【摘要】：本研究比較了福建省五種紅藻資源中藻膽蛋白的含量,選擇藻紅蛋白含量最高的紅毛菜作為提取材料。為充分釋放紅毛菜中的藻紅蛋白,本研究比較了五種不同的提取方法,分別為凍融法、雙酶解法、單酶解法(纖維素酶和果膠酶)、振蕩法和超聲法。結(jié)果顯示雙酶解法能夠從紅毛菜中提取出更多的藻紅蛋白。為確定雙酶解法的最優(yōu)提取條件,對(duì)其做進(jìn)一步單因素優(yōu)化。結(jié)果為固液比1:50,提取時(shí)間5 h,提取2次,最終獲得藻紅蛋白34.4 mg/g,純度為0.23。采用10 kDa分子量的中空纖維膜對(duì)藻紅蛋白粗提取液進(jìn)行超濾濃縮,獲得純度為1.10的藻紅蛋白濃縮液。濃縮液經(jīng)飽和度分別為25%和45%的(NH4)2SO4沉淀,獲得純度為1.40的藻紅蛋白預(yù)處理液。為獲得純度更高的藻紅蛋白,本研究比較了四種不同的層析色譜柱,最終選擇DEAE Sepharose FF純化藻紅蛋白。采用0.01 mol/L的PBS緩沖液(pH7.0,含0-0.6mol/LNaCl)進(jìn)行線性洗脫,最終得到純度為3.11的醫(yī)藥級(jí)藻紅蛋白。純化獲得的藻紅蛋白采用SDS-PAGE進(jìn)行表征。SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,紅毛菜藻紅蛋白含有兩種不同的亞基,即a和p,分子量為15.0 kDa和19.5 kDa,并未發(fā)現(xiàn)γ亞基。光譜圖呈現(xiàn)三個(gè)特征吸收峰,分別為500、557和617 nm。熒光光譜圖則有兩個(gè)發(fā)射峰,分別為574和640 nm。本研究評(píng)估了紅毛菜藻紅蛋白的抗氧化活性,綜合分析了藻紅蛋白清除DPPH自由基、超氧自由基、羥自由基的能力以及總還原能力。結(jié)果表明藻紅蛋白有著較好的抗氧化活性,其中清除DPPH自由基的IC50值為0.30 mg/mL,清除超氧自由基的IC50值為0.26 mg/mL,清除羥自由基的IC50值為2.60 mg/mL。研究發(fā)現(xiàn)pH、溫度、光線等會(huì)影響藻紅蛋白的穩(wěn)定性。紅毛菜藻紅蛋白在4-30℃,pH 3-9,避光的條件下能夠保持較好的穩(wěn)定性。本研究初步探索了紅毛菜藻紅蛋白在熒光探針?lè)矫娴膽?yīng)用,建立起快速檢測(cè)的模型。該模型是以二極管為激發(fā)光源,光線透過(guò)濾光片,使得557 nm波長(zhǎng)下的光線對(duì)紅毛菜藻紅蛋白進(jìn)行照射,即為激發(fā)。藻紅蛋白因此發(fā)射出具備特定波長(zhǎng)的熒光。熒光信號(hào)透過(guò)能夠?yàn)V過(guò)特定波長(zhǎng)的窄帶濾光片后,被微型照相機(jī)記錄。經(jīng)過(guò)一系列探索,建立起藻紅蛋白濃度與熒光強(qiáng)度RGB值之間的線性關(guān)系式,R2達(dá)到0.9962,最低檢測(cè)限為0.04 mg/mL。這為藻紅蛋白作為熒光探針的快速檢測(cè)奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

藻膽體這種超分子復(fù)合物是由無(wú)色連接蛋白多肽和共價(jià)連接了色素團(tuán)的藻膽逡逑白（？１１＞＾0１）丨１中１＊０＾１１）組成，是紅藻、藍(lán)藻和灰藻中主要的捕光天線［７５，８８，，８９］。由逡逑載體蛋白連接著開鏈有色化合物膽色素，藻膽蛋白帶有明亮的顏色［９（）］，其連接逡逑式如圖１－２所示。根據(jù)光譜特性將早藻膽蛋白劃分為四種主要類型，分別是藻藍(lán)逡逑

色素（Ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｎｓ）是一種線性開鏈的四吡咯結(jié)構(gòu)。目前己知的藻膽色素有逡逑紅素（Ｒｅｄ邋ｃｏｌｏｒｅｄ邋ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｏｂｉｌｉｎ，邋ＰＥＢ）、藍(lán)色藻藍(lán)素（Ｂｌｕｅ邋ｃｏｌｏｒｅｄ逡逑ｎｏｂｉｌｉｎ，ＰＣＢ）、紫色藻紫素（Ｐｈｙｃｏｂｉｌｉｖｉｏｌｉｎ）和黃色藻尿膽素逡逑ｂｉｌｉｎ，ＰＵＢ）。紅藻中的ＰＣ有兩種類型，分別是只含有ＰＣＢ的Ｃ－ＰＣ逡逑有ＰＣＢ和ＰＥＢ的Ｒ－ＰＣ［９１］。除過(guò)一些特殊的種類，ＰＥ是紅藻中最多的一逡逑白。由于共價(jià)鍵合著ＰＥＢ和ＰＵＢ，邋ＰＥ呈現(xiàn)紅色［９１］。Ｇｌａｚｅｒ［９９］等人報(bào)道淡逡逑杜藻中的ＰＥ通常連接著生色團(tuán)ＰＣＢ。紅藻中的ＰＥ有著較為穩(wěn)定的光譜逡逑且在局部條件發(fā)生變化的情況下，仍能保持該特性［１（Ｗ］。根據(jù)吸收光譜圖逡逑Ｒ－ＰＥ主型，一型有三個(gè)吸收峰類型Ｉ，另一種類逡逑
【學(xué)位授予單位】：福州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R284.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉婷;沈建東;劉光明;藍(lán)偉光;曹敏杰;;紅毛藻R-藻紅蛋白的高效制備以及抗體標(biāo)記與檢測(cè)[J];食品工業(yè)科技;2012年17期

2 劉書來(lái);鄭蔚然;丁玉庭;;壇紫菜R-藻紅蛋白的穩(wěn)定性研究[J];食品工業(yè)科技;2011年09期

3 周林;胡金梅;郭祀遠(yuǎn);;B-藻紅蛋白在表面活性劑中的光譜性質(zhì)[J];化學(xué)試劑;2009年06期

4 胡金梅;魏東;郭祀遠(yuǎn);陳峰;;一步柱層析純化B-藻紅蛋白及其毛細(xì)管電泳結(jié)合激光誘導(dǎo)檢測(cè)[J];食品科學(xué);2006年09期

5 陳小強(qiáng),史鋒,龔興國(guó);R-藻紅蛋白的結(jié)構(gòu)、功能及其應(yīng)用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2004年04期

6 王廣策,孫海寶,范曉,曾呈奎;用膨化柱填料的方法從紅藻中規(guī)模分離純化R-藻紅蛋白(英)[J];Acta Botanica Sinica;2002年05期

7 王廣策,曾呈奎;紫球藻兩種藻紅蛋白特性的比較研究——γ亞基在穩(wěn)定藻紅蛋白結(jié)構(gòu)方面的作用[J];海洋與湖沼;2001年06期

8 溫少紅,趙呈龍,張莉萍;紫球藻B-藻紅蛋白的分離純化[J];中國(guó)海洋藥物;2001年03期

9 隋正紅,張學(xué)成;藻紅蛋白研究進(jìn)展[J];海洋科學(xué);1998年04期

10 王廣策,周百成,曾呈奎;B-藻紅蛋白和R-藻紅蛋白γ亞基的分離、特性及其在分子中的空間位置分析[J];中國(guó)科學(xué)C輯:生命科學(xué);1998年01期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 伍強(qiáng);劉光明;孫樂(lè)常;蔡秋鳳;翁凌;曹敏杰;;R-藻紅蛋白的抗氧化活性及其抗氧化肽[A];2014年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2014年

2 吳義誠(chéng);陳必鏈;王明茲;;紫球藻藻紅蛋白β亞基基因的克隆及其在畢赤酵母中的表達(dá)[A];慶祝中國(guó)藻類學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

3 劉煥珍;王娟;陳必鏈;;紫球藻藻紅蛋白穩(wěn)定性的研究[A];慶祝中國(guó)藻類學(xué)會(huì)成立30周年暨第十五次學(xué)術(shù)討論會(huì)摘要集[C];2009年

4 王靜;高世勇;;藻紅蛋白的研究進(jìn)展[A];第十屆全國(guó)藥用植物及植物藥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2011年

5 隋正紅;張學(xué)成;;龍須菜色素突變體藻紅蛋白基因的克隆及分析[A];中國(guó)藻類學(xué)會(huì)第十一次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

6 馬圣媛;王廣策;孫海寶;曾呈奎;;球藻藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白共價(jià)交聯(lián)物的構(gòu)建及其與天然藻膽體特性的比較研究[A];中國(guó)藻類學(xué)會(huì)第十一次學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

7 馬圣媛;王廣策;孫海寶;曾呈奎;;紫球藻藻紅蛋白和藻藍(lán)蛋白共價(jià)交聯(lián)物的構(gòu)建及其與天然藻膽體特性的比較研究[A];中國(guó)科學(xué)院海洋科學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)暨2001年海洋湖沼科學(xué)青年學(xué)者論壇論文摘要集[C];2001年

8 謝雪瓊;鐘嬋;劉光明;曹敏杰;;利用壇紫菜藻紅蛋白制備脯氨酰內(nèi)肽酶抑制肽的研究[A];華東地區(qū)生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)2017年學(xué)術(shù)交流會(huì)暨安徽省生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)理事會(huì)議論文集[C];2017年

9 劉婷;蔡秋鳳;沈建東;曹敏杰;;藻紅蛋白制備熒光標(biāo)記物的研究[A];中國(guó)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)會(huì)第八屆年會(huì)暨第六屆東西方食品業(yè)高層論壇論文摘要集[C];2011年

10 劉婷;沈建東;蔡秋鳳;曹敏杰;;藻紅蛋白制備抗體熒光標(biāo)記物的研究[A];漁業(yè)科技創(chuàng)新與發(fā)展方式轉(zhuǎn)變——2011年中國(guó)水產(chǎn)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 隋正紅;龍須菜藻紅蛋白基因的研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2001年

2 牛建峰;海洋藻類功能性蛋白質(zhì)的純化、鑒定及其應(yīng)用的研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2007年

3 趙明日;多管藻藻紅蛋白與藻膽體的特性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2015年

4 王盛;珊瑚藻藻紅蛋白的分離純化與相關(guān)特性[D];福建農(nóng)林大學(xué);2002年

5 蔡春爾;條斑紫菜藻紅蛋白規(guī)模制備、結(jié)構(gòu)鑒定及抗腫瘤研究[D];上海海洋大學(xué);2011年

6 陳煜;藍(lán)細(xì)菌光敏色素及藻紅蛋白的生物合成研究[D];華中科技大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐遠(yuǎn)超;紫球藻培養(yǎng)及合成藻紅蛋白工藝研究[D];齊魯工業(yè)大學(xué);2019年

2 付永鑫;基于納米復(fù)合物比率熒光探針的制備與熒光可視化檢測(cè)研究[D];青島大學(xué);2019年

3 任寧娜;藻紅蛋白的新分析特性研究及應(yīng)用[D];上海海洋大學(xué);2019年

4 張文怡;紅藻中藻膽蛋白的分離純化及應(yīng)用[D];福州大學(xué);2018年

5 刁海平;海生紅藻多管藻藻膽體棒亞結(jié)構(gòu)域中R-藻紅蛋白的研究[D];煙臺(tái)大學(xué);2019年

6 鄭彩云;藻紅蛋白在大腸桿菌中的異源高效生物合成[D];江蘇科技大學(xué);2018年

7 鄭蔚然;壇紫菜R-藻紅蛋白的分離純化及其穩(wěn)定性研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2008年

8 劉婷;藻紅蛋白制備熒光標(biāo)記物的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究[D];集美大學(xué);2012年

9 顧麗;條斑紫菜（Porphyra yezoensis）R-藻紅蛋白的制備及其抗氧化、抗腫瘤活性研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

10 趙殿鋒;條斑紫菜（Porphyra yezoensis）R-藻紅蛋白的生物修飾及活性保護(hù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2616259