【摘要】：目的探討貫葉連翹提取物(Hypericum Perforatum Extract,HPE)對四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化的保護作用及部分機制研究。方法48只Sprague Dawley(SD)大鼠隨機分為正常組、HPE單藥組(HPE灌胃)、模型組(CCl4處理)、HPE高劑量組(CCl4+HPE 100mg/kg)、HPE中劑量組(CCl4+HPE50mg/kg)和HPE低劑量組(CCl4+HPE 25mg/kg)。采用50%CCl4-花生油造模,于大鼠背部皮下注射,每周2次,共12周,正常組及HPE單藥組給予等量生理鹽水皮下注射。造模第二天開始灌胃給予大鼠不同劑量HPE,HPE各劑量組分別按100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg大鼠體重給藥,HPE單藥組按50mg/kg大鼠體重給藥,每日一次,連續(xù)12周。正常組自由飲水,模型組給予同HPE高劑量組灌胃劑量生理鹽水灌胃。12周后處死大鼠,肝脾稱重,計算肝脾指數(shù);留取部分肝臟標本用于HE及Masson染色光鏡下觀察肝組織病理學變化;留取大鼠血清及肝組織勻漿標本,采用ELISA法檢測外周血ALT、AST和TBIL含量,及肝組織HA、LN、CIV、PCⅢ含量。采用免疫組織化學法(immunohistochemistry,IHC)檢測TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3、Smad7在各組大鼠肝組織中蛋白表達,蛋白免疫印跡(Western Blotting,WB)法進行進一步驗證。結(jié)果模型組大鼠肝脾指數(shù)較正常組明顯增加(P0.01),HPE(50,100mg/kg)給藥組能夠明顯減低模型組中升高的肝脾指數(shù)(P0.05,P0.01)。正常組及HPE單藥組中,HE染色和Masson染色鏡下見大鼠肝細胞排列整齊,以中央靜脈為中心呈放射狀排列,肝小葉結(jié)構(gòu)完整,大鼠肝臟基本無纖維增生,僅在少許主要血管周圍見少許藍色纖維;模型組中,HE染色和Masson染色可見肝細胞排列紊亂,結(jié)構(gòu)改變,多數(shù)肝細胞腫脹,伴有炎性浸潤及灶狀壞死,可見假小葉形成,大量藍色纖維增生,中心靜脈處明顯,可見纖維增生分割肝組織。結(jié)合肝脾指數(shù)及肝臟病理光鏡下改變,大鼠肝纖維化模型建立成功。給藥后,HPE(50,100mg/kg)劑量組肝臟病理改變較模型組明顯改善,細胞腫脹、壞死較模型組明顯好轉(zhuǎn),纖維增生較其明顯減少。與正常組比較,HPE單藥組血清ALT、AST、TBIL含量,肝組織中HA、LN、CIV、PCⅢ含量以及肝組織中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3、Smad7蛋白表達差異均無統(tǒng)計學意義;模型組血清ALT、AST、TBIL含量明顯升高(P0.01),肝組織中HA、LN、CIV、PCⅢ含量明顯升高(P0.01),肝組織中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3蛋白表達均顯著升高,Smad7蛋白表達顯著下降(P0.01)。與模型組比較,HPE明顯降低血清ALT、AST、TBIL含量(P0.01),顯著降低肝組織中HA、LN、C IV、PCⅢ含量(P0.01),能夠下調(diào)肝組織中TGF-β1、α-SMA、p Smad2、p Smad3蛋白表達,上調(diào)Smad7蛋白表達(P0.01)。結(jié)論預(yù)防性給予HPE可明顯改善肝損傷,減輕肝臟病理損傷及纖維增生程度,發(fā)揮抗肝纖維化作用,影響TGFβ1/Smads信號通路中相關(guān)蛋白的表達,對大鼠肝纖維化有明顯保護作用,機制可能與抑制TGFβ1/Smads信號傳導(dǎo)通路有關(guān)。
【圖文】：

實驗大鼠肝臟大體標本Fig1.Specimensofexperimentalrats’livers.

肝組織HE染色(×100)
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2628714