【摘要】：目的:通過對桃紅四物湯水提物體內(nèi)外成分定性分析,進一步明確桃紅四物湯發(fā)揮作用的主要物質(zhì)基礎;聯(lián)合網(wǎng)絡藥理學與轉(zhuǎn)錄組學技術,深入探究桃紅四物湯治療缺血性中風的作用機制。方法:本實驗應用UPLC-Q-TOF-MS~E技術結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)分析平臺對桃紅四物湯水提物中的主要化學成分進行了定性分析;建立大鼠腦缺血模型,灌胃給藥桃紅四物湯,應用UPLC-Q-TOF-MS~E技術結(jié)合桃紅四物湯體外化學成分分析結(jié)果,鑒定大鼠口服桃紅四物湯后入血、入腦原型成分及其代謝產(chǎn)物;以體內(nèi)原型成分為基礎,通過網(wǎng)絡藥理學預測桃紅四物湯作用靶點,篩選出與缺血性中風疾病相關的靶點進行GO分析、KEGG通路注釋,構建體內(nèi)成分-靶點-通路可視化網(wǎng)絡;應用轉(zhuǎn)錄組學測序方法,篩選出桃紅四物湯治療缺血性中風的差異基因,最后與網(wǎng)絡藥理學預測結(jié)果相結(jié)合,選定桃紅四物湯可能發(fā)揮作用的關鍵靶點與通路進行動物實驗驗證。結(jié)果:在桃紅四物湯水提物中共鑒別出90個化學成分,主要包括黃酮類、有機酸類、糖苷類和苯酞類等化合物;在腦缺血模型大鼠體內(nèi)共鑒別出39個原型成分和61個代謝產(chǎn)物,原型成分中有18個化合物可以進入腦脊液;網(wǎng)絡藥理學共預測出桃紅四物湯體內(nèi)成分作用靶點437個,與缺血性中風疾病相關靶點有189個,KEGG注釋的通路有105條;轉(zhuǎn)錄組學通過高通量RNA測序技術分析了假手術、腦缺血模型和桃紅四物湯給藥大鼠大腦左半球的mRNA表達譜,共鑒定出1007個桃紅四物湯作用靶點基因,富集的通路有16條(Homo sapiens);網(wǎng)絡藥理學與轉(zhuǎn)錄組學交集的基因有11個,分別為:Plau、Fabp4、Mmp9、Mmp12、Cfd、Lcn2、Trem1、Lgals3、Hmox1、Selp和Slc6a4,交集的通路有7條,分別為:Focal adhesion、Complement and coagulation cascades、Staphylococcus aureus infection、Malaria、Transcriptional misregulation in cancer、Progesterone-mediated oocyte maturation、PI3K-Akt signaling pathway。動物實驗驗證表明,桃紅四物湯可以逆轉(zhuǎn)腦缺血后11個靶基因的異常表達、抑制補體和凝血級聯(lián)通路的活化,進而實現(xiàn)對缺血性中風疾病的保護作用。結(jié)論:本實驗建立的UPLC-Q-TOF-MS~E技術結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫分析方法可以快速、較全面地識別桃紅四物湯的體內(nèi)外化學成分,以網(wǎng)絡藥理學與轉(zhuǎn)錄組學相結(jié)合的研究模式,確定了桃紅四物湯治療缺血性中風主要物質(zhì)基礎為Mudanpioside E、paeoniflorin、Lactiflorin、Benzoylpaeoniflorin、β-Benzoyloxypaeoniflorin等,作用機制可能與調(diào)控Complement and coagulation cascades、Cell cycle、Neuroactive ligand receptor Interaction等信號通路有關,初步闡明了桃紅四物湯治療缺血性中風的主要物質(zhì)基礎與作用機制。
【圖文】：

表 1 混合對照品負離子模式總離子流圖分析結(jié)果Table1 Analysis of THSWD by UPLC-Q-TOF-MSEin negative ion mode.No. RT(min) Name Molecular weight Molecular formula1 1.72 Gallic acid 170.0215 C7H6O52 2.06 Rehmannioside D 686.2293 C27H42O203 2.69 Protocatechuic acid 154.0267 C6H3COOH4 3.80 P-Hydroxybenzoic acid 138.0316 C7H6O35 4.05 Hydroxysafflor yellow A 612.1698 C27H32O166 5.08 Caffeic acid 180.0422 C9H8O47 6.42 Chlorogenic acid 354.0968 C16H18O9

圖 3 負離子模式下六味單味藥 BPI 圖譜（A：桃仁，B：紅花，C：白芍，D：川芎，E：當歸，F(xiàn)：熟地黃）Fig3 Base peak chromatograms of the six individual herbs in negative mode.（A：Carthamus tinctorius L.，，B：Prunus persica(L.)Batsch，C：Paeoniae Radix Alba，
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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