【摘要】：阿爾茲海默癥(Alzheimer's disease,AD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,表現(xiàn)為認(rèn)知損傷和漸進(jìn)性記憶障礙,其主要的病理特征是胞外β淀粉樣蛋白(pamyloidβ,Aβ)沉積形成老年斑和胞內(nèi)tau蛋白超磷酸化形成神經(jīng)纖維纏結(jié)以及腦皮層神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量的減少。AD發(fā)病的病理機(jī)制非常復(fù)雜,與多種信號通路和因素有關(guān),如Aβ、tau蛋白、神經(jīng)元損傷、慢性炎癥等。在眾多發(fā)病機(jī)制中,阿爾茲海默癥的發(fā)生和發(fā)展與腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的慢性神經(jīng)炎癥有重要聯(lián)系,從而受到廣泛的關(guān)注和研究。研究目的:課題組前期研究表明,當(dāng)歸芍藥散(Danggui-Shaoyao-San,DSS)能明顯改善D-半乳糖聯(lián)合AlCl_3引起所致的癡呆小鼠海馬區(qū)皮質(zhì)、神經(jīng)元細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的損傷,在改善神經(jīng)元細(xì)胞之間的連接、神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)、改善多種細(xì)胞器功能以及增加突觸數(shù)量等方面,都有一定的作用。但目前少見其在神經(jīng)炎癥方面的作用進(jìn)行詳細(xì)的研究,本研究通過DSS對Aβ誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)炎癥反應(yīng)及對其介導(dǎo)的炎癥通路TLR4/NF-κB信號通路的影響,以揭示DSS是否通過該通路影響AD的機(jī)制。研究方法:本研究通過(1)對C57BL/10JNju小鼠腦定位注射Aβ_(1-42)建立老年癡呆模型,連續(xù)4周灌胃給予DSS(2g(生藥)/mL)。(2)通過測定Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)來檢測DSS對Aβ_(1-42)誘導(dǎo)AD小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響;(3)采用HE染色及尼氏染色法觀察腦組織病理學(xué)變化來檢測小鼠腦組織形態(tài)的改變;采用免疫組化法觀察腦組織CD11b的表達(dá)來反映小膠質(zhì)細(xì)胞激活的程度;(4)RT-PCR檢測神經(jīng)炎癥相關(guān)蛋白mRNA的表達(dá);(5)Western blot檢測TLR4/NF-κB信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。隨后采用TLR4基因敲除C57BL/10ScNJNju小鼠同樣給予Aβ_(1-42)注射建立AD小鼠模型,給予DSS灌胃后,采用相同的實(shí)驗(yàn)方法來探討DSS與TLR4/NF-κB信號通路的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:第一部分當(dāng)歸芍藥散對老年癡呆模型小鼠實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示:DSS能夠改善Aβ_(1-42)建立AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,水迷宮的逃避潛伏期明顯縮短;病理組織學(xué)結(jié)果顯示DSS能夠改善AD小鼠腦組織形態(tài)的改變,增強(qiáng)細(xì)胞活力。免疫組化顯示DSS能減少小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。進(jìn)一步研究表明DSS能降低AD鼠腦組織中TLR4mRNA的表達(dá),增加IκBmRNA的表達(dá)�？梢越档湍X組織中TLR4、p-P65蛋白的表達(dá),提高IκB蛋白的表達(dá),降低AD小鼠腦中P65蛋白磷酸化水平。結(jié)果提示,DSS可以提高AD小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,減少腦中的炎癥反應(yīng),其機(jī)制可能與抑制TLR4/NF-κB信號通路的激活有關(guān)。實(shí)驗(yàn)二當(dāng)歸芍藥散對TLR4缺失老年癡呆模型小鼠實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示:研究對TLR4基因敲除的小鼠進(jìn)行Aβ_(1-42)注射后,小鼠學(xué)習(xí)記憶能力受到影響,水迷宮的潛伏期明顯增加,給予DSS后水迷宮潛伏期縮短。病理組織學(xué)結(jié)果顯示模型組腦中錐體細(xì)胞排列松散,給予DSS后,錐體細(xì)胞排列稍緊密。免疫組化顯示DSS能刺激TLR4缺失AD小鼠腦中小膠質(zhì)細(xì)胞的激活。模型組小鼠腦中IκB蛋白的表達(dá)上調(diào),p-P65、p-JNK蛋白的表達(dá)下調(diào),而給予DSS后IκB蛋白的表達(dá)下調(diào),p-P65、p-JNK蛋白的表達(dá)上調(diào)。提示TLR4蛋白的缺失導(dǎo)致Aβ_(1-42)無法激活TLR4/NF-κB信號通路,從而導(dǎo)致小鼠腦中P-65、p-JNK蛋白磷酸化水平的下降。基于小膠質(zhì)細(xì)胞的雙重作用,缺失TLR4的情況下,結(jié)合水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果,DSS有可能通過其他旁路激活腦部的小膠質(zhì)細(xì)胞來吞噬Aβ_(1-42)并減輕其帶來的腦部炎癥損傷。
【圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文（0.08mL/10g），等待小鼠麻醉后，將其安穩(wěn)固定在腦定位儀上發(fā)，用碘酊消毒后做 0.8cm 左右的縱向切口。結(jié)合 George 圖譜前鹵后 2.2mm，中線左右各旁開 2.0mm，用顱鉆鉆開顱骨，小膜，用 10μL 微量注射器自腦表面進(jìn)針 2.2mm，每側(cè)腦用時 51-42溶液，注射后留針 5min，之后用 1min 緩慢撤針（注射位置為 CA1 區(qū)），，正常對照組注射等量的滅菌生理鹽水，傷口消毒后進(jìn)

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文表 2.1 各組小鼠 MWM 逃避潛伏期（ x±s，n=8）別 Day1 Day2 Day3 Day4 Day5BK90.0±0.085.3±13.3 76.4±23.5 68.2±29.0 34.6±29.BM90.0±0.090.0±0.0 90.0±0.0*83.8±13.0**54.3±27.BG90.0±0.082.8±10.6 72.0±25.0#51.4±21.4##21.4±14.注：與正常組比較*P<0.05,**P<0.01；與模型組比#P<0.05,##P<0.01
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2610966