【摘要】：目的:頭頸部鱗狀細(xì)胞癌是頭頸部惡性腫瘤中最常見的類型,位居惡性腫瘤的第6位,包括口腔、咽部、喉部、鼻腔、鼻竇等部位的惡性腫瘤,世界上每年約新增50萬例患者。頭頸部鱗狀細(xì)胞癌多發(fā)生于口腔、咽喉部的黏膜,發(fā)病部位較隱匿,臨床上早期癥狀不典型,又缺少能夠早期發(fā)現(xiàn)病變的生物標(biāo)記物,因此不易被早期發(fā)現(xiàn),超過半數(shù)以上的頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者都是在病變中晚期的時候才被發(fā)現(xiàn),這時多數(shù)患者已出現(xiàn)淋巴結(jié)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,給該病的臨床治療帶來較大困難。盡管外科手術(shù)、放射治療在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌治療中占據(jù)重要地位,且技術(shù)取得較大的進(jìn)步,該病預(yù)后仍然較差,5年生存率低于50%。因此化學(xué)治療仍然是臨床治療頭頸部鱗狀細(xì)胞癌必不可少的治療手段,尋找高效、毒副作用小、靶向作用強(qiáng)的化療藥物顯得尤為重要。細(xì)胞內(nèi)蓄積的鐵過多,催化產(chǎn)生有毒的活性氧物質(zhì)自由基等,而過量的自由基會通過DNA氧化、線粒體損傷、膜脂過氧化等作用破壞細(xì)胞的蛋白質(zhì)和脂質(zhì),使細(xì)胞骨架遭到破壞,導(dǎo)致細(xì)胞基因突變和損害。鐵螯合劑能夠螯合細(xì)胞內(nèi)過多的鐵,剝奪細(xì)胞內(nèi)的鐵,從而抑制高度依賴鐵的核糖核苷酸還原酶的活性,進(jìn)一步影響細(xì)胞DNA的合成和修復(fù)。另外其它一些受到細(xì)胞內(nèi)鐵離子水平調(diào)控的基因也會因鐵螯合劑剝奪細(xì)胞內(nèi)鐵受到影響,例如細(xì)胞周期依賴性蛋白激酶及其缺氧誘導(dǎo)因子a、細(xì)胞周期蛋白和一些抑癌基因p53等。鐵螯合劑的這些作用能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長增殖,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡。豆科含羞草屬植物含羞草提取物左旋含羞草堿是一種植物氨基酸,具有與胸腺嘧啶高度相似的結(jié)構(gòu),能夠抑制腫瘤細(xì)胞的周期,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,具有抗腫瘤活性,但其具體抗腫瘤機(jī)制尚不清楚,本實驗?zāi)康脑谟谘芯孔笮卟輭A能否誘導(dǎo)頭頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞發(fā)生凋亡以及左旋含羞草堿促進(jìn)頭頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法:選擇人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞株、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞株和人正常肝細(xì)胞L-02細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)和傳代,觀察左旋含羞草堿對每種細(xì)胞生長增殖的影響,運用流式細(xì)胞儀檢測不同濃度左旋含羞草堿對人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞和人正常肝細(xì)胞L-02細(xì)胞凋亡的影響,以及檸檬酸鐵銨對左旋含羞草堿促進(jìn)人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞凋亡的影響。采用CCK-8法檢測不同濃度左旋含羞草堿處理人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞后細(xì)胞的生長活性,以及檸檬酸鐵銨對左旋含羞草堿這種作用的干擾。利用熒光顯微鏡觀察不同濃度左旋含羞草堿處理人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞株后Caspase3/7的活性。Western blot法被用來檢測不同濃度左旋含羞草堿干預(yù)人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞株后,Bax,Bak,Bid,Bik,PI3kp110a,PI3kp110b,p-GSK3b,p-P38,NFkBp65,p-ERK,p-JNK,p-Histone-H2AX,p-mTOR,p-ATM等相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:左旋含羞草堿對人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞的生長有抑制作用,左旋含羞草堿能夠誘導(dǎo)人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞的凋亡,且具有濃度依賴性。適量的檸檬酸鐵銨能夠抑制左旋含羞草堿促進(jìn)人咽鱗狀細(xì)胞癌FaDu細(xì)胞、人舌鱗狀細(xì)胞癌Cal-27細(xì)胞凋亡的作用;隨著作用于FaDu細(xì)胞的左旋含羞草堿濃度的增加,Bcl-2、p-ATR蛋白表達(dá)水平降低,Bax、Bak、Bid、Bik、PI3kp110a、PI3kp110b、p-GSK3b、p-P38、NFkBp65、p-ERK、p-JNK、p-Histone-H2AX、p-mTOR、p-ATM 等蛋白表達(dá)水平升高。結(jié)論:左旋含羞草堿能夠誘導(dǎo)人頭頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡,其誘導(dǎo)凋亡的作用機(jī)制可能是通過鐵螯合作用,干擾細(xì)胞內(nèi)鐵代謝,引起人頭頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的DNA損傷,進(jìn)而抑制細(xì)胞的DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄,最終引起腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【圖文】：

武漢大學(xué)博±學(xué)位論文終濃度為０、１００、２００、４００咖的左旋含羞草堿分別作用于人咽淲ａＤｕ細(xì)胞、人舌淲狀細(xì)胞癌Ｃａ＾２７細(xì)胞后，運用流式細(xì)胞儀檢測兩種水平，結(jié)果顯示隨著左旋含羞草堿的濃度的升高，人咽淲狀細(xì)胞癌ＦａＤ舌淲狀細(xì)胞癌Ｃａ＾２７細(xì)胞的調(diào)亡率也隨之明顯升高，見圖１；終濃度為００、１０００、１加０ＰＭ的左旋含羞草堿分別作用于人正常肝細(xì)胞ｋ０２細(xì)細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的調(diào)亡，結(jié)果隨著左旋含羞草堿的濃度升高，人正0２細(xì)胞的調(diào)亡率無顯著變化，見圖２。逡逑ＦａＤｕ邐ＯｕＭ邐１００ｕＭ邐２００ｕＭ邐４００ｕＭ逡逑

武漢大學(xué)博±學(xué)位論文終濃度為０、１００、２００、４００咖的左旋含羞草堿分別作用于人咽淲ａＤｕ細(xì)胞、人舌淲狀細(xì)胞癌Ｃａ＾２７細(xì)胞后，運用流式細(xì)胞儀檢測兩種水平，結(jié)果顯示隨著左旋含羞草堿的濃度的升高，人咽淲狀細(xì)胞癌ＦａＤ舌淲狀細(xì)胞癌Ｃａ＾２７細(xì)胞的調(diào)亡率也隨之明顯升高，見圖１；終濃度為００、１０００、１加０ＰＭ的左旋含羞草堿分別作用于人正常肝細(xì)胞ｋ０２細(xì)細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的調(diào)亡，，結(jié)果隨著左旋含羞草堿的濃度升高，人正0２細(xì)胞的調(diào)亡率無顯著變化，見圖２。逡逑ＦａＤｕ邐ＯｕＭ邐１００ｕＭ邐２００ｕＭ邐４００ｕＭ逡逑
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2619802