【摘要】：利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、MCI柱色譜、C_(18)反相柱色譜、制備薄層色譜、C_(18)反相半制備型高效液相色譜法、重結(jié)晶法等多種色譜分離手段,從附子(Aconiti Lateralis Radix Praeparata)水提液正丁醇部位,分離純化得到16個化合物,通過NMR、MS等手段進行結(jié)構(gòu)鑒定了13個化合物,鑒定結(jié)果分別為Songorine(宋果靈,1)、Hetisine(2)、Neoline(尼奧靈,3)、Karacoline(多根烏頭堿,4)、Beiwucine III(5)、N-(2'-β-D-glucopyranosyl-5'-hydroxysalicyl)-4-hydroxyanthranilic acid methyl ester[N-(2'-β-D-吡喃葡萄糖基-5'-羥基水楊基)-4-羥基鄰氨基苯甲酸甲酯,6]、Adenosine(腺嘌呤核苷,7)、Adenine(腺嘌呤,8)、Carnine(次黃嘌呤核苷,9)、Hypoxanthine(次黃嘌呤,10)、Pennogenin(偏諾皂苷元,11)、2,3-Furandiol(2,3-呋喃二醇,12)、Benzoic acid(苯甲酸,13),14、15、16初步鑒定為2個木脂素苷和1個芳香族苷類成分,目前正在使用2D-NMR譜進行結(jié)構(gòu)確證,可能為3個新化合物。其中化合物11為首次從附子中分離得到的化合物類型,化合物12為首次從附子中分離得到的化合物。采用酸性染料比色法和高效液相色譜法,分別對附子七種炮制品及其水煎液中生物堿類成分進行分析。從化學(xué)成分的角度上,闡釋了附子炮制減毒和久煎減毒特性,分析不同炮制工藝對附子中生物堿類成分的影響。結(jié)果表明,通過炮制和久煎,不同炮制品均可顯著降低附子中雙酯型生物堿的含量,破壞率達95%以上。經(jīng)過膽巴制和漂洗可能會使附子中生物堿類成分大量流失,而未經(jīng)膽巴制和漂洗的品種則保留了更多生物堿類成分。選用心臟特異表達綠色熒光斑馬魚作為實驗動物,進一步對附子不同炮制品的水煎液、水煎液中總生物堿及單一生物堿類成分的毒性進行研究。結(jié)果表明,在給藥劑量(附子生藥量80 mg/mL)下,水煎液會造成斑馬魚心律失常和死亡,對斑馬魚軀體和心臟形態(tài)無顯著影響,與其中生物堿含量無相關(guān)性;水煎液中總生物堿對斑馬魚的毒性相對較低,主要造成降心率作用,但會造成斑馬魚輕微軀體彎曲、心包囊腫和充血。單一生物堿中,對斑馬魚胚胎毒性:雙酯型單酯型≈胺醇型,雙酯型生物堿毒性:新烏頭堿烏頭堿次烏頭堿,主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的心律失常,最高劑量組在給藥后24 h,斑馬魚出現(xiàn)瀕死狀態(tài)。此外,還會造成軀體彎曲、心包囊腫、充血、房室不齊和心室停搏。單酯型生物堿和胺醇型生物堿毒性較低,主要為降心率作用,對斑馬魚軀體和心臟形態(tài)均無明顯毒性。創(chuàng)新點:(1)從附子水煎液正丁醇部位分離純化得到16個單體化合物,鑒定出13,另外3個化合物初步鑒定為2個木脂素苷和1個芳香族苷,推測為新化合物。化合物11為首次從附子中分離得到的化合物類型,化合物12為首次從附子中分離得到的化合物。(2)從化學(xué)的角度,闡明炮制和久煎的減毒特性,提出影響附子不同炮制品生物堿類成分含量的關(guān)鍵工藝為膽巴制和漂洗工藝。(3)首次采用斑馬魚作為實驗動物對附子不同炮制品水煎液及其中總生物堿心臟毒性進行研究。(4)首次采用斑馬魚作為實驗動物對不同給藥時間和劑量的烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿、苯甲酰次烏頭堿、宋果靈、多根烏頭堿心臟毒性進行研究。
【圖文】：

色譜甲醇(美國 Fisher 公司)；甲醇、氨水、二氯甲烷、三氯甲烷均為分析自于成都市科龍化工試劑廠，水為實驗室自制超純水(電阻率 18.25 MΩ ℃)。顯色劑：碘化鉍鉀試液、10%硫酸乙醇試液。 提取與分離取生附片粉末 5.5 kg，，加 10 倍量水煎煮 5 次，每次 3 小時，紗布濾過濾液，減壓回收溶劑至一定體積，置于 5000 mL 分液漏斗中，加水飽和醇等體積萃取至上層液體近無色，分別減壓回收溶劑，得正丁醇部位和水部正丁醇部位(43 g)，加硅膠拌樣，進行硅膠柱(200～300 目，800 g，7.5×40譜分離，用三氯甲烷-甲醇(100:0-0:100)梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜檢測相似的流份，回收溶劑得到 13 個組分(AC-1～AC-13)。

圖 1-2AC-4 分離流程圖CI 柱色譜分離，0%-100%甲醇-水梯度洗脫，洗脫液相似的流份，回收溶劑得到六個亞組分(AC-5-1～hadex LH-20 葡聚糖凝膠柱色譜(三氯甲烷-甲醇 1:1色譜(二氯甲烷-甲醇 5:1 展開)純化，得到 1 (27 mg二氯甲烷-甲醇(100:0-0:100)梯度洗脫得到 2-6-26)，將 AC-5-6-5 經(jīng)過制備薄層色譜(二氯甲烷重結(jié)晶得到 11 (13 mg)。將 AC-5-6-11 經(jīng)過 Sepha(三氯甲烷-甲醇 1:1 洗脫)分離，再經(jīng)過重結(jié)晶得到
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R284;R285.5

【參考文獻】

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1 劉帥;劉曉艷;李妍;楊暢;劉秋雨;李飛;杜紅;;草烏及其炮制品的急性毒性實驗研究[J];中國藥物警戒;2015年09期

2 高鵬;李建榮;葉祖光;;附子黃芩配伍減毒存效研究[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年07期

3 高鵬;葉祖光;;附子大黃配伍減毒存效實驗研究[J];中藥新藥與臨床藥理;2014年05期

4 郭大樂;鄧峗;李秀茹;彭成;;生附片的化學(xué)成分研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2013年09期

5 雷軍;肖云川;劉淼;冉堅;黃靜;;點地梅中的兩個化學(xué)成分[J];中成藥;2013年08期

6 郭輝;劉曉;蔡皓;李[;吳麗;蔡寶昌;;大黃附子湯血清藥物化學(xué)初步研究[J];中草藥;2013年05期

7 劉帥;李飛;侯躍飛;楊暢;譚鵬;李向日;杜紅;;訶子中的鞣質(zhì)成分對訶子湯制草烏的影響——訶子制草烏炮制原理探討Ⅰ[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2013年05期

8 楊暢;李飛;侯躍飛;劉帥;譚鵬;李向日;杜紅;;訶子草烏配伍與訶子制草烏水煎液中生物堿含量的比較——訶子制草烏炮制原理探討Ⅱ[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2013年04期

9 章津銘;李玲;高飛;李瑩;何瑤;傅超美;;附子配伍甘草前后湯液沉積物的HPLC-MS化學(xué)組成分析[J];藥學(xué)學(xué)報;2012年11期

10 付瑩坤;謝雁鳴;;參附注射液臨床應(yīng)用及其不良反應(yīng)文獻分析[J];中國中藥雜志;2012年18期

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1 李瑩;基于生物藥劑學(xué)研究四逆湯中附子與甘草合煎減毒增效機制[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

2 謝曉芳;附子心臟毒作用機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

3 葉強;附子應(yīng)用環(huán)節(jié)活性物質(zhì)變化與熱性程度虛擬評價[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

4 周靜波;附子配伍甘草、大黃、干姜調(diào)控藥性物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2009年

5 李志勇;附子成分次烏頭堿心臟毒性及中毒機制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2008年

6 余成浩;烏頭類有毒中藥常用配伍藥對的物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2006年

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2 譚茂蘭;黑順片炮制過程中成分、熱性、藥效和毒性的變化研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 羅方利;延齡草化學(xué)成分的初步研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

4 何成軍;附子化學(xué)成分研究及益母草注射液化學(xué)成分研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

5 郝文婧;鐵棒錘生物堿部位化學(xué)成分研究及其抗腫瘤活性的初步篩選[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2014年

6 楊慧;經(jīng)方附子用量、炮制及量效關(guān)系的文獻研究[D];山西中醫(yī)學(xué)院;2013年

7 耿昭;附子化學(xué)成分研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2012年

8 韓旭;附子及新烏頭堿致心律失常機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

9 黃德超;火神派組方配伍規(guī)律研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2009年

本文編號：2623721