【摘要】：背景枇杷葉是薔薇科枇杷屬植物枇杷Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥葉,歸肺、胃經(jīng),具清肺止咳、降逆止嘔作用,用于治療胃熱嘔逆、氣逆喘氣、肺熱咳嗽、煩熱口渴。枇杷葉總黃酮作為天然藥物的一種,開發(fā)枇杷葉總黃酮對(duì)枇杷葉資源的綜合利用率具有非常重要的社會(huì)意義。因此,基于高得率、低成本、易操作等原則,優(yōu)選枇杷葉總黃酮的最佳提取工藝及純化工藝,制備較高純度的枇杷葉總黃酮,為枇杷葉總黃酮的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。目的(1)優(yōu)化枇杷葉總黃酮的提取工藝;(2)優(yōu)化枇杷葉總黃酮的純化工藝;(3)對(duì)枇杷葉總黃酮的化合物進(jìn)行鑒定;(4)探索枇杷葉總黃酮體外抗氧化活性。方法:(1)通過單因素試驗(yàn)篩選出提取溶劑、提取時(shí)間、提取次數(shù)等4個(gè)影響提取工藝的因素,再利用Box-Behnken響應(yīng)面分析法,以枇杷葉總黃酮提取量為考察指標(biāo),優(yōu)化得到最佳提取工藝;(2)通過單因素試驗(yàn)篩選出乙醇濃度、上樣體積、上樣液pH等3個(gè)影響純化工藝的因素,再利用Box-Behnken響應(yīng)面分析法,以枇杷葉總黃酮含量為考察指標(biāo),優(yōu)化得到最佳純化工藝;(3)采用顏色鑒別、LC-MS/MS等技術(shù)對(duì)枇杷葉總黃酮化合物進(jìn)行初步的鑒定;(4)采用普魯士藍(lán)法、鄰二氮菲法、DPPH法分別考察枇杷葉總黃酮的還原能力、羥基自由基清除能力、DPPH自由基的清除能力。結(jié)果(1)乙醇濃度、乙醇倍數(shù)對(duì)提取值影響非常顯著,模型最大值時(shí)的參數(shù):乙醇濃度為71.90%,乙醇倍數(shù)為10.58,提取時(shí)間為61.80min,提取次數(shù)為1.92次;(2)乙醇溶液洗脫對(duì)含量影響非常顯著,模型最大值時(shí)的參數(shù):乙醇濃度為45.75%,上樣體積為23.93,上樣液pH為3.84;(3)在鹽酸-鎂粉試驗(yàn)、三氯化鋁反應(yīng)、氨水反應(yīng)、紫外線照射反應(yīng)均呈現(xiàn)陽性反應(yīng)現(xiàn)象;LC-MS/MS分析結(jié)果顯示得到2個(gè)黃烷醇類、6個(gè)黃酮醇苷類、3個(gè)黃酮醇類、1個(gè)多羥基芪類等12個(gè)化合物。(4)清除DPPH自由基能力由強(qiáng)到弱排列:枇杷葉總黃酮枇杷葉總黃酮醇提取物抗壞血酸Vc。還原力由強(qiáng)到弱排列為抗壞血酸Vc枇杷葉總黃酮枇杷葉總黃酮醇提取物。枇杷葉總黃酮的清除羥基自由基能力與樣品濃度存在著良好的線性關(guān)系。結(jié)論(1)修正后的最佳提取工藝參數(shù):乙醇濃度定為72%,乙醇倍數(shù)為11,提取時(shí)間為62 min,提取2次。(2)修正后的最佳純化工藝參數(shù):乙醇濃度定為46%,上樣體積定為24 ml,上樣液pH定為3.8。(3)枇杷葉總黃酮含2個(gè)黃烷醇類、6個(gè)黃酮醇苷類、3個(gè)黃酮醇類、1個(gè)多羥基芪類等12個(gè)黃酮類化合物。(4)枇杷葉總黃酮的清除DPPH自由基能力和清除羥基自由基能力均優(yōu)于抗壞血酸Vc的。純化后的枇杷葉總黃酮,清除DPPH自由基能力、清除羥基自由基能力和還原力均明顯得到了改善。
【圖文】：

圖 1 蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 The standard curve of rutin見圖 1 所示，蘆丁的回歸方程為 Y=10.16X-0.0006，相關(guān)系數(shù)（r）為 0.9996，在091 mg/ mL 濃度范圍之內(nèi)，吸光度與蘆丁濃度成良好的線性關(guān)系。3 樣品中總黃酮含量的測(cè)定方法精密吸取供試品溶液 2.0 mL，同對(duì)照品測(cè)定方法，在紫外分光光度計(jì)上，，于 510處進(jìn)行測(cè)定吸光值，以吸光值（Y）為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度（X）為橫坐標(biāo)，根據(jù)回程計(jì)算樣品中總黃酮含量。試驗(yàn)設(shè)計(jì)1 單因素試驗(yàn)1.1 提取溶劑的考察取粉碎后的枇杷葉樣品 2 g，精密稱定，分別以一系列濃度的乙醇溶液為提取溶

（%）（A）（mg/mL）（mg）0 0.198 0.020 2.44310 0.214 0.021 2.64020 0.275 0.027 3.39130 0.341 0.034 4.20340 0.372 0.037 4.58450 0.402 0.040 4.95360 0.436 0.043 5.37270 0.452 0.045 5.56880 0.441 0.044 5.43390 0.361 0.036 4.44995 0.346 0.034 4.264：濃度值及提取量值均保留小數(shù)點(diǎn)后三位
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.2

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本文編號(hào)：2620111