【摘要】：目的:觀察熊果酸(UA)對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞(HASMC)增殖及GRIM-19、pSTAT3、Cyclin D1蛋白的表達(dá)的影響,探討三者與人主動脈血管平滑肌細(xì)胞增殖的相關(guān)性,闡釋熊果酸對人主動脈血管平滑肌細(xì)胞的作用及可能機(jī)制。方法:復(fù)制高脂血清誘導(dǎo)的HASMC增殖模型,分為:正常組、15%高脂血清組、20%高脂血清組、UA給藥組(10μM,20μM,30μM),采用CCK8方法檢測不同時間點(diǎn)HASMC的增殖活性;RT-PCR和Western Blot方法檢測各組細(xì)胞GRIM-19、STAT3/p-STAT3、Cyclin-D1的m RNA及蛋白水平;應(yīng)用RNA干擾和質(zhì)粒過表達(dá)技術(shù),驗證信號分子間的級聯(lián)關(guān)系;WB技術(shù)檢測干擾效率和目的蛋白表達(dá)及干擾和過表達(dá)GRIM-19后,HASMC中GRIM-19、p-STAT3、Cyclin-D1蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果:(1)CCK8檢測結(jié)果顯示,15%高脂血清培養(yǎng)HASMC 24h可顯著提高細(xì)胞增殖率;分別加入UA(10μM、20μM、30μM)作用12h,均有明顯的細(xì)胞抑制作用,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)m RNA和蛋白水平上,與模型組相比,正常組中內(nèi)源性GRIM-19的表達(dá)高于模型組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);(3)正常組中內(nèi)源性GRIM-19呈現(xiàn)高表達(dá),同時伴隨有p-STAT3和Cyclin D1出現(xiàn)低表達(dá);增殖組中內(nèi)源性GRIM-19出現(xiàn)低表達(dá),與此同時伴隨有p-STAT3和Cyclin D1出現(xiàn)高表達(dá),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(4)UA作用于HASMC后,較增殖組相比,加藥組中內(nèi)源性GRIM-19蛋白表達(dá)增高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(5)加入p-STAT3抑制劑后,Cyclin D1蛋白表達(dá)水平降低,結(jié)果提示p-STAT3很可能是Cyclin D1的上游;(6)si RNA沉默GRIM-19后,p-STAT3蛋白水平和Cyclin D1蛋白水平表達(dá)均呈現(xiàn)增高趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和Cyclin D1;(7)轉(zhuǎn)染GRIM-19過表達(dá)質(zhì)粒后,p-STAT3和Cyclin D1蛋白水平表達(dá)明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),進(jìn)一步提示GRIM-19負(fù)向調(diào)控p-STAT3和Cyclin D1蛋白的表達(dá)。結(jié)論:(1)HASMC中存在內(nèi)源性GRIM-19蛋白的表達(dá);(2)內(nèi)源性GRIM-19與HASMC細(xì)胞的增殖有關(guān)系;(3)UA可能是通過上調(diào)內(nèi)源性GRIM-19在HASMC中的表達(dá)下調(diào)下游p-STAT3、Cyclin D1的表達(dá)從而抑制HASMC增殖而起到抑制AS發(fā)生發(fā)展的作用。上述研究結(jié)果為UA治療AS在臨床上的應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
【圖文】：

呈現(xiàn)出谷峰狀生長趨勢。這些直接觀察到的形態(tài)特征與血管平滑肌細(xì)胞的形態(tài)特征相吻合（見圖3.1），，為實(shí)驗研究提供基礎(chǔ)。圖 3.1 倒置顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)(200×)注：圖為正常培養(yǎng)的人主動脈血管平滑肌細(xì)胞，貼壁生長 6h 后置于倒置熒光顯微鏡下觀察。

圖 3.2 共聚焦顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)養(yǎng)的細(xì)胞采用特異的平滑肌細(xì)胞表面標(biāo)志物 A-actin 細(xì)胞免疫熒光染色和焦顯微鏡下觀察，綠色為細(xì)胞漿內(nèi)的纖維細(xì)絲即平滑肌 a 肌動蛋白絲；藍(lán)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 錢金鋒;楊其昌;謝慧君;張曉娟;沈屹;高翠玉;;CyclinD1和Survivin在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中的表達(dá)及意義[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2016年11期

2 張明發(fā);沈雅琴;;熊果酸和齊墩果酸抗腦瘤作用的研究進(jìn)展[J];藥物評價研究;2016年01期

3 袁向珍;張越;曹中朝;包秋紅;;卡維地洛對大鼠頸動脈損傷后VSMCs遷移和增殖的影響[J];內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志;2015年01期

4 李麗娟;楊艷;王樹人;;同型半胱氨酸對血管平滑肌細(xì)胞增殖的影響[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2010年24期

5 侯靜;唐大年;許媛;賀修文;韋軍民;;STAT3抑制劑對人原發(fā)性肝癌細(xì)胞生長的影響[J];中華實(shí)驗外科雜志;2010年12期

6 榮國華;李哲;金廣超;馬國輝;孫濤;田斌;陳連勝;劉惠萍;王曉;;GRIM-19蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)及其意義[J];中國普通外科雜志;2010年11期

7 鐘振國;黃金蘭;梁紅;鐘益寧;張雯艷;吳登攀;曾春蘭;王進(jìn)聲;韋勇漢;;余甘子葉化學(xué)成分沒食子酸對人肝癌BEL-7404細(xì)胞株凋亡的影響[J];中藥材;2009年07期

8 周愛民;趙繼京;葉靜;肖衛(wèi)華;Dhananjaya V.KalvakolanU;劉榮玉;;GRIM-19蛋白在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J];癌癥;2009年04期

9 姚聲濤;陳佳琳;黃軼;郭川;唐文淵;;腺病毒介導(dǎo)GRIM19對惡性膠質(zhì)瘤CHG-5細(xì)胞增殖及分化的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2009年06期

10 甄會蓮;余謙;;中醫(yī)藥誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡研究概況[J];甘肅中醫(yī);2007年09期

本文編號：2614404