發(fā)布時(shí)間：2020-04-16 05:06

【摘要】：血管慢性炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化過(guò)程中的主要病理改變,然而其發(fā)生機(jī)制尚不完全清楚。ox-LDL是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素,能夠損傷內(nèi)皮細(xì)胞參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生進(jìn)展。白藜蘆醇是一種多酚類物質(zhì),具有抗氧化、抗炎癥等多種作用。本課題重點(diǎn)觀察了白藜蘆醇對(duì)ox-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞TLR活化、MMPs表達(dá)以及自噬的影響,分析了白藜蘆醇抑制炎癥改善細(xì)胞功能的分子機(jī)制。本研究使用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作為研究對(duì)象,用ox-LDL或LPS處理內(nèi)皮細(xì)胞,用WesternBlot,免疫熒光和ELISA方法檢測(cè)蛋白的表達(dá)和分泌。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察小鼠體重和血脂成分、免疫組化觀察血管結(jié)構(gòu)、TLR4表達(dá),ELISA測(cè)定血漿MMPs含量。TLR4是天然免疫性受體,外來(lái)刺激以及內(nèi)源性有害產(chǎn)物聚集均可誘導(dǎo)TLR4活化發(fā)生炎癥反應(yīng)。金屬蛋白酶(Metalloproteinases)是一類依賴于鋅、鈣離子的蛋白水解酶,具有分解細(xì)胞外基質(zhì)的作用。二者均參與動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展。結(jié)果顯示,ox-LDL或LPS刺激內(nèi)皮細(xì)胞均增加了 TLR4表達(dá)。并增加了金屬蛋白酶MMP-3、MMP-9的表達(dá),白藜蘆醇有效地抑制了這一反應(yīng)。ELSIA結(jié)果顯示白藜蘆醇降低了 ox-LDL和LPS刺激細(xì)胞MMP-3和MMP-9分泌。對(duì)分子機(jī)制的研究表明,白藜蘆醇抑制了 ox-LDL或LPS刺激的轉(zhuǎn)錄因子STAT3的磷酸化;STAT3抑制劑也抑制了 MMP-3、MMP-9的表達(dá);提示STAT3是白藜蘆醇作用的重要靶點(diǎn)。其次,我們觀察了 ox-LDL和白藜蘆醇對(duì)Sirt1/AMPK通道的影響。Sirt1是參與細(xì)胞能量代謝的長(zhǎng)壽因子。結(jié)果顯示,ox-LDL或LPS刺激內(nèi)皮細(xì)胞Sirt1表達(dá)下降,AMPK磷酸化水平降低,而白藜蘆醇處理逆轉(zhuǎn)了這一現(xiàn)象。第二信使分子cAMP和cGMP產(chǎn)生是被AMPK調(diào)控的,白藜蘆醇處理也增加細(xì)胞內(nèi)cAMP和cGMP含量。此外,我們進(jìn)一步分析了 ox-LDL和白藜蘆醇對(duì)細(xì)胞自噬功能的影響。自噬增強(qiáng)是細(xì)胞的保護(hù)性行為,mTOR是自噬信號(hào)的上游分子,具有抑制自噬的作用。結(jié)果表明,ox-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞增加了 mTOR磷酸化,白藜蘆醇處理抑制了其磷酸化,并增加了自噬標(biāo)志蛋白LC31I、Atg5和Atg7的表達(dá)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察了白藜蘆醇對(duì)高脂飲食小鼠血漿MMP-3、MMP-9、血管結(jié)構(gòu)和TLR4表達(dá)。結(jié)果顯示,與高脂飲食組相比,白藜蘆醇處理降低了小鼠血漿總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C),高密度脂蛋白膽固醇(HDI-C)含量,也降低了血漿MMP-9含量,對(duì)MMP-3無(wú)顯著影響。天狼星染色顯示,高脂飲食組小鼠血管結(jié)構(gòu)紊亂,膠原成分減少,膠原之間的空隙增多。白藜蘆醇給藥干預(yù)組小鼠血管膠原排列規(guī)則,與正常對(duì)照組相似。免疫組化TLR4染色發(fā)現(xiàn),高脂飲食組小鼠血管壁TLR4表達(dá)明顯高于對(duì)照組和白藜蘆醇處理組。這些結(jié)果提示白藜蘆醇對(duì)長(zhǎng)期高脂飲食引起的血管病變具有保護(hù)作用。結(jié)論:白藜蘆醇能夠抑制ox-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞TLR4介導(dǎo)的MMP-3和MMP-9表達(dá)和分泌,其分子機(jī)制與抑制轉(zhuǎn)錄因子STAT3活化相關(guān)。白藜蘆醇能夠增加Sirt1/AMPK通道活化,增加細(xì)胞cAMP、cGMP水平。此外,白藜蘆醇能夠促進(jìn)細(xì)胞自噬,對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)也表明白藜蘆醇能夠降低高脂飲食小鼠血管TLR4表達(dá),降低血漿MMP-9含量,對(duì)于血管結(jié)構(gòu)損傷具有保護(hù)作用。
【圖文】：

且具有濃度依賴性。白藜蘆醇（１、１０、１００邋ＨＭ）以劑量依賴的方式抑制了邋ｏｘ－ＬＤＬ逡逑誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞ＴＬＲ４表達(dá)。此外，通過(guò)免疫熒光分析了邋ＴＬＲ４表達(dá)情況，顯示逡逑ｏｘ－ＬＤＬ組ＴＬＲ４表達(dá)明顯增加，，白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)了這一現(xiàn)象（圖１）逡逑Ａ邐Ｂ逡逑ｏｘ－ＬＤＬ邋（０．１邋ｍｇ邋ｉｎｉ）邐－邐＋邐＋邐＋邐＋逡逑ｏｘ－ＬＤＬ邋（ｍｇ／ｍｌ）邋０邐０．０２邐０．０５邐０．１邐０．２邋Ｒｃｓｖｃｒａｔｒｏｌ邋（＾Ｍ）邐０邐０邐１邐１０邐１００逡逑ＴＬＲ４邋ｆｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍ邐ｍｍ邐ＴＬＲ４逡逑（３－ａｃｔ邋ｉｎ邋ｗ邐ｐ－ａｃｔｉｎ邐ｍｍｍｍｍｍｍｍｒｎｍｍｍｍｍｍｍ逡逑｜邋１．５－，邐＊邐＊＊邐｜邋丨料逡逑ｊｊｎｉｌｉｌ邐ｉｉｌｎｉｉｉｉ逡逑／ｗｗ邐／邋／邋／邋／邋／逡逑々夕０邋０邐、、令、彳、逡逑ＴＬＲ４邐ＤＡＰＩ邐Ｍｅｒｇｅ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑１００邋ｊｉＭ邋Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ逡逑＋邋０．１邋ｍｇ邋ｍｌ邋ｏｘ－ＬＤＬ逡逑圖１白藜蘆醇對(duì)ｏｘ－ＬＤＬ

且具有濃度依賴性。白藜蘆醇（１、１０、１００邋ＨＭ）以劑量依賴的方式抑制了邋ｏｘ－ＬＤＬ逡逑誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞ＴＬＲ４表達(dá)。此外，通過(guò)免疫熒光分析了邋ＴＬＲ４表達(dá)情況，顯示逡逑ｏｘ－ＬＤＬ組ＴＬＲ４表達(dá)明顯增加，白藜蘆醇逆轉(zhuǎn)了這一現(xiàn)象（圖１）逡逑Ａ邐Ｂ逡逑ｏｘ－ＬＤＬ邋（０．１邋ｍｇ邋ｉｎｉ）邐－邐＋邐＋邐＋邐＋逡逑ｏｘ－ＬＤＬ邋（ｍｇ／ｍｌ）邋０邐０．０２邐０．０５邐０．１邐０．２邋Ｒｃｓｖｃｒａｔｒｏｌ邋（＾Ｍ）邐０邐０邐１邐１０邐１００逡逑ＴＬＲ４邋ｆｍｍｍ邋ｍｍ邋ｍｍ邐ｍｍ邐ＴＬＲ４逡逑（３－ａｃｔ邋ｉｎ邋ｗ邐ｐ－ａｃｔｉｎ邐ｍｍｍｍｍｍｍｍｒｎｍｍｍｍｍｍｍ逡逑｜邋１．５－，邐＊邐＊＊邐｜邋丨料逡逑ｊｊｎｉｌｉｌ邐ｉｉｌｎｉｉｉｉ逡逑／ｗｗ邐／邋／邋／邋／邋／逡逑々夕０邋０邐、、令、彳、逡逑ＴＬＲ４邐ＤＡＰＩ邐Ｍｅｒｇｅ逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ逡逑１００邋ｊｉＭ邋Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ逡逑＋邋０．１邋ｍｇ邋ｍｌ邋ｏｘ－ＬＤＬ逡逑圖１白藜蘆醇對(duì)ｏｘ－ＬＤＬ
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 童亞男;查麗;;五參口服液對(duì)糖尿病合并冠心病患者內(nèi)皮功能的影響[J];現(xiàn)代養(yǎng)生;2016年22期

2 劉慧敏;耿靜;王世君;張瑞;吳平;;狼瘡性腎炎患者內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體表達(dá)的研究[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2007年02期

3 王妍;陶軍;楊震;涂昌;徐明國(guó);王潔梅;黃奕俊;;腫瘤壞死因子促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞微顆粒釋放的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華心血管病雜志;2005年12期

4 孫麗莎;內(nèi)皮細(xì)胞與缺血性腦血管疾病[J];微循環(huán)學(xué)雜志;2002年03期

5 吳榮謙,孟憲鈞;內(nèi)皮細(xì)胞與多器官功能失常綜合征[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;1999年01期

6 ;人巨細(xì)胞病毒感染誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活劑抑制物1mRNA的表達(dá)及分泌[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).病毒學(xué)分冊(cè);1999年04期

7 夏豪,李庚山,尹麗婭,李曉艷,王晶;血小板源性生長(zhǎng)因子對(duì)于培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平的影響(摘要)[J];湖北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年02期

8 何澤涌;;關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞研究的某些進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年03期

9 何澤涌;;關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞研究的某些進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年04期

10 何澤涌;;關(guān)于內(nèi)皮細(xì)胞研究的某些進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年05期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 應(yīng)大君;陳衛(wèi)軍;周丁華;;內(nèi)皮細(xì)胞機(jī)械感受功能的實(shí)驗(yàn)研究[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊(cè)）[C];1999年

2 林萍章;PualJ.Pearson;RaymondCartier;KazuhiroHashimoto;HartzellV.Schaff;;內(nèi)膜再生過(guò)程中,內(nèi)皮細(xì)胞之反應(yīng)[A];海峽兩岸電子顯微學(xué)討論會(huì)論文專集[C];1991年

3 熊建瓊;朱佩芳;王正國(guó);蔣建新;;髓樣分化蛋白-2在內(nèi)毒素與內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)合中的作用[A];第十一次全國(guó)急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)急診醫(yī)學(xué)分會(huì)成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

4 俞松;曹江;;重組人血管內(nèi)皮抑制素對(duì)血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];第八屆全國(guó)兒童腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

5 鄧紅;李懿萍;來(lái)茂德;;高糖環(huán)境細(xì)胞間相互作用對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生活性氧和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

6 田

本文編號(hào)：2629418