【摘要】：目的:通過(guò)對(duì)桃紅四物湯水提物體內(nèi)外成分定性分析,進(jìn)一步明確桃紅四物湯發(fā)揮作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ);聯(lián)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù),深入探究桃紅四物湯治療缺血性中風(fēng)的作用機(jī)制。方法:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用UPLC-Q-TOF-MS~E技術(shù)結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)分析平臺(tái)對(duì)桃紅四物湯水提物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行了定性分析;建立大鼠腦缺血模型,灌胃給藥桃紅四物湯,應(yīng)用UPLC-Q-TOF-MS~E技術(shù)結(jié)合桃紅四物湯體外化學(xué)成分分析結(jié)果,鑒定大鼠口服桃紅四物湯后入血、入腦原型成分及其代謝產(chǎn)物;以體內(nèi)原型成分為基礎(chǔ),通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)桃紅四物湯作用靶點(diǎn),篩選出與缺血性中風(fēng)疾病相關(guān)的靶點(diǎn)進(jìn)行GO分析、KEGG通路注釋,構(gòu)建體內(nèi)成分-靶點(diǎn)-通路可視化網(wǎng)絡(luò);應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序方法,篩選出桃紅四物湯治療缺血性中風(fēng)的差異基因,最后與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果相結(jié)合,選定桃紅四物湯可能發(fā)揮作用的關(guān)鍵靶點(diǎn)與通路進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果:在桃紅四物湯水提物中共鑒別出90個(gè)化學(xué)成分,主要包括黃酮類、有機(jī)酸類、糖苷類和苯酞類等化合物;在腦缺血模型大鼠體內(nèi)共鑒別出39個(gè)原型成分和61個(gè)代謝產(chǎn)物,原型成分中有18個(gè)化合物可以進(jìn)入腦脊液;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)共預(yù)測(cè)出桃紅四物湯體內(nèi)成分作用靶點(diǎn)437個(gè),與缺血性中風(fēng)疾病相關(guān)靶點(diǎn)有189個(gè),KEGG注釋的通路有105條;轉(zhuǎn)錄組學(xué)通過(guò)高通量RNA測(cè)序技術(shù)分析了假手術(shù)、腦缺血模型和桃紅四物湯給藥大鼠大腦左半球的mRNA表達(dá)譜,共鑒定出1007個(gè)桃紅四物湯作用靶點(diǎn)基因,富集的通路有16條(Homo sapiens);網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)交集的基因有11個(gè),分別為:Plau、Fabp4、Mmp9、Mmp12、Cfd、Lcn2、Trem1、Lgals3、Hmox1、Selp和Slc6a4,交集的通路有7條,分別為:Focal adhesion、Complement and coagulation cascades、Staphylococcus aureus infection、Malaria、Transcriptional misregulation in cancer、Progesterone-mediated oocyte maturation、PI3K-Akt signaling pathway。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明,桃紅四物湯可以逆轉(zhuǎn)腦缺血后11個(gè)靶基因的異常表達(dá)、抑制補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)通路的活化,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)缺血性中風(fēng)疾病的保護(hù)作用。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立的UPLC-Q-TOF-MS~E技術(shù)結(jié)合UNIFI數(shù)據(jù)庫(kù)分析方法可以快速、較全面地識(shí)別桃紅四物湯的體內(nèi)外化學(xué)成分,以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與轉(zhuǎn)錄組學(xué)相結(jié)合的研究模式,確定了桃紅四物湯治療缺血性中風(fēng)主要物質(zhì)基礎(chǔ)為Mudanpioside E、paeoniflorin、Lactiflorin、Benzoylpaeoniflorin、β-Benzoyloxypaeoniflorin等,作用機(jī)制可能與調(diào)控Complement and coagulation cascades、Cell cycle、Neuroactive ligand receptor Interaction等信號(hào)通路有關(guān),初步闡明了桃紅四物湯治療缺血性中風(fēng)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制。
【圖文】：

表 1 混合對(duì)照品負(fù)離子模式總離子流圖分析結(jié)果Table1 Analysis of THSWD by UPLC-Q-TOF-MSEin negative ion mode.No. RT(min) Name Molecular weight Molecular formula1 1.72 Gallic acid 170.0215 C7H6O52 2.06 Rehmannioside D 686.2293 C27H42O203 2.69 Protocatechuic acid 154.0267 C6H3COOH4 3.80 P-Hydroxybenzoic acid 138.0316 C7H6O35 4.05 Hydroxysafflor yellow A 612.1698 C27H32O166 5.08 Caffeic acid 180.0422 C9H8O47 6.42 Chlorogenic acid 354.0968 C16H18O9

圖 3 負(fù)離子模式下六味單味藥 BPI 圖譜（A：桃仁，B：紅花，C：白芍，D：川芎，E：當(dāng)歸，F(xiàn)：熟地黃）Fig3 Base peak chromatograms of the six individual herbs in negative mode.（A：Carthamus tinctorius L.，，B：Prunus persica(L.)Batsch，C：Paeoniae Radix Alba，
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2628499