藥對(duì)ASO模型家兔血清鈣離子、血管組織細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及鈣調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)節(jié)作用。初步驗(yàn)證鄧柏楊教授根據(jù)異病同治原則,在現(xiàn)有大量文獻(xiàn)研究和自身前期研究的基礎(chǔ)上提出的,ASO發(fā)病機(jī)制與老年腎陽(yáng)虛血管細(xì)胞內(nèi)鈣超載相關(guān)的假說(shuō)。方法:選用新西蘭大白兔35只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、蠲脈Ⅰ號(hào)溫陽(yáng)拆方組、蠲脈Ⅰ號(hào)全方組、金匱腎氣丸組,每組7只。采用單純高脂喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)家兔12周復(fù)制ASO模型,并在模型復(fù)制期間同步給藥。12周后根據(jù)彩色多普勒腹主動(dòng)脈血管照影及腹主動(dòng)脈HE染色病理切片檢測(cè)判斷模型制備情況。實(shí)驗(yàn)開始與結(jié)束時(shí)各采血一次檢測(cè)血脂四項(xiàng)、血流變及血清鈣離子等血液指標(biāo)。模型制備成功后,麻醉下無(wú)菌操作截取2-3cm腹主動(dòng)脈,分為兩份,一份做石蠟切片HE染色鏡下觀察血管組織機(jī)構(gòu)形態(tài)學(xué)變化,一份液氮速凍qPCR檢測(cè)各組血管組織中CAM(鈣調(diào)蛋白)基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。每組隨機(jī)抽取3只家兔腹主動(dòng)脈血管組織用預(yù)冷的PBS溶液迅速清洗干凈精細(xì)剪將血管組織剪成肉糜,消化細(xì)胞懸液加入flo-4-am熒光探針進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度及細(xì)胞內(nèi)鈣離子陽(yáng)性比例。結(jié)果:12周后血管超聲照影結(jié)果顯示,正常對(duì)照組家兔腹主動(dòng)脈內(nèi)經(jīng)正常管壁光滑未見明確斑塊回聲。模型組家兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜局部欠光滑,可見多個(gè)強(qiáng)回聲斑塊附著。腹主動(dòng)脈病理切片檢測(cè)顯示,模型組有明顯的斑塊形成管腔縮窄;各組血液指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:1、實(shí)驗(yàn)前正常對(duì)照組、模型組、蠲脈Ⅰ號(hào)溫陽(yáng)拆方組、蠲脈Ⅰ號(hào)全方組、金匱腎氣丸組五組血脂指標(biāo)總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)濃度無(wú)差異(p0.05);血流變指標(biāo)全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細(xì)胞壓積,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);血清鈣離子濃度對(duì)比無(wú)差異(P0.05);2、模型制備成功后各組血液指標(biāo)比較(1)模型組及各藥物治療組與正常對(duì)照組比較均是TC、LDL-C濃度明顯升高(P0.05),TG、HDL-C濃度無(wú)明顯差異(P0.05);血流變指標(biāo)全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細(xì)胞壓積,均不同程度升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);血清鈣離子濃度對(duì)比無(wú)差異(P0.05);(2)各藥物治療組與模型組對(duì)比,TC、TG、LDL-C和HDL-C濃度無(wú)明顯差異(p0.05);血流變指標(biāo)全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細(xì)胞壓積,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P0.05);血清鈣離子濃度對(duì)比無(wú)差異(P0.05);3、各組腹主動(dòng)脈病理切片HE染色結(jié)果顯示(1)正常對(duì)照組血管組織內(nèi)膜表面光滑,完整,內(nèi)皮細(xì)胞排列整齊無(wú)隆起,中膜平滑肌細(xì)胞環(huán)裝排列,整齊;(2)模型組與各藥物治療組均有不同程度的內(nèi)皮損傷斑塊形成,模型組血管組織形態(tài)最差,全方組基本正常,拆方組與金匱腎氣丸組血管組織形態(tài)較差但優(yōu)于模型組;4、qPCR檢測(cè)各組血管組織中cam(鈣調(diào)蛋白)基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量結(jié)果顯示各組之間無(wú)明顯差異(P0.05);5、細(xì)胞流式檢測(cè)結(jié)果顯示(1)模型組與正常對(duì)照組比較細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(2)模型組與各藥物治療組比較,鈣離子濃度低于各藥物治療組(P0.05)。結(jié)論:1、采用單純高脂喂養(yǎng)家兔12周制備成功制備ASO動(dòng)物模型。2、實(shí)驗(yàn)后除正常對(duì)照組外,模型組及藥物治療組均患有高脂血癥且血液處在高粘狀態(tài),藥物在防治ASO疾病中對(duì)家兔血液脂質(zhì)及血液黏度水平的影響不明顯,可能是因在喂藥過(guò)程中同時(shí)高脂喂養(yǎng)干擾了藥物療效。3、通過(guò)血管組織形態(tài)學(xué)變化對(duì)比,溫陽(yáng)拆方能夠降低斑塊形成風(fēng)險(xiǎn)保護(hù)血管結(jié)構(gòu)的完整性防止病變。其效果可能是溫陽(yáng)法能夠促進(jìn)鈣離子內(nèi)流,提高并維持血管組織細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度產(chǎn)生。而模型組血管組織細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度低,說(shuō)明ASO的發(fā)病機(jī)制可能是血管組織細(xì)胞內(nèi)鈣離子的“空載”而非“超載”。4、采用經(jīng)典溫腎助陽(yáng)方劑金匱腎氣丸以方測(cè)癥,其起到一定的防治作用,但效果不如蠲脈Ⅰ號(hào)溫陽(yáng)拆方,高脂誘導(dǎo)的ASO動(dòng)物模型可能為陽(yáng)虛證。
【圖文】：

正常對(duì)照組與模型組家兔血管彩超結(jié)果

正常對(duì)照組與模型組家兔血管組織病理切片HE染色結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉異;衛(wèi)駱云;王躍振;;中藥通脈湯在下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥術(shù)后的應(yīng)用[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2015年09期

2 陳臻毅;徐強(qiáng);梁自豪;饒軍華;;動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制及其動(dòng)物模型研究進(jìn)展[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2015年04期

3 馮志明;張s，

本文編號(hào)：2630150