【摘要】：本課題通過(guò)對(duì)黃芪皂苷類(lèi)成分提取純化工藝進(jìn)行優(yōu)化,建立高效、穩(wěn)定的皂苷類(lèi)提取、純化工藝,對(duì)皂苷類(lèi)成分體外抗病毒(柯薩奇B_5)情況進(jìn)行研究,對(duì)小鼠的免疫能力的影響進(jìn)行初步探討。研究?jī)?nèi)容包括:1.通過(guò)對(duì)黃芪提取溶劑的選擇,同時(shí)建立測(cè)定黃芪中總皂苷、黃芪甲苷成分含量的測(cè)定方法,建立方法穩(wěn)定可靠,能夠?qū)Ρ敬螌?shí)驗(yàn)黃芪中總皂苷及黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定;最終選定本課題的提取溶劑為水。2.通過(guò)正交試驗(yàn)的方法,確定黃芪提取工藝為加水煎煮2次,第一次加9倍量水,煎煮2小時(shí),第二次加7倍量水,煎煮1小時(shí);純化工藝采用磷酸氫二鉀-無(wú)水乙醇雙水相體系,對(duì)黃芪中的總皂苷進(jìn)行純化;最后采用聚酰胺柱對(duì)黃芪中總皂苷類(lèi)成分進(jìn)行分離,聚酰胺活化后每100ml上2.5g原藥(濕法裝柱濕法上樣),活化1h,用3BV的水、25%乙醇溶液、50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫,洗脫速度為1.0BV/h。結(jié)果藥材經(jīng)過(guò)提取純化工藝后,以黃芪甲苷為主要參考指標(biāo),黃芪甲苷的總轉(zhuǎn)移率為77.1%總皂苷的轉(zhuǎn)移率為73.3%,其中雙水相純化后的黃芪甲苷的轉(zhuǎn)移率為83.77%黃芪總苷的轉(zhuǎn)移率為84.32%,黃芪經(jīng)雙水相純化后總皂苷純度為46.02%。經(jīng)聚酰胺柱后黃芪甲苷的轉(zhuǎn)移率為92.05%黃芪總皂苷的轉(zhuǎn)移率為87.00%。經(jīng)過(guò)聚酰胺純化分離后總皂苷的純度為87.20%。3.引入“一測(cè)多評(píng)”法,以黃芪甲苷為內(nèi)參物,建立黃芪皂苷類(lèi)有效部位質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定,計(jì)算各成分的變量系數(shù),通過(guò)計(jì)算相對(duì)保留值和結(jié)果數(shù)據(jù)與外標(biāo)法結(jié)果進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果表明所建立的HPLC含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單可靠,能夠?qū)S芪中黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ、黃芪皂苷Ⅳ(黃芪甲苷)以及異黃芪皂苷Ⅰ、異黃芪皂苷Ⅱ的含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定。應(yīng)用“一測(cè)多評(píng)”法對(duì)黃芪中各皂苷成分進(jìn)行測(cè)定發(fā)現(xiàn)相對(duì)保留值的RSD偏高,但計(jì)算含量數(shù)據(jù)與外標(biāo)法無(wú)差異性。按照中國(guó)藥典一部2015年版對(duì)黃芪中黃芪甲苷的要求,要求黃芪按干燥品計(jì)算,含黃芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.040%。因此含黃芪皂苷Ⅰ不得少于0.031%、黃芪皂苷Ⅱ不得少于0.032%、黃芪皂苷Ⅲ不得少于0.014%、異黃芪皂苷Ⅰ不得少于0.022%、異黃芪皂苷Ⅱ不得少于0.024%。4.探究原藥、黃芪總皂苷成分(50%醇洗脫)、聚酰胺水流出成分對(duì)小鼠免疫功能的影響。結(jié)果為黃芪能夠顯著的提高小鼠機(jī)體的免疫能力,能夠促進(jìn)小鼠體內(nèi)免疫器官的增長(zhǎng)及細(xì)胞因子的含量的。表明黃芪皂苷類(lèi)成分能夠促進(jìn)小鼠的免疫能力。5.對(duì)原藥、黃芪總皂苷成分(50%醇洗脫組)、聚酰胺水洗脫成分進(jìn)行體外抗病毒研究,結(jié)果表明在體外抗病毒實(shí)驗(yàn)中原藥與黃芪總皂苷成分抗病毒效果明顯,在四項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用及抗病毒吸附作用的效果要優(yōu)于細(xì)胞增殖、直接抗病毒作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠證實(shí)黃芪皂苷類(lèi)成分體外抗柯薩奇(B_5)病毒作用。
【圖文】：

黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 2-2 黃芪甲苷全波長(zhǎng)掃描線性關(guān)系：精密移取對(duì)照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml 加入具塞中，按照 2.3.3 皂苷顯色方法顯色，，于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度 A。以吸 A 為縱坐標(biāo)，對(duì)照品含量為橫坐標(biāo)（mg/ml），得到回歸方程為：y=22.096x.0014，R2=0.9997，表明黃芪總皂苷在 5.6μg/mL-89.5μg /mL 的濃度范圍內(nèi)性關(guān)系如圖 2 所示。其不同溶劑提取液的總皂苷的結(jié)果見(jiàn)圖 2-3。
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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9 史同瑞;尹s

本文編號(hào)：2624796