【摘要】：民族藥是祖國醫(yī)藥的瑰寶,在各種疾病的治療中具有獨(dú)特的療效。但與中藥相比其研究與開發(fā)則遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后。因此,增大民族藥的基礎(chǔ)研究與開發(fā),從民族藥的寶庫中挖掘有效部位群、單體化合物及先導(dǎo)化合物必將成為未來的研究熱點。印度獐牙菜,藏藥名“甲蒂”,為龍膽科植物印度獐牙菜Swertia chirayita(Roxb.ex Fleming)H.Karst.的干燥全草,該藥在臨床上應(yīng)用的歷史悠久,具有抗炎、保肝、退熱等功效,且在藏醫(yī)治療黃疸型肝炎、病毒性肝炎等肝膽疾病中為首選藥物之一,但該藥的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。課題組前期研究顯示,印度獐牙菜85%乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位在體內(nèi)外具有較好的抗肝纖維化活性,為了闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ),本論文首先對該部位的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離、純化與結(jié)構(gòu)鑒定,接著對其中量大的單體化合物進(jìn)行了體外HSC增殖抑制活性篩選和抗炎作用的研究,最后對該部位中具有體內(nèi)抗肝纖維化活性化合物當(dāng)藥苦酯苷進(jìn)行了溶解度和表觀油水分配系數(shù)的測定,為成藥性預(yù)測提供藥劑學(xué)依據(jù)。具體研究內(nèi)容包括以下四部分:1印度獐牙菜乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究運(yùn)用多種色譜技術(shù),對印度獐牙菜乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化,并依據(jù)其理化性質(zhì)、波譜數(shù)據(jù)對結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析鑒定。從中分離純化了32個化合物,其中鑒定出18個化合物,包括6個三萜及其苷元、5個口山酮、3個裂環(huán)烯醚萜、2個有機(jī)酸、1個黃酮和1個其他類化合物,分別鑒定為雛菊葉龍膽口山酮(1)、1,3,5,8-四羥基口山酮(2)、1,7-二羥基-3,8-二甲氧基口山酮(3)、雛菊葉龍膽苷(4)、swerpunilactone A(5)、蜜桔黃素(6)、齊墩果酸(7)、4-epi-hederagenin(8)、2-epi-corosolic acid(9)、熊果酸(10)、3β,23-二羥基烏索-12-烯-28酸(11)、β-胡蘿卜苷(12)、當(dāng)藥苦酯苷(13)、swerimilegenin I(14)、紅白金花內(nèi)酯(15)、兒茶酚(16)、丁香酸(17)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(18)。其中化合物6、8、9、11和17首次從獐牙菜屬植物中分離得到,化合物3、5、14和15首次從印度獐牙菜中分離得到。2印度獐牙菜乙酸乙酯部位單體化合物體外抗肝纖維化活性篩選為了評價化合物抗肝纖維化作用,本實驗采用MTT法觀察了該部位中的主要單體化合物對TGF-β刺激的HSC-T6細(xì)胞增殖活性的影響。結(jié)果表明,熊果酸和齊墩果酸具有顯著的體外抗肝纖維化細(xì)胞活性,且隨著給藥濃度的升高,其抑制HSC增殖的作用逐漸增強(qiáng),而其余化合物在體外作用不明顯。因此,熊果酸和齊墩果酸是該部位中主要抗肝纖維化活性物質(zhì)。3雛菊葉龍膽口山酮抗炎活性作用及其機(jī)制初步研究炎癥的發(fā)生與肝纖維化密切相關(guān),因此,研究印度獐牙菜乙酸乙酯部位中化合物的抗炎活性及作用機(jī)制十分必要。本實驗研究了主要成分雛菊葉龍膽口山酮對經(jīng)LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7巨噬細(xì)胞中各類因子及蛋白的影響,結(jié)果表明其雛菊葉龍膽口山酮在2~16μM濃度下可明顯升高細(xì)胞活力,對炎癥因子TNF-α和IL-6具有顯著的抑制作用;可抑制PGE_2、COX-2蛋白的表達(dá);明顯抑制Akt、IKKβ、NF-κB p 65、P 38、ERK和JNK蛋白的磷酸化水平;但其對COX-1的蛋白表達(dá)無顯著影響。結(jié)果提示雛菊葉龍膽口山酮具有抗炎活性,并且推測其發(fā)揮抗炎活性的機(jī)制為抑制COX-2/Akt/NF-κB/MAPKs的信號傳導(dǎo)通路。4抗肝纖維化成分當(dāng)藥苦酯苷的理化性質(zhì)研究水溶性和脂溶性決定著藥物在體內(nèi)的溶解、吸收、分布及排泄,因此應(yīng)依據(jù)生物體內(nèi)pH值的特點,研究活性化合物在不同pH緩沖液中的溶解度及油水分配系數(shù),為預(yù)測藥物在體內(nèi)的過程以及其藥劑學(xué)性質(zhì)提供依據(jù)。本實驗采用HPLC法和搖瓶法分別測定了該部位中另一主要成分環(huán)烯醚萜類化合物當(dāng)藥苦酯苷的溶解度及油水分配系數(shù)。色譜條件為:色譜柱:Waters C_(18)(250 mm×4.6mm,5μm),流動相:甲醇-水,檢測波長:260 nm,流速:1.0 mL/min,柱溫:25℃,進(jìn)樣量:20μL。實驗結(jié)果顯示當(dāng)藥苦酯苷在水的平衡溶解度為(150.74±0.78)μg/mL,在不同pH值PBS中,當(dāng)pH 7.9時最大,表明其為水難溶性化合物且于偏堿性環(huán)境中溶解度較大;當(dāng)藥苦酯苷在水和不同pH值PBS中的表觀油水分配系數(shù)的順序為:pH 2.5pH 7.4水pH 2.0pH 7.9pH 6.8=pH 5.8pH 5.0,提示當(dāng)藥苦酯苷可能在pH 2~3的酸性環(huán)境及pH 7~7.4的偏中性環(huán)境中具有較好的脂溶性,易進(jìn)入細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn),利于吸收�？傊�,本課題系統(tǒng)分離了印度獐牙菜乙酸乙酯部位化學(xué)成分,篩選了抗肝纖維化活性成分及抗炎成分的研究,確定了活性化合物,并對該部分量大的主要活性化合物進(jìn)行了理化性質(zhì)研究,為印度獐獐牙菜的深度開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

19圖 1-2 印度獐牙菜乙酸乙酯萃取分離流程圖Fig.1-2 The separation flow of ethyl acetate fraction from the S. chirayita

圖 2-1 印度獐牙菜乙酸乙酯部位單體化合物對 HSC-T6 抑制作用Fig.2-1 Inhibitory effect of ethyl acetate monomers compounds on theproliferation of HSC-T6 cells from S. chirayita8.2 化合物體外抗肝纖維化活性復(fù)篩對初篩顯示有抗肝纖維化體外活性的熊果酸和齊墩果酸兩個單體化合物整給藥濃度后復(fù)篩結(jié)果確定這兩種化合物具有體外抗肝纖維化的活性。詳見2，圖 2-2、2-3。
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2627033