【摘要】：藤茶,為葡萄科(Vitaceae)蛇葡萄屬Ampelopsis Michx.的顯齒蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz)W.T.Wang,是近年來研究較多的藥茶兩用中藥之一,可用于治療咽喉炎、皮膚病、感冒發(fā)燒、糖尿病、解酒等。藤茶產(chǎn)地眾多,主要分布于我國湖北、湖南、重慶、貴州、廣西、福建等長江以南地區(qū)。由于各地氣候、生境等條件的差異,必然導(dǎo)致不同產(chǎn)地藤茶的質(zhì)量參差不一。然而,現(xiàn)如今不同產(chǎn)地藤茶的質(zhì)量仍未得到系統(tǒng)保障及控制。其中,二氫楊梅素是其最主要的活性成分,含量可高達(dá)30%以上,具有抗氧化、抗炎、抗病原微生物、抗腫瘤、保肝、心臟保護(hù)、提高胰島素敏感性等作用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),二氫楊梅素生物利用度低,主要分布于胃腸道并經(jīng)糞便排出。但關(guān)于其體內(nèi)外代謝相關(guān)研究仍鮮有報道。因此,本文以藤茶及其活性成分二氫楊梅素為研究對象,從藤茶的質(zhì)量評價、二氫楊梅素的體內(nèi)代謝及其與腸道菌群的相互作用三個方面展開研究,為其藥物開發(fā)及臨床應(yīng)用提供重要信息。由此,論文共分為三個部分:1.指紋圖譜結(jié)合一測多評模式在藤茶質(zhì)量評價中的應(yīng)用研究本研究首先建立了不同產(chǎn)地藤茶HPLC指紋圖譜,得到了24個主要共有峰,并對不同產(chǎn)地藤茶樣品進(jìn)行了相似度及模式識別分析,相似度結(jié)果表明不同產(chǎn)地的藤茶在化學(xué)成分組成上基本一致,但仍存在一定的差異;聚類分析及主成分分析結(jié)果表明可將不同產(chǎn)地的藤茶大致分為3大類。與此同時,我們從主要共有峰中指認(rèn)了3個代表性活性成分,分別為二氫楊梅素、楊梅素及楊梅苷,并建立了一測多評法對這3種化合物進(jìn)行同時測定,含量測定結(jié)果表明各批藤茶藥材中二氫楊梅素、楊梅素及楊梅苷的含量存在一定的地區(qū)差異性,其中二氫楊梅素含量的地區(qū)差異尤為明顯�？偟膩碚f,結(jié)合指紋圖譜和一測多評法的質(zhì)量評價模式已被首次成功應(yīng)用于藤茶的質(zhì)量評價中,定性的指紋圖譜結(jié)合定量的一測多評為藤茶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高研究提供了科學(xué)依據(jù)。2.二氫楊梅素在大鼠體內(nèi)的代謝研究本研究首次采用UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù)系統(tǒng)探討了二氫楊梅素在大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物情況。本研究首先分析總結(jié)了二氫楊梅素標(biāo)準(zhǔn)品在負(fù)離子電離模式下的質(zhì)譜裂解規(guī)律,并建立了檢測二氫楊梅素及其代謝物的UPLC-Q-TOF-MS/MS方法,且將其用于二氫楊梅素體內(nèi)代謝物的檢測中。應(yīng)用該方法,我們從尿液和糞便中總共檢測鑒定了8種代謝物,其中有三種(M4、M7、M8)代謝物為首次發(fā)現(xiàn)。由此,我們可以看出二氫楊梅素在體內(nèi)主要通過還原、去羥基、還原后去羥基、甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化途徑進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化,且代謝產(chǎn)物主要集中在糞便中,其中包括6種I相和II相代謝物,經(jīng)還原(M2)、去羥基(M3、M5)、還原后去羥基(M6)和甲基化(M7、M8)形成;少量存在于尿液中,其中包括4種II相代謝物,經(jīng)葡萄糖醛酸化(M1)、硫酸化(M4)和甲基化(M7、M8)形成。然而,在血漿中幾乎檢測不到二氫楊梅素的代謝產(chǎn)物。本研究為闡明二氫楊梅素的體內(nèi)過程提供了理論依據(jù),并對其未來的開發(fā)及應(yīng)用有一定的參考價值,也為下一部分實驗的開展提供了重要科學(xué)依據(jù)。3.二氫楊梅素與腸道菌群的相互作用研究本研究首次初步探討了二氫楊梅素與腸道菌群之間的相互作用,首先通過二氫楊梅素與腸道菌懸液體外孵育研究發(fā)現(xiàn)二氫楊梅素在腸道菌群作用下可發(fā)生還原、去羥基等代謝反應(yīng),其中去羥基代謝物是最主要的代謝產(chǎn)物。同時,為了探討腸道菌群代謝對二氫楊梅素藥代動力學(xué)性質(zhì)的影響,我們對比研究了二氫楊梅素在正常和偽無菌大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)情況,結(jié)果表明相較于正常組,偽無菌組的AUC僅略有增加,但其Cmax有顯著性增加,說明腸道菌群代謝對二氫楊梅素的藥代動力學(xué)過程起著重要作用。除此之外,我們運用16S r RNA測序技術(shù)檢測了長期二氫楊梅素給藥后腸道菌群的結(jié)構(gòu)變化情況,結(jié)果表明二氫楊梅素能夠顯著改變腸道菌群的豐度和多樣性,并能在一定程度上調(diào)節(jié)改善腸道菌群結(jié)構(gòu)。本研究為今后二氫楊梅素藥理作用機(jī)制的研究提供了新思路和理論支持,有利于闡明其低生物利用度高生物活性的原因,也為類似于二氫楊梅素的其他中藥成分的研究提供理論和技術(shù)支持。
【圖文】：

圖 1 藤茶的對照指紋圖譜 1 The reference chromatogram of Ampelopsis grossedentata（Hand.-MazzW.T.Wang地藤茶指紋圖譜的相似度評價

圖 2 各個藤茶樣品的疊加色譜圖Figure 2 The overlapping chromatograms of Ampelopsis grossedentata（Hand.-Mazz）W.T.Wang samples4.5 指紋圖譜的模式識別研究
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5;R284.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2629649