【摘要】：EMT是肝癌轉(zhuǎn)移中至關(guān)重要的過程。QKI是STAR家族的RNA結(jié)合蛋白,能夠促進(jìn)腫瘤的EMT,但QKI在肝癌中的激活機(jī)制現(xiàn)在尚不明確。YY1是與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子,數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)YY1能夠結(jié)合QKI的啟動(dòng)子。我們?cè)噲D闡明在肝癌中YY1對(duì)QKI的調(diào)控機(jī)制,并以此為靶點(diǎn)開發(fā)一種新型的治療方法和手段。本研究首先分析了QKI在肝癌中的表達(dá)情況及與預(yù)后的關(guān)系,臨床數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)QKI在肝癌里高表達(dá),且QKI高表達(dá)的病人預(yù)后差。同時(shí),通過FPLC和Co-IP等蛋白互作實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)YY1,p65和p300能形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體,進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)YY1結(jié)合到QKI的超級(jí)增強(qiáng)子,p65結(jié)合到QKI的啟動(dòng)子上,借助p300的僑聯(lián)作用形成一個(gè)穩(wěn)定的三元復(fù)合體,激活QKI的轉(zhuǎn)錄,并進(jìn)一步的促進(jìn)肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。另外,利用虛擬篩選,我們篩選出了YY1復(fù)合體的界面互作抑制劑金絲桃苷,進(jìn)一步細(xì)胞水平和動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)證明金絲桃苷能有效抑制YY1復(fù)合體的活性,抑制QKI的表達(dá),進(jìn)一步抑制肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移,從而達(dá)到抗腫瘤的效果,為肝癌的治療提供了新方向。
【圖文】：

QKI在代謝方面的作用第三節(jié)YY1和p65的研究進(jìn)展

3.加入細(xì)胞裂解液 50 μl，660 rpm 震蕩 15 min。4. 將各孔中的細(xì)胞裂解液取 45 μl 轉(zhuǎn)移至白板中，每孔內(nèi)加入 50 μl 螢火物，660 rpm 震蕩 10 s，酶標(biāo)儀檢測(cè)光吸收值 3 次。5. 加入 50 μl Stop&Glo 底物，660 rpm 震蕩 10 s 后酶標(biāo)儀檢測(cè)光吸收。1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.3.1 YY1 對(duì) QKI 的調(diào)控初步驗(yàn)證為了探討 YY1 對(duì) QKI 的調(diào)控機(jī)制，首先在 Chipbase 數(shù)據(jù)庫中分析發(fā)現(xiàn) Y夠直接結(jié)合 QKI 啟動(dòng)子，Chip-PCR 結(jié)果也表明 YY1 可以成功釣取 QKI，如圖 2.1A。接下來在 PLC-PRF-5，HepG2，，SMMC-7721 三種細(xì)胞系中，利熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)了 YY1 對(duì) QKI 的調(diào)控作用，結(jié)果顯示在五種肝胞系中 YY1 對(duì) QKI 均有不同程度的上調(diào)作用，其中在 PLC-PRF-5 中的調(diào)用最為明顯（圖 2.1 B）。
【學(xué)位授予單位】：南開大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2616494